在重组毕赤酵母中高效表达抗菌肽NZ2114的方法技术

本发明专利技术提供一种在重组毕赤酵母中高效表达抗菌肽NZ2114的方法，通过构建含有经过酵母偏爱密码子优化编码抗菌肽NZ2114的DNA序列的表达载体，并转化毕赤酵母，获得的重组毕赤酵母经过发酵培养，分泌产生抗菌肽NZ2114。本发明专利技术通过优化抗菌肽NZ2114基因序列，构建特异表达载体，首次实现了抗菌肽NZ2114在毕赤酵母中的高效表达，产量突破克级水平，克服了大规模生产中产量过低或化学合成成本过高的问题，并建立完善的纯化体系，可实现规模化生产，可应用于抗菌药物开发，饲料添加剂开发等领域，具有广阔的应用价值和市场前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体地说，涉及一种在重组毕赤酵母中高效表达抗菌肽NZ2114的方法。
技术介绍
抗菌肽(AMP)是生物体内具有生物活性的小分子多肽，主要特点如下抗菌活性高，抗菌谱广，种类多，而且对真菌，原虫乃至病毒和肿瘤细胞都有杀伤或抑制作用(Brandenburg, Merres et al. 2012)。由于其突出的生物学特性,最有潜力作为型新安全无害抗生素替代品，从而备受科学界关注(Eckert 2011; Brandenburg, Merres等,2012)。Plectasin是2005年由Mygid等人从来源于北欧松林地表腐生子囊菌(Pseudoplectania nigrella)中分离得到一种具有抗菌功能的抗菌肽,也是首例真菌防御素。Plectasin基因开放阅读框编码一个95个残基长的前体肽，由一个信号肽序列(残基1-23)，一个前片断(残基23-55)和一个40个残基的C端区域的成熟多肽(残基56-95)，与几种无脊椎动物防御素存在50-55%序列相似性。Plectasin成熟多肽由40个AA组成，含有6个Cys残基和5个Iys残基，一个区别的四肽(D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有编码抗菌肽NZ2114的DNA序列的表达载体，其特征在于，包括诱导型启动子、位于启动子下游的编码α?因子分泌信号肽的核苷酸序列以及编码抗菌肽NZ2114的DNA序列，所述编码抗菌肽NZ2114的DNA序列的5’端具有酵母Kex2基因表达产物切割识别序列AAGAGA。

【技术特征摘要】
1.一种含有编码抗菌肽NZ2114的DNA序列的表达载体，其特征在于，包括诱导型启动子、位于启动子下游的编码α -因子分泌信号肽的核苷酸序列以及编码抗菌肽ΝΖ2114的 DNA序列，所述编码抗菌肽ΝΖ2114的DNA序列的5’端具有酵母Kex2基因表达产物切割识别序列AAGAGA。2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述编码抗菌肽NZ2114的DNA序列如 SEQ ID No. 2 所示。3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的出发载体为 pPICZa A04.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，在编码a-因子分泌信号肽的核苷酸序列的5’端连接有XhoI酶切位点，且在XhoI酶切位点的5’端连接有保护碱基CCG ;在编码抗菌肽NZ2114的DNA序列的3’端连接有XhaI酶切位点，且在XhaI酶切位点的3’端连接有保护碱基GC。5.含有权利要求1-4任一项所述表达载体的宿主细胞。6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其为毕赤酵母。7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其为毕赤酵母X-33基因工程菌。8.权利要求7所述基因工程菌的培养方法，包括以下步骤1)种子液的制备从YPD平板挑取酵母转化子单菌落,接种于含100yg/mlzeocin的 IOml YPD液体培养基中，290C，250rmp，摇床培养18_24h，以1%接种量接种于200ml YPD液体培...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，张勇，滕达，王秀敏，毛若雨，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：