【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及构建慢病毒表达的外泌体标记质粒及其应用。
技术介绍
外泌体是细胞来源的小泡，存在于生物的体液中和细胞培养的培养基中，其直径在30nm到100nm之间。外泌体又被称为Microvesicles,epididimosomes,argosomes,exosome-likevesicles,microparticles,promininosomes,prostasomes,dexosomes,texosomes,dex,tex,archeosomesandoncosomes。外泌体的形成途径有两个：其一，细胞内的泡体和细胞膜融合形成；其二，直接由细胞膜形成。(维基百科)。外泌体包含各种来源于细胞的成分，诸如蛋白质，RNA，双链DNA，脂肪，代谢分子。但不同的外泌体含有相同的组分。外泌体可通过和其他细胞膜的融合进而内吞来发挥作用，Rabs在细胞内吞途径和外泌体的形成中发挥重要作用。越来越多的研究发现外泌体在生物体正常生理状态下发挥重要作用；也参与各种疾病过程，可用于疾病的诊断，治疗和预后。在正常生理状...
【技术保护点】
一种表达外泌体标记物的慢病毒载体，以慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro为出发载体进行改进，其特征在于，所述的表达外泌体标记物的慢病毒载体是在pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑Puro的多克隆位点区域分别引入带SBP标签的CD63基因和CD9基因，同时在引入的CD63基因和CD9基因后面添加绿色荧光蛋白基因ZsGreen1。
【技术特征摘要】
1.一种表达外泌体标记物的慢病毒载体，以慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro为出发载体进行改进，其特征在于，所述的表达外泌体标记物的慢病毒载体是在pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的多克隆位点区域分别引入带SBP标签的CD63基因和CD9基因，同时在引入的CD63基因和CD9基因后面添加绿色荧光蛋白基因ZsGreen1。
2.如权利要求1所述的表达外泌体标记物的慢病毒载体，其特征在于：所述的表达外泌体标记物的慢病毒载体为将慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro的XbaI和NotI酶切位点之间分别包含CD63-SBP-ZsGreen1和CD9-SBP-ZsGreen片段的慢病毒载体。
3.一种权利要求2所述的表达外泌体标记物的慢病毒载体构建方法，其特征在于：按如下的步骤进行：
1)根据GeneBank中人CD63、CD9的mRNA上CDS序列、SBP标签序列、ZsGreen1标签蛋白，设计XbaI-CD63-SBP-ZsGreen1-NotI和XbaI-CD9-SBP-ZsGreen1-NotI两个DNA片段，送于上海Invitrogen公司合成双链DNA分子；
2)分别用限制性内切酶XbaI和NotI酶切步骤1合成的双链DNA分子，酶切体系：XbaI:1μL，NotI:1μL，缓冲液:3μL，合成的DNA序列:1μg，补充去离子水至30μL、37℃酶切4小时，回收酶切产物；
3)用限制性内切酶XbaI...
【专利技术属性】
技术研发人员：金卫林，殷楚，
申请(专利权)人：武汉淼灵生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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