本发明专利技术公开了一种特异性抑制平滑肌细胞增殖和迁移的腺病毒载体及其应用，该腺病毒载体的多克隆位点处插入有目的基因和miRNA的调控序列。动脉粥样硬化性疾病介入治疗术后，再狭窄的主要原理在于平滑肌细胞迁移至内膜并进行病态性增殖，应用本发明专利技术腺病毒本载体可以很好抑制平滑肌细胞增殖和迁移等运动，从而达到防止再狭窄的发生。本发明专利技术腺病毒载体基于miRNA调控，可实现特异性抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移，而对血管内皮细胞影响甚微，因此，不会影响内皮的修复，从而减少血栓形成的风险，有望减少抗血小板药的使用和出血的发生；可提高介入治疗动脉粥样硬化性疾病的效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于miRNA调控的特异性抑制平滑肌细胞增殖和迁移的重组腺病毒载体及其用途。
技术介绍
下肢动脉硬化闭塞症（lower extremity arteriosclerosis obliterans，LEASO），是由于下肢动脉粥样硬化，动脉管腔进行性狭窄甚至出现闭塞所导致的慢性下肢缺血性疾病。LEASO 的发病率较高。大量的流行病学研究结果显示，大约有10-20%的老年人（大于60 岁）罹患LEASO【1】。在国内，一项基于北京社区的横断面研究结果提示，LEASO在我国老年人群中的患病率为12.9%【2】。随着人口的老龄化，LEASO的发病率还有逐年升高的趋势。LEASO 典型的症状为间歇性跛行，而更加严重的临床表现（critical limb ischemia，严重下肢缺血）包括静息痛和足趾的溃疡坏疽。而一旦进展为严重下肢缺血，预后极差。在Norgren【3】等的研究中，单纯保守治疗的严重LEASO 患者，1 年死亡或者需要截肢的比例达到了33%（截肢或死亡人数：总人数=86:266）。Jones【4】等则对2730742 名LEASO 患者的预后进行了研究，纳入患者的病变程度包含了各个分期，总的截肢率高达 5.79%。LEASO严重危害着人类的健康。以球囊扩张成形以及支架血管成形术为基础的腔内治疗（endovascular treatment）是近年来发展起来的针对动脉粥样硬化性疾病微创的治疗手段。该技术具有创伤小、可重复性强、手术并发症少等优点，已成为当今动脉粥样硬化性疾病外科治疗的首选。然而,目前基于球囊和支架的腔内治疗存在两个问题:①术后再狭窄（restenosis），其原因在于球囊扩张或者支架植入后对血管的急性损伤，刺激血管内膜平滑肌细胞增殖并迁移到内膜，从而导致内膜病态增厚，最终导致术后再狭窄据。据报道，介入治疗LEASO1年术后再狭窄的发生率为20%～40%【5】。②术后早期及晚期血栓形成：球囊及支架在扩张血管过程中会损伤内皮。内皮损伤后，首先激活血小板的是与血小板接触的胶原，继后凝血链锁反应被启动而产生了凝血酶，并且血小板继续地被活化又不断释出二磷酸腺苷和血栓素A2，随血流而来的是血小板在局部不断地被激活，最终导致血栓形成【6】。尽管术后常规使用抗血小板治疗可以减少血栓的风险，但是血栓形成的事件仍有发生。并且，由于抗血细胞板药物的使用，会增加出血的风险。药物洗脱球囊和支架指的是承载有药物并按照一定速率释放的球囊和支架，即在其表面覆盖一层抗增殖药物，旨在支撑病变管腔的同时，通过承载的药物在局部发挥抗平滑肌细胞增殖的作用。药物洗脱球囊和支架的应用，是腔内治疗心血管疾病的一次革新。药物洗脱球囊和支架能够明显抑制平滑肌细胞的病态增生，提高远期通畅率，成为下肢动脉腔内治疗中最具有前景的技术【7-10】。然而，药物洗脱球囊和支架在抑制平滑肌细胞增殖的同时，也抑制了内皮细胞的增殖。另外，鉴于内皮损伤是术后再狭窄发生的始动环节，药物洗脱球囊或者支架抑制损伤内皮的修复，可能一定程度上影响了其减少术后再狭窄的性能。值得关注的是，有研究表明，药物洗脱球囊和支架在使用过程中，晚期血栓形成的发生率升高，主要原因在于：药物洗脱球囊和支架非选择性地抑制了内皮细胞，从而影响了内皮的修复【11，12】。因此，寻找一种方法，使其特异性的抑制平滑肌细胞的增殖和迁移，而对内皮细胞的影响甚微。成为未来支架发展的热点和难点。基因治疗是一种较新型的治疗手段,可治疗多种疾病,包括癌症、遗传病、感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病。过去十几年里,全世界的基因治疗取得了巨大的进步。截止2008年9月,临床试验总数已达1432项。腺病毒是目前基因治疗最常见的载体之一,全球近1/4的基因治疗临床试验方案采用腺病毒作为载体。微小RNA(microRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子，它主要是通过与蛋白编码基因的UTR-3’端的沉默子结合，抑制信使RNA蛋白的翻译或促进信息RNA 的降解，从而在转录后水平上发挥调控基因蛋白表达的作用。