用于表达目标蛋白的重组宿主细胞制造技术

本发明专利技术属于重组生物技术领域，特别属于蛋白质表达领域。本发明专利技术一般涉及一种从宿主细胞中表达目标蛋白(POI)的方法。本发明专利技术特别涉及改善宿主细胞表达和/或分泌目标蛋白的能力，和宿主细胞在蛋白质表达中的用途。本发明专利技术还涉及细胞培养技术，更具体地涉及培养细胞以生产用于医学目的或食品的所需分子。

Recombinant host cells for expressing target proteins

The invention belongs to the field of recombinant biotechnology, and belongs to the field of protein expression. The present invention relates generally to a method for expressing a target protein (POI) from a host cell. The present invention particularly relates to the ability of host cells to express and / or secrete target proteins, and the use of host cells in protein expression. The present invention also relates to cell culture techniques, more specifically to the cultivation of cells for the production of molecules required for medical purposes or foods.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于重组生物
，特别属于蛋白质表达领域。本专利技术一般涉及一种从宿主细胞中表达目标蛋白(POI)的方法。本专利技术特别涉及改善宿主细胞表达和/或分泌目标蛋白的能力，和宿主细胞在蛋白质表达中的用途。本专利技术还涉及细胞培养技术，更具体地涉及培养细胞以生产用于医学目的或食品的所需分子。
技术介绍
已经采用原核和真核宿主完成了目标蛋白(POI)的成功生产。最突出的实例是如大肠杆菌(Escherichiacoli)的细菌，如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)或多形汉森酵母(Hansenulapolymorpha)的酵母菌，如泡盛曲霉(Aspergillusawamori)或里氏木霉(Trichodermareesei)的丝状真菌，或如CHO细胞的哺乳动物细胞。虽然某些蛋白质产量容易以高效率实现，但是很多其它蛋白质仅以相对低的水平生产。为了提高重组蛋白的分泌，一种策略是针对涉及蛋白质折叠和加工的宿主分泌途径。在WO93/25676中首次建议将编码蛋白质二硫键异构酶(PDI)的cDNA和编码异源二硫键键合蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备目标蛋白的重组宿主细胞，其中与遗传操作之前的宿主细胞相比，所述宿主细胞被工程化为低表达至少一种多核苷酸，所述多核苷酸编码具有示于SEQ ID NO:10、11、12的氨基酸序列或其功能同系物的KO蛋白，其中所述功能同系物与示于SEQ ID NO:10、11或12的氨基酸序列具有至少30％的序列同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.17 EP 14165188.51.一种用于制备目标蛋白的重组宿主细胞，其中与遗传操作之前的宿主细胞相比，所述宿主细胞被工程化为低表达至少一种多核苷酸，所述多核苷酸编码具有示于SEQIDNO:10、11、12的氨基酸序列或其功能同系物的KO蛋白，其中所述功能同系物与示于SEQIDNO:10、11或12的氨基酸序列具有至少30％的序列同一性。2.根据权利要求1所述的宿主细胞，其中与工程化之前的宿主细胞相比，所述编码KO蛋白的多核苷酸使模型蛋白SDZ-Fab(SEQIDNO:25和26)和/或HyHEL-Fab(SEQIDNO:29和30)的产量增加。3.根据权利要求1或2所述的宿主细胞，其中通过从所述宿主细胞的基因组中敲除所述编码KO蛋白或其功能同系物的多核苷酸，破坏所述宿主细胞中所述编码KO蛋白或其功能同系物的多核苷酸，破坏与所述编码KO蛋白或其功能同系物的多核苷酸可操作地连接的启动子，或转录后基因沉默，实现低表达。4.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为巴斯德毕赤酵母、多形汉森酵母、里氏木霉、酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母、解脂耶氏酵母、甲醇毕赤酵母、博伊丁假丝酵母、和Komagataella，和粟酒裂殖酵母。5.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述目标蛋白为酶、治疗性蛋白、食品添加剂、饲料添加剂、或抗体或抗体片段。6.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含至少一种编码辅助蛋白的多核苷酸。7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其中所述辅助蛋白具有示于SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9或162的氨基酸序列或其功能同系物，其中所述功能同系物与示于SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9或162的氨基酸序列具有至少30％的序列同一性。8.一种宿主细胞，所述宿主细胞通过以下获得：提供表达KO蛋白1、KO蛋白2和/或KO蛋白3或其功能同系物的细胞，并将所述细胞工程化为低表达编码KO1、KO2和/或KO3或其功能同系物的基因。9.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞被工程化为：(i)低表达多核苷酸，所述多核苷酸编码具有示于SEQIDNO:10的氨基酸或其功...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·加瑟，D·玛塔诺维克，M·布凯泰克斯，
申请(专利权)人：贝林格尔·英格海姆RCV两合公司，山德士股份公司，VTU技术股份有限公司，隆萨有限公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT