人ASPP2重组腺病毒制备及其抗肿瘤应用制造技术

本发明专利技术涉及一种人ASPP2重组腺病毒制备及其抗肿瘤应用，所述重组腺病毒包含ASPP2全长基因序列，本发明专利技术将ASPP2基因与穿梭质粒(pAdTrack‑CMV)相连接，构建重组穿梭质粒pAdTrack‑CMV‑ASPP2；再将重组穿梭质粒线性化后与骨架质粒pAdEasy‑1在大肠杆菌BJ5183中同源重组，构建重组腺病毒载体Ad‑ASPP2；将该重组腺病毒Ad‑ASPP2在293T细胞中大量扩增，纯化后制备成一种抗肿瘤制剂。

【技术实现步骤摘要】
人ASPP2重组腺病毒制备及其抗肿瘤应用
本专利技术属于医药领域，涉及一种重组腺病毒，具体涉及重组腺病毒在抗肿瘤方面的应用。
技术介绍
ASPP2(apoptosisstimulatingproteinofp532)，又被称为53BP2L，是p53结合蛋白家族的一个促凋亡成员。ASPP2蛋白全长含有1128个氨基酸，包含了多个结构和功能区：N端具有β-Grasp泛素样折叠和α螺旋结构域，中间部分是脯氨酸富含区，C末端部分是Ank-SH3结构域，包含4个Ankyrin重复序列和1个SH3结构域(Src同源3结构域)。ASPP2的不同结构域都有相互作用蛋白，其中C末端介导了P53、Bcl-2等大部分的蛋白间相互作用。ASPP2最被熟知的功能即调节p53及其家族成员(p63和p73)的促凋亡能力。ASPP2增强p53家族成员的活力并特异性促进促凋亡靶基因而不是细胞周期抑制基因的表达。体外研究证实ASPP2通过p53或非P53介导通路抑制细胞生长，促进细胞凋亡,ASPP2能够以p53依赖和非依赖途径，增强药物促凋亡和治疗的敏感性，说明ASPP2可以通过促进药物诱导的凋亡作用来抑制肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASPP2重组腺病毒，所述重组腺病毒包含ASPP2全长基因序列。

【技术特征摘要】
1.一种ASPP2重组腺病毒，所述重组腺病毒包含ASPP2全长基因序列。2.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其制备方法如下：步骤1、将ASPP2基因与穿梭质粒(pAdTrack-CMV)相连接，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ASPP2；步骤2、再将重组穿梭质粒线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组，构建重组腺病毒载体Ad-ASPP2；步骤3、将重组腺病毒载体Ad-ASPP2在293T细胞中扩增，经过提取分离纯化得到。3.根据权利要求2所述的重组腺病毒的制备方法，其特征在于，步骤如下：1构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ASPP2Pcr3.1-ASPP2质粒经KpnI和XbaI双酶切出Kb的目的基因，琼脂糖凝胶电泳，glassmilk法凝胶回收目的片段，亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV，形成pAdTrack-CMV-ASPP2；2细菌内同源重组构建重组腺病毒载体Ad-ASPP2pAdTrack-CMV-ASPP2用PmeI线性化后，琼脂糖凝胶电泳，凝胶回收目的片段，用牛小肠碱性酶去磷酸化，乙醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈德喜，刘晓霓，李庆，王爽，许坚吉，
申请(专利权)人：北京市肝病研究所，首都医科大学附属北京佑安医院，
类型：发明
国别省市：北京,11