一种重组腺病毒及其构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种重组腺病毒及其构建方法，通过在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点Bgl II和Sal I酶切位点中插入猪瘟病毒E2基因，在腺病毒的CMV启动子下游Kpn I和Not I酶切位点中插入蓝耳病病毒GP5基因。本发明专利技术重组腺病毒能在同一腺病毒中分别表达猪瘟病毒E2蛋白和蓝耳病病毒GP5蛋白，可仅通过一次免疫接种就能够使免疫后的猪同时获得对猪瘟病毒和蓝耳病病毒的抗体，降低了疫苗接种次数和成本，对猪瘟病毒和蓝耳病病毒联合攻击的保护效果为87.5％，既解决了猪瘟和蓝耳病疫苗不能同时免疫的问题，也解决了弱毒疫苗免疫后毒力返强和同源重组的问题。

Recombinant adenovirus and construction method thereof

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular discloses a recombinant adenovirus and its construction method, through the adenovirus CMV promoter insertion of classical swine fever virus E2 gene promoter downstream multiple cloning sites of Bgl II and Sal I restriction sites, insertion of PRRS virus adenovirus GP5 in the downstream of the CMV promoter Kpn I Not and I restriction sites in gene. The recombinant adenovirus can express E2 protein of classical swine fever virus and PRRS virus GP5 protein in the same adenovirus, can only through a vaccination can make the immune antibody on the pig and swine fever virus and PRRS virus vaccine, reduce the number and cost of the protective effect of joint attack on classical swine fever virus and PRRS virus was 87.5%, not only solved the swine fever and PRRS vaccine cannot be immune to the problem, but also solve the attenuated vaccine virulence and homologous recombination problem.

【技术实现步骤摘要】
一种重组腺病毒及其构建方法
本专利技术属于生物
，涉及一种重组腺病毒，尤其是一种能在同一腺病毒中分别表达猪瘟病毒E2基因和蓝耳病病毒GP5基因的重组腺病毒及其构建方法。
技术介绍
猪瘟是危害养猪业的主要传染病之一。目前，免疫接种仍是猪瘟防治的主要措施，而且是根除本病和阻止野毒传向无猪瘟猪群传播的必要手段。猪瘟疫苗无论在过去、现在还是将来，对控制和消灭猪瘟都具有极其重要的作用，各国学者对猪瘟疫苗的研制和开发一直没有放弃。传统的猪瘟疫苗包括灭活疫苗和弱毒疫苗，但灭活苗免疫效力低，保护期短，激发机体产生免疫力的速度慢，且到目前为止，组织培养猪瘟毒的产量和灭活所造成的病毒有效抗原的损失仍是制造灭活疫苗的二大障碍。猪瘟弱毒疫苗的广泛应用，对于控制猪瘟的流行起到了关键作用。但是弱毒疫苗也有其不足的地方，首先近年来猪瘟的流行特点在世界范围内发生了很大的变化，呈现周期性、波浪形的的地区性散发和温和性猪瘟，发病后的临床症状是：无名高热、症状不典型、持续性感染、出生仔猪先天性震颤和母猪繁殖性障碍。用传统疫苗免疫常常造成免疫失败，即使将剂量增加到750个兔体反应(国家规定150个兔体反应)也不能预防本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组腺病毒，其特征在于：在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点Bgl II和Sal I酶切位点中插入猪瘟病毒E2基因，在腺病毒的CMV启动子下游Kpn I和Not I酶切位点中插入蓝耳病病毒GP5基因。

【技术特征摘要】
1.一种重组腺病毒，其特征在于：在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点BglII和SalI酶切位点中插入猪瘟病毒E2基因，在腺病毒的CMV启动子下游KpnI和NotI酶切位点中插入蓝耳病病毒GP5基因。2.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒，其特征在于：所述猪瘟病毒为常规的市购病毒，该病毒的E2基因在GenBank中的登录号为：AY775178.2。3.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒，其特征在于：所述蓝耳病病毒为常规的市购病毒，该病毒的GP5基因在GenBank中的登录号为：AY740012.1。4.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒，其特征在于：所述腺病毒为常规的市购人－5型非复制型腺病毒。5.权利要求1所述重组腺病毒的构建方法，其特征在于包括以下步骤：A.从市购的猪瘟病毒和蓝耳病病毒中分别扩增出E2和GP5基因；B.将步骤A获得的猪瘟病毒E2基因通过BglII和SalI酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中，形成腺病毒穿梭载体pAdTra...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄光东，孙永科，舒建洪，敬晓棋，李河林，郭小参，黄广争，李俊生，
申请(专利权)人：陕西溯源农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61