一种膜醭毕赤酵母菌株其生物菌剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种膜醭毕赤酵母菌株其生物菌剂的制备方法及其应用，该菌株已于2016年1月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.12112；分类命名为Pichia membranifaciens。本发明专利技术还公开了利用该菌株生产的微生物菌剂及其制备方法。本发明专利技术提供的膜醭毕赤酵母及其微生物菌剂，繁殖适应性强，能减少农业废弃物处置中氮的挥发或损失，农业废弃物堆肥物料中总氮有所增加，且能促进物料保氮除臭；改善农业废弃物处理及利用效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业
，本专利技术公开了一种膜蹼毕赤酵母菌株其生物菌剂的制备方法及其应用。
技术介绍
目前好氧发酵堆肥生产商品有机肥仍是我国农业废弃物(主指畜禽粪便)最主要的处置利用方式，其设施简便、处理量大、周期短、生产成本相对较低，畜禽粪等农业废弃物经无害化高温发酵堆腐后，含水率大幅度降低、有害病原微生物基本杀灭，运输和施用都较为方便，但有机肥产品质量需要符合《NY 525-2012有机肥料》标准，而采用的畜禽粪等原料在堆肥过程中会挥发产生大量氨气及其他恶臭气体，使得废弃物处置场地及工人实际工作环境很差，对周边环境造成不良影响，处理后的物料氮素损失较大，影响有机肥产品品质进一步提升；目前，国内对农业废弃物(主指畜禽粪便)的处置中产生的氨挥发及恶臭问题仍以调酸及通风、抽滤吸附等措施为主，但其氮素损失及臭气污染环境问题依然存在，因此开发微生物菌剂用于的农业废弃物处置保氮除臭技术受到业内广泛关注。含氮量较高的物质在堆肥过程中常伴有氮损失，这不仅会造成营养元素的流失，还会导致周边环境的污染。目前针对堆肥氮素损失控制的微生物菌剂的开发与研制还较少见。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种用于农业废弃物处置与利用中保氮除臭的膜蹼毕赤酵母，本专利技术还公开了利用该菌株生产的微生物菌剂及其制备方法。本专利技术提供的膜蹼毕赤酵母及其微生物菌剂，繁殖适应性强，能减少农业废弃物处置中氮的挥发或损失，农业废弃物堆肥物料中总氮有所增加，且能促进物料保氮除臭；改善农业废弃物处理及利用效果。本专利技术第一目的在于提供一种用于农业废弃物处置与利用中保氮除臭的膜蹼毕赤酵母菌株和含有该膜蹼毕赤酵母的微生物菌剂，及其在农业废弃物处置上的应用及其微生物菌剂。本专利技术第二目的在于提供上述微生物菌剂的制备方法。本专利技术第三目的在于提供上述膜蹼毕赤酵母菌株及其微生物菌剂在农业废弃物处置堆肥过程中的应用。培养和纤维形态特征：麦芽汁液体培养基中25℃培养三天，细胞卵形、椭圆形、腊肠形，大小为(5.7-11.3)×(3.6-4.4)μm，有沉淀形成，芽殖。麦芽汁琼脂斜而25℃培养一个月，菌落表面细皱，粗糙暗淡，灰白色，无光泽，边缘树根状。玉米粉琼脂Dalmau平板培养，产生假菌丝。理化特征如表1所示：表1菌株生理特征：见鉴定证书。rRNA基因D1D2区序列测定结果如下：AAATCGTGCCAATTTTTTTGGCACGAGTTGTAGAGTGTAGGCGGGAGTCTTTGTGGAGCACGGTGTCCAAGTCCCTTGGAACAGGGCGCCTGAGAGGGTGAGAGCCCCGTGGGGTGTCGTGCGAAGCTTTGAGGCCCTGCTGACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCCAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAGGCTAAATACTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACTGTGAAGGAAAGATGAAAAGCACTTTGAAAAGAGAGTGAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGTATTGGGCCCGACATGGGGAGTGCGCACCGCTGTCTCTTGTAGGCGGCGCTCTGGGCGCTCTCTGGGCCAGCATCGGTTCTTGCTGCGGGAGAATGGGTGCCGGAAAGTGGCTCTTCGGAGTGTTATAGCCGGCGCCAGATACCGCGTGCGGGGACCGAGGACTGCGGCTTCTGTCTCGGATGCTGGCACAACGGCGCAATACCGCCCGTCTT其具体技术方案为：一种膜醭毕赤酵母菌，菌株已于2016年1月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号(邮编100101)，保藏编号：CGMCC No.12112；分类命名为Pichia membranifaciens。进一步，所述膜蹼毕赤酵母菌的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本专利技术所述膜蹼毕赤酵母菌在农业废弃物处置堆肥过程中的应用。