TPM1 基因, 即TPMα基因，在哺乳类及鸟类都有表达。TPM1 基因主要编码骨骼肌α-原肌球蛋白和其他异构体，包括平滑肌α-TM；既往认为，TPM1 蛋白仅在肌肉组织的运动中发挥作用，然而，近年来，越来越多的研究发现，TPM 作为抑癌基因，在神经胶质瘤、结肠癌等的生物学行为方面同样发挥着重要的作用。药物洗脱球囊和支架已经成为动脉粥样硬化疾病腔内治疗中最具有前景的技术之一。然而，药物洗脱球囊和支架在抑制平滑肌细胞增殖的同时，也抑制了内皮细胞的增殖。其主要问题在于：抑制内皮的修复，增加血栓的风险并减弱自身的抗再狭窄性能。实现特异性地抑制平滑肌细胞，而对内皮细胞的影响甚微是本专利技术的目的。参考文献：1.Lloyd-Jones D, Adams RJ, Brown TM, et al. Heart disease and stroke statistics--2010 update: a report from the American Heart Association. Circulation. Feb 23 2010;121(7):e46-e215.2.王洁，李小鹰，何耀等，北京市万寿路地区老年人群周围动脉硬化闭塞病横断面调查，中华流行病学杂志，2004年3月，第2 5 卷第3期：221-43.Norgren L, Hiatt WR, Dormandy JA, et al. Inter-Society Consensus for the Management of Peripheral Arterial Disease (TASC II). European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 2007;33 Suppl 1:S1-75.4.Jones WS, Patel MR, Dai D, et al. Temporal trends and geographic variation of lower-extremity amputation in patients with peripheral artery disease: results from U.S. Medicare 2000-2008. Journal of the American College of Cardiology. Nov 20 2012;60(21):2230-2236.5.Curcio A, Torella D, Indolfi C. Mechanisms of smooth muscle cell proliferation and endothelial regeneration after vascular injury and stenting: approach to therapy. Circulation journal : official jo本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性抑制平滑肌细胞增殖和迁移的腺病毒载体，其特征在于，该腺病毒载体的多克隆位点处插入有目的基因和miRNA的调控序列；所述目的基因选自基因TPM1、Geminin、HSP60、GATA‑6、CRP2、P38 MAPK基因中的至少一种；所述miRNA的调控序列选自miR‑126‑3p的反向互补序列、miR‑1298的反向互补序列、miR‑140‑3p的反向互补序列、miR‑125b的反向互补序列、miR‑100的反向互补序列、miR‑24的反向互补序列中的至少一种。
【技术特征摘要】
1.一种特异性抑制平滑肌细胞增殖和迁移的腺病毒载体，其特征在于，该腺病毒载体的多克隆位点处插入有目的基因和miRNA的调控序列；所述目的基因选自基因TPM1、Geminin、HSP60、GATA-6、CRP2、P38 MAPK基因中的至少一种；所述miRNA的调控序列选自miR-126-3p的反向互补序列、miR-1298的反向互补序列、miR-140-3p的反向互补序列、miR-125b的反向互补序列、miR-100的反向互补序列、miR-24的反向互补序列中的至少一种。2.根据权利要求1所述的腺病毒载体，其特征在于，所述腺病毒载体的骨架选自GV135、GV314、pXC1、pAdEasy-1、pADtreak-CMV、AdMax中的至少一种。3.根据权利要求1所述的腺病毒载体，其特征在于，所述miRNA的调控序列为至少2个串联的miR-126-3p反...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚陈，王劲松，常光其，王深明，李勇辉，
申请(专利权)人：姚陈，王劲松，常光其，王深明，李勇辉，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。