表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用制造技术

本发明专利技术涉及表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用。本发明专利技术构建的一种重组嵌合火鸡疱疹病毒rHVT‑GB株，是将血清Ⅰ型MDV GB(glycoprotein B，MDV1‑GB)基因的表达盒重组到HVT中获得的重组病毒，该重组病毒可作为生产毒种用于制备马立克氏病疫苗，相比HVT起到更好的免疫保护作用大大增强了对MD的免疫保护能力；该rHVT‑GB重组毒株可用作载体，构建能够表达其它禽类病原保护性抗原基因(如新城疫病毒F基因、传染性喉气管炎的GB基因和传染性法氏囊的VP2基因)的病毒用于制备活载体疫苗预防其它相应的禽类疫病。

【技术实现步骤摘要】
表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用
本专利技术涉及一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及其应用。动物生物制品学领域，
技术介绍
鸡马立克氏病(Marek’sdisease,MD)，是由鸡马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV)引起的一种鸡马立克氏病(Marek`sDisease，MD)是由鸡疱疹病毒引起鸡的一种最常见的淋巴细胞增生性疾病，以外周神经、虹膜、皮肤、肌肉和各内脏器官的淋巴样细胞浸润、增生和肿瘤形成为特征。本病早在1907年由匈牙利的兽医病理学家马立克首先发现，并在1961年命名为马立克氏病。现在世界各主要养鸡国家和地区均有流行，在我国也是经济意义上最重要的禽病之一，对我国养鸡生产造成严重威胁和巨大的经济损失。马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV)属于细胞结合性疱疹病毒B群。病毒有两种存在形式，即裸体粒子(核衣壳)和有囊膜的完整病毒粒子。前者病毒核衣壳呈六角形，直径为85～100nm，有严格的细胞结合性，离开细胞致病性即显著下降和丧失，在外界环境中生存活力很低，主要见于肾小管、法氏囊、神经组织和肿瘤组织中。大多数裸体病毒粒子存在于细胞核中，偶见于细胞浆或细胞外液中。后者主要存在于细胞核膜附近或者核空泡中，直径130～170nm，主要见于羽毛囊角化层中，多数是有囊膜的完整病毒粒子，非细胞结合性，可脱离细胞而存在，对外界环境抵抗力强，在本病的传播方面起重要作用。1975年Bulow和Biggs采用间接免疫荧光试验、琼脂凝胶免疫沉淀反应及病毒中和试验，把MDV和相关病毒(HVT)分为三种血清型，随后这种分类方法由Lee所建立的MDV型特异性单克隆抗体所证实。根据MDV的三种血清型，目前商品化MDV疫苗分为致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株、无致病性的Ⅱ型SB1株和Ⅲ型火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey，HVT)FC126株。致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株对MD保护效果好，但其作为严格的细胞结合型病毒，必须液氮保存运输，极大的增加了疫苗成本。HVT可以冻干保存，节约了疫苗成本，但其对MD的保护力较弱，因此提高HVT的免疫效力十分必要。Ross将血清Ⅰ型MDV的GB基因插入到HVT基因组的TK基因，但构建的重组病毒在体内的增殖能力变弱。(RossLJ,BinnsMM,TyersP,PastorekJ,ZelnikV,ScottS:ConstructionandpropertiesofaturkeyherpesvirusrecombinantexpressingtheMarek'sdiseasevirushomologueofglycoproteinBofherpessimplexvirus.TheJournalofgeneralvirology1993,74(Pt3):371-377.)，而疫苗毒的增殖能力又和保护力紧密相关(GimenoIM,WitterRL,HuntHD,ReddySM,ReedWM:BiocharacteristicssharedbyhighlyprotectivevaccinesagainstMarek'sdisease.AvianPathol2004,33(1):59-68.)。因此，构建正常增殖且具有更高保护力的HVT非常有必要。疫苗是防制畜禽疾病的重要手段之一，目前大多重要的家禽传染病都可用相应的疫苗作有效的预防。为了进一步降低生产成本，提高产品质量，禽用新型疫苗的研究迫在眉睫。随着分子生物学技术的日臻完善，以改造病毒核酸结构为手段的疫苗，如基因缺失株疫苗、插入突变株、病毒活载体疫苗等得到了极大的发展，其中病毒活载体疫苗以生产使用方便，价格低廉，且安全性、稳定性及免疫力较强等方面优势，成为研究的热点。相对于其它病毒载体(如禽痘病毒、禽腺病毒、新城疫病毒等)，鸡马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV)作为最有潜力的疫苗载体，其突出的优点体现在：MDV是严格的细胞结合型病毒，构建的载体疫苗不受母源抗体的干扰，克服了众多活病毒载体疫苗的缺陷；MDV分子大小为180kb左右，能够容纳较大片段基因的插入，而不影响重组病毒的稳定性；MDV疫苗适合早期免疫，对多数病毒特别是免疫抑制性病毒疫苗的研发带来了曙光。基于HVT构建病毒活载体疫苗不仅具有上述优点，还可以实现一苗两防、一苗多防，具有广阔的市场前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是为提供了一种嵌合火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey,HVT)rHVT-GB，其实际上是在血清Ⅲ型马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV)HVT的基础上，将血清Ⅰ型MDVGB(glycoproteinB，MDV1-GB)基因的表达盒重组到HVT中，获得了一种全新的重组火鸡疱疹病毒rHVT-GB；本专利技术同时还为利用rHVT-GB为载体，构建能够表达其它禽类病原保护性抗原基因(如新城疫病毒F基因、传染性喉气管炎的GB基因和传染性法氏囊的VP2基因)的病毒活载体疫苗，该疫苗不仅可以预防MD，同时还能够预防其它禽类疫病。本专利技术的技术方案1.一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于该表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒被命名为一种重组火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey)rHVT-GB株，该毒株已于2017年01月11日送北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为：CGMCCNo.13400。2.本专利技术所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建，其特征在于：将血清Ⅰ型MDV的GB基因表达盒重组到HVT基因组中，重组位点为HVT(GenBank:AF291866.1)基因组的位于HVT087-HVT088基因之间的US2区域，该表达盒的基因序列如SeqIDNo:1所示。3.本专利技术所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于该重组毒株在鸡体中诱导抗马立克氏病的保护性免疫中的应用。4.本专利技术所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于该重组毒株作为生产毒株在动物疫苗株的应用。5.本专利技术所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于将该重组病毒作为病毒载体构建新的重组疫苗病毒中的应用。6.本专利技术所述特征在的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其于将新城疫病毒的F基因表达盒重组到rHVT-GB基因组中，重组位点为HVT(GenBank:AF291866.1)基因组的HVT065和HVT066之间，其中F基因表达盒的启动子序列如SeqIDNo:2所示；F基因序列如SeqIDNo:3所示；PolyA序列如SeqIDNo:6所示，构建获得的重组病毒被命名为重组火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey)rHVT-GB-NDVF株，该毒株已于2017年01月11日送交北京市朝阳区北辰本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于该表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒被命名为火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey)rHVT‑GB株重组病毒，该毒株已于2017年01月11日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为：CGMCC No.13400。

