表达REIC基因的条件复制型腺病毒制造技术

本发明专利技术的目的在于提供具有强抗癌作用的条件复制型腺病毒。一种在癌细胞中特异性地增殖并表达REIC蛋白质或REIC C结构域蛋白质的条件复制型腺病毒，其是在包含5型腺病毒基因组的ITR(末端反向重复)序列并插入有HRE序列、hTERT启动子、编码核心蛋白多糖的DNA和编码包含RGD序列的肽的DNA的条件复制型腺病毒中进一步插入全长REIC DNA或REIC C结构域DNA而成的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及高表达REIC(REIC/Dkk-3)蛋白质的条件复制型腺病毒。
技术介绍
迄今为止，已报道了使用条件复制型(进行了在癌细胞中特异性增殖的基因改造)的各种病毒的针对癌症的药品的临床试验(非专利文献1)。在使用这些药品的癌症的治疗中取得了一定的成果，但另一方面，其效果大多是有限的，希望开发出更为有效的药品。作为截止目前报道了临床试验结果的使用条件复制型病毒的针对癌症的药品的代表例，有将5型腺病毒作为骨架的Telomelysin(非专利文献2)和将1型单纯疱疹病毒作为骨架的Talimogenelaherparepvec(T-VEC，原名Oncovex)(非专利文献3)。近年来，如非专利文献1所示，对于使用各种病毒的针对癌症的药品来说，已经考虑到具有活化抗癌免疫这样的功能是很重要的。从这样的观点考虑，对于Telomelysin(非专利文献2)来说，其不编码活化抗癌免疫的细胞因子等的基因，尽管可在施用了Telomelysin的局部通过该腺病毒的增殖来诱导癌细胞死亡，但并不能期待全身的强抗癌免疫活化这样的作用。这一点可能限制了Telomelysin的治疗效果。另外，对于T-VEC来说，在施用的局部可以期待由该疱疹病毒的增殖所引起的癌细胞死亡、癌细胞的抗原化以及由细胞因子GM-CSF的表达所带来的抗癌免疫的活化。但是，对于细胞因子GM-CSF来说，除了分化诱导作为癌抗原提呈细胞的树突细胞这样的抗癌免疫活化作用以外(非专利文献1)，还报道了其在高用量下可能诱导免疫抑制系细胞而使抗癌免疫功能减弱，从而使病情恶化(非专利文献4)，这一点可能限制了T-VEC的治疗效果。即，鉴于现有的使用条件复制型病毒的针对癌症的药品中的这些问题，希望开发出更为有效的该药品。作为用于解决上述问题的条件复制型腺病毒，已经报道了包含各种突变的条件复制型腺病毒(专利文献1和2以及非专利文献5～10)。另一方面，作为与细胞永生化相关的基因，已知有REIC(REIC/Dkk-3)基因，据报道在癌细胞中该基因的表达受到抑制，还报道了将REIC基因用于癌症治疗(专利文献3)。REIC具有活化抗癌免疫的作用、在基因表达时通过内质网应激而对癌细胞诱导细胞死亡的作用。另外，还报道了REIC基因的部分片段与全长REIC具有同样的效果(专利文献4)，此外还报道了表达REIC/Dkk-3基因的腺病毒(专利文献5和非专利文献11)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第4327844号公报专利文献2：日本特表2008-531010号公报专利文献3：国际公开第WO2001/038523号专利文献4：国际公开第WO2012/002582号专利文献5：国际公开第WO2012/161352号非专利文献非专利文献1：R.V.Daveetal.,Surgeon2014,Feb4非专利文献2：JohnNemunaitisetal.,MolecularTherapy,Vol.18,No.2,429-434,Feb.2010非专利文献3：NeilN.Senzeretal.,JournalofClinicalOncology,Vol.27,No.34,December1,2009,5763-5771非专利文献4：G.Parmianietal.,AnnalsofOncology18；226-232,2007非专利文献5：Oh-JoonKwonetal.,ClinCncerRes；16(24)December15,2010非专利文献6：EunheeKimetal.,HumanGeneTherapy14：1415-1428(October10,2003),1415-1427非专利文献7：CandelariaGomez-Manzanoetal.,Onvogene(2004)23,1821-1828非专利文献8：JaesungKimetal.,CancerGeneTherapy(2002)9,725-736非专利文献9：I-KChoietal.,GeneTherapy(2010)17,190-201非专利文献10：HaoWuetal.,JGeneMed2011；13：658-669非专利文献11：WatanabeMetal.,OncologyLetters7：595-601,2004
技术实现思路
