应用毕赤酵母的pGAP调控表达葡聚糖内切酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种应用毕赤酵母的ｐＧＡＰ调控表达葡聚糖内切酶的方法，属生物技术领域，首先从毕赤酵母中扩增ｐＧＡＰ启动子；构建由ｐＧＡＰ调控葡聚糖内切酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；根据载体上所带的抗性基因筛选重组子作为工程菌株；将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中发酵工程菌分泌表达葡聚糖内切酶。本发明专利技术生产成本低，发酵周期短，利用毕赤酵母的ｐＧＡＰ调控表达的葡聚糖内切酶有利于产物的纯化，解决应用天然产葡聚糖内切酶的菌株生产葡聚糖内切酶的成本较高、产物难于纯化等的问题，有利于葡聚糖内切酶的大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种应用毕赤酵母的ｐＧＡＰ调控表达葡聚糖内切酶的方法，其特征在于，其具体步骤如下：　１）、首先从毕赤酵母中扩增ｐＧＡＰ启动子；　２）、在ｐＧＡＰ启动子的基因序列的３’末端融合Ｈｉｓ６标签，构建由ｐＧＡＰ调控葡聚糖内切酶基因的毕赤酵母表达 载体，并将这一载体转化为毕赤酵母基因组；　３）、根据载体上所带的抗性基因筛选重组子作为工程菌株；　４）、将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于２８～３０℃在生物反应器中发酵工程菌１～２ｄ分泌表达葡聚糖内切酶，在发酵过程中用氨水维持ｐＨ 在４～６；所述液体培养基是由以下组分组成：８５％磷酸２５～２８ｍｌ／Ｌ，ＣａＳＯ↓［４］.２Ｈ↓［２］Ｏ　０．８...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱联，屠发志，张添元，易国辉，罗进贤，屈直，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]