一种利用本专利技术所述膜蹼毕赤酵母菌制备的微生物菌剂，所述微生物菌剂为或固体菌剂，由膜蹼毕赤酵母菌和及其培养物组成；其活性成分为膜蹼毕赤酵母酵菌体和它的胞外代谢产物。优选地，所述微生物菌剂其内含有的膜蹼毕赤酵母菌的活菌数大于5.0×107cfu/g或5.0×107cfu/ml。本专利技术所述微生物菌剂在农业废弃物处置堆肥过程中的应用。一种本专利技术所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：(1)保藏物膜蹼毕赤酵母菌接种到糖蜜和葡萄糖固体斜面，实施斜面活化培养；(2)液体培养基扩培，获取种子液；(3)将扩培后的对数期种子液，按照2％的接种量接种至发酵扩大固体培养基质或培养液中，充分搅拌混匀后，在28℃培养2-3d，培养结束后用于堆肥试验及生产应用。优选地，采用所述对数期种子液固体培养基质，选择半发酵腐熟的酒糟、菇渣及麦麸，并加入10％的麸皮和1％的酵母膏，调节含水率至40％-50％，在28℃培养5-7d，培养结束后用于堆肥试验及生产应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的膜蹼毕赤酵母及其微生物菌剂，繁殖适应性强，能减少农业废弃物处置中氮的挥发或损失，处置场地周边的环境有所改善，农业废弃物堆肥物料产品中总氮有所增加，且能促进物料保氮除臭；改善农业废弃物处理及利用效果。附图说明图1是不同比例保氮除臭菌剂对猪粪蝇蛆养殖处理氨挥发的影响；图2是蝇蛆养殖过程保氮菌剂对氨挥发的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1保氮除臭试验：喷洒保氮菌剂(膜蹼毕赤酵母菌株制备的微生物菌剂)试验设4个处理，即对照CK(自来水)、处理T1(稀释100倍菌剂)、处理T2(稀释10倍的菌剂)和处理T3(菌剂原液)，试验在养殖处理大棚中进行。每个处理池宽2.25m，长4米，处理间间隔2m；直接将等量猪粪400kg倒入池内摊平，猪粪物料用挤压粪及麦麸调整至含水率65％左右，上层铺撒2cm厚挤压粪，物料总厚度6-8cm，保氮菌剂施用量为1％(V/W)，均匀喷洒在物料表面，然后将蝇蛆幼虫按7.5‰(w/w)接种量均匀撒在各处理猪粪物料中。定时定点测定各处理的氨挥发量，每个处理测定3个点，测定时间为每天早上10：30至11点之间；在猪粪蝇蛆养殖后第四天和第五天各按保单菌剂试验设计再喷洒一次，并测定喷洒菌剂后各处理的氨挥发量，试验周期为6天。实施例2养殖物料中氨挥发量的测定方法：根据铵态氮测定原理，氨挥发的量可被固定体积的硼酸吸收液(内含特定甲基红与溴甲酚绿指示剂，为酒红色)吸收，氨被硼酸溶液吸收后，硼酸溶液由红色逐渐转为绿色，吸收氨的量越多吸收液的绿色越深，然后用标准酸滴定硼酸吸收液至酒红色，根据滴定所消耗的标准酸的用量即可计算出硼酸中吸收氨的总量。试验时定时定点在各蝇蛆养殖处理池中的养殖蝇蛆处理物料表面悬空放置3个特定的氨挥发收集容器(广口，内含250ml硼酸溶液，保证硼酸溶液足够量以避免氨吸收达到饱和，可密闭运输)，分别用固定体积的封闭容器(口大底小)倒扣在装有硼酸溶液的氨挥发收集容器的物料上，该容器不与氨挥发收集容器接触，而与养殖蝇蛆处理物料表面相密合。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种膜醭毕赤酵母菌，其特征在于，菌株已于2016年1月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.12112；分类命名为Pichia membranifaciens。

【技术特征摘要】
1.一种膜醭毕赤酵母菌，其特征在于，菌株已于2016年1月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.12112；分类命名为Pichia membranifaciens。2.根据权利要求1所述的膜醭毕赤酵母菌，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.权利要求1所述膜醭毕赤酵母菌在农业废弃物处置堆肥过程中的应用。4.一种利用权利要求1所述膜醭毕赤酵母菌制备的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为或固体菌剂，由膜醭毕赤酵母菌和及其培养物组成；其活性成分为膜醭毕赤酵母酵菌体和它的胞外代谢产物。5.根据权利要求4所述膜醭毕赤酵母菌制备的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂其内含有的膜醭毕赤酵母菌的活菌数大于5.0×107c...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卫平，朱凤香，姚燕来，洪春来，陈晓旸，薛智勇，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33