一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法。本发明专利技术根据载体pPinkα‑HC序列，选择其中一段约300bp的序列设计一对引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F和pPinkα‑HCM‑BamH1‑R，在其两头的粘性末端酶Fse1和BamH1中插入了新的唯一的酶切位点Sal1、Pst1、PspOM、Nco1、Apa1、EcoR1，并在后面接上6个His标签CATCATCATCATCATCAT，实现了粘性末端的酶切位点数量多、内切酶的通用性好、价格低廉、酶切位点之间的间隔充裕、适合为双酶切提供保护碱基，同时还插入了6个His标签，以方便对获取的目标蛋白做Western blot验证。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
，具体来说涉及一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法。
技术介绍
pPinkα-HC是毕赤酵母蛋白表达体系中常用的载体，但其多克隆位点只有Stu1、Kpn1、Fse1、Nae1和Swa1，不仅可选择的数量较少，而且含有特异性连接效率较低的平末端酶切位点。这些限制性内切酶不太常见，很多实验室需另行购买，且单位酶活所对应的价格也较昂贵。此外，这些酶切位点间隔太近，缺乏有效的保护碱基保证双酶切的效率。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有毕赤酵母蛋白表达载体pPinkα-HC中多克隆位点数量少、平末端位点多、所用到的酶通用性差、价格高、且酶切位点间隔紧密等不足，提供一种多克隆位点多、平末端位点少、所用到的酶通用性高，连接效率高的改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法。本专利技术的改良的毕赤酵母蛋白表达载体，其是通过以下方法构建的，包括以下步骤：以载体pPinkα-HC为模板，以上游引物pPinkα-HCM-Fse1-F和下游引物pPinkα-HCM-BamH1-R作为引物进行PCR扩增，扩增产物用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为插入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以载体pPinkα‑HC为模板，以上游引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F和下游引物pPinkα‑HCM‑BamH1‑R作为引物进行PCR扩增，扩增产物用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为插入子；将载体pPinkα‑HC用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为酶切载体，将插入子和酶切载体连接获得改良的毕赤酵母蛋白表达载体；所述的上游引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F的核苷酸序列为：5’‑GTAGGCCGGCCCTGCAGTCGACGGGCCCATGGAATTCATCATCATCATCA...

【技术特征摘要】
1.一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以载体pPinkα-HC为模板，以上游引物pPinkα-HCM-Fse1-F和下游引物pPinkα-HCM-BamH1-R作为引物进行PCR扩增，扩增产物用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为插入子；将载体pPinkα-HC用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为酶切载体，将插入子和酶切载体连接获得改良的毕赤酵母蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅鑫，杨子银，周瀛，傅秀敏，东方，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：广东;44