【技术特征摘要】
1.一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于该表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒被命名为火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey)rHVT-GB株重组病毒，该毒株已于2017年01月11日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为：CGMCCNo.13400。2.如权利要求1所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的构建，其特征在于：将血清Ⅰ型MDV的GB基因表达盒重组到HVT基因组中，重组位点为HVT(GenBank:AF291866.1)基因组的位于HVT087-HVT088基因之间的US2区域，该表达盒的基因序列如SeqIDNo:1所示。3.如权利要求1所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于该重组毒株在鸡体中诱导抗马立克氏病的保护性免疫中的应用。4.如权利要求1和3所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于该重组毒株作为生产毒株在动物疫苗株的应用。5.如权利要求1和3所述的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其特征在于将该重组病毒作为病毒载体构建新的重组疫苗病毒中的应用。6.如权利要求1和5所述特征在的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其于将新城疫病毒的F基因表达盒重组到rHVT-GB基因组中，重组位点为HVT(GenBank:AF291866.1)基因组的HVT065和HVT066之间，其中F基因表达盒的启动子序列如SeqIDNo:2所示；F基因序列如SeqIDNo:3所示；PolyA序列如SeqIDNo:6所示，构建获得的重组病毒被命名为火鸡疱疹病毒(Herpesvirusofturkey)rHVT-GB-NDVF株重组病毒，该毒株已于2017年01月11日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为：CGMCCNo.13399。7.如权利要求6所述特征在的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其于重组火鸡疱疹病毒rHVT-GB-NDVF株在鸡中诱导抗马立克氏病和鸡新城疫的保护性免疫中的应用、并作为生产毒株在相应动物疫苗中的应用。8.如权利要求7所述特征在的一种表达血清Ⅰ型马立克氏病病毒GB基因的重组火鸡疱疹病毒的应用，其于重组火鸡疱疹病毒rHVT-GB-NDVF株作为病毒载体构建新的重组疫苗病毒的应用。9.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕建敏，
申请(专利权)人：北京邦卓生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11