专利技术所要解决的课题本专利技术的目的在于提供具有强抗癌作用的条件复制型腺病毒。用于解决课题的手段本专利技术人通过将以往报道的条件复制型腺病毒的技术组(上述专利文献1和2以及非专利文献5～10)有效地组合而制作出独创的条件复制型腺病毒。进一步，将表达具有独特的抗癌免疫活化作用的REIC蛋白质(上述非专利文献11)的REIC基因新编码到该腺病毒中。由此，成功地开发出兼具独创性和新颖性、并且可期待具有凌驾于使用现有的条件增殖件复制型病毒的针对癌症的药品组之上的抗癌作用、创造性高的抗癌病毒制剂，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述。[1]一种在癌细胞中特异性地增殖并表达REIC蛋白质或REICC结构域蛋白质的条件复制型腺病毒，其是在包含5型腺病毒基因组的ITR(invertedterminalrepeart，末端反向重复)序列并插入有HRE序列、hTERT启动子、编码核心蛋白多糖的DNA和编码包含RGD序列的肽的DNA条件的复制型腺病毒中进一步插入全长REICDNA或REICC结构域DNA而成的。[2]如[1]所述的条件复制型腺病毒，其中，在5型腺病毒的E3区域中插入有由启动子序列、编码核心蛋白多糖的DNA和多聚A附加序列构成的DNA构建体。[3]如[1]或[2]所述的条件复制型腺病毒，其中，(i)hTERT启动子是通过附加c-Myc结合位点和Sp1结合位点而进行了修饰的hTERT启动子，(ii)在hTERT启动子的上游插入有6个含有由序列编号3所表示的碱基序列构成的HRE序列，(iii)属于E1A区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的Rb结合区域(视网膜母细胞瘤基因结合区域)缺失，(iv)属于E1B区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的编码E1B-19kDa的部分缺失，(v)E3区域的一部分缺失，(vi)在E3区域中插入有由启动子序列、编码核心蛋白多糖的DNA和多聚A附加序列构成的DNA构建体，(vii)在E3区域中插入有编码包含RGD序列的肽的DNA，并且(viii)在E1区域中插入有由CMV启动子序列、编码REICDNA或REICC结构域DNA的DNA和多聚A附加序列构成的DNA构建体。[4]如[3]所述的条件复制型腺病毒，其中，(iii)属于E1A区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的第923～946位的作为Rb结合区域(视网膜母细胞瘤基因结合区域)的24个碱基缺失，(iv)属于E1B区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的第1722～1986位的编码E1B-19kDa的部分的碱基缺失，(v)属于E3区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的第28592～30479位的碱基缺失。[5]如[1]～[4]中任一项所述的条件复制型腺病毒，其中，REIC为全长REIC。[6]如[1]～[4]中任一项本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在癌细胞中特异性地增殖并表达REIC蛋白质或REIC C结构域蛋白质的条件复制型腺病毒，其是在包含5型腺病毒基因组的ITR序列即末端反向重复序列并插入有HRE序列、hTERT启动子、编码核心蛋白多糖的DNA和编码包含RGD序列的肽的DNA的条件复制型腺病毒中进一步插入全长REIC DNA或REIC C结构域DNA而成的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.28 JP 2014-1106721.一种在癌细胞中特异性地增殖并表达REIC蛋白质或REICC结构域蛋白质的条件复制型腺病毒，其是在包含5型腺病毒基因组的ITR序列即末端反向重复序列并插入有HRE序列、hTERT启动子、编码核心蛋白多糖的DNA和编码包含RGD序列的肽的DNA的条件复制型腺病毒中进一步插入全长REICDNA或REICC结构域DNA而成的。2.如权利要求1所述的条件复制型腺病毒，其中，在5型腺病毒的E3区域中插入有由启动子序列、编码核心蛋白多糖的DNA和多聚A附加序列构成的DNA构建体。3.如权利要求1或2所述的条件复制型腺病毒，其中，(i)hTERT启动子是通过附加c-Myc结合位点和Sp1结合位点而进行了修饰的hTERT启动子，(ii)在hTERT启动子的上游插入有6个由序列编号3所表示的碱基序列构成的HRE序列，(iii)属于E1A区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的Rb结合区域即视网膜母细胞瘤基因结合区域缺失，(iv)属于E1B区域的一部分的、序列编号4所表示的5型腺病毒基因组序列的编码E1B-19kDa的部分的碱基缺失，(v)E3区域的一部分缺失，(vi)在E3区域中插入有由启动子序列、编码核心蛋白多糖的DNA和...

【专利技术属性】
技术研发人员：公文裕巳，那须保友，渡部昌实，尹彩钰，
申请(专利权)人：国立大学法人冈山大学，桃太郎源株式会社，汉阳大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：日本;JP