外泌体miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作为肝癌诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术涉及血浆外泌体miRNA

【技术实现步骤摘要】
外泌体miRNA
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485
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3p和miRNA
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885
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5p作为肝癌诊断标志物的应用


[0001]本专利技术属于生物技术和医学领域，具体涉及血浆外泌体miRNA
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485
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3p和miRNA
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885
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5p作为肝癌诊断标志物的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在所有恶性肿瘤中位居第四位，而病死率高居第三位，其中肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占所有原发性肝癌的85％～90％。HCC预后不良，主要归咎于在其隐匿的发病过程，因此很多患者在首诊时即为中晚期，失去根治性治疗机会。而AFP作为主要的血清学标志物，其标志其敏感度为40
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65％，特异性为76
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90％，有近1/3的肝癌患者AFP阴性。所以AFP作为早期诊断指标并不理想。因此寻找敏感性高的HCC血清学标志物，不仅在肝癌早期诊断中发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于诊断早期肝癌的外泌体为miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p。2.根据权利要求1所述的外泌体，其特征在于，miRNA
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485
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3p的序列为5
’‑
AGAGAGGAGAGCCGUGUAUGAC
‑3’
；miRNA
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885
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5p的序列为5
’‑
UCCAUUACACUACCCUGCCUCU
‑3’
。3.权利要求1所述的外泌体miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p在诊断肝癌方面的应用。4.权利要求1所述的外泌体miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p在诊断早期肝癌方面的应用。5.权利要求1所述的外泌体miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p作为肿瘤标记物在诊断早期肝癌方面的应用。6.权利要求1所述的外泌体miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p在制备早期肝癌诊断标记物的产品中的应用。7.权利要求1所述的外泌体miRNA
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485
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3p和/或miRNA
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885
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5p在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。8.根据权利要求权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肝癌为早期肝癌。9.权利要求1所述的外泌体的制备方法，主要包括以下3个部分：1)分离血浆中的外泌体；2)提取外泌体中miRNA；3)荧光定量PCR反应检测miRNA。10.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：1)血浆样品的制备在采血管中加入EDTA抗凝剂，采集完血液后，将采血管缓慢颠倒混匀，混匀的全血4℃1,000
‑
2,000
×
g离心5
‑
10min，上层黄色半透明液体即为待收集的血浆，吸出血浆时贴着页面逐渐往下吸，切勿吸出细胞成分；收集到的血浆可直接用于后续实验或分装好
‑
80℃冰箱保存，2)外泌体的提取将血浆室温，2,000
×
g离心20min，去除残留细胞及碎片；转移上清到新的离心管中，注意不要吸到底部沉淀；室温，10,000
×
g离心20min，去除残留碎片；用移液器转移上清到新的离心管中，1ml血浆样品，加入500ul 1
×
PBS及300ulVEX Exosome Isolation Reagent溶液，混匀后将混合液竖直放于2
‑
8℃静置30min进行孵育，室温10,000
×
g离心5min去上清，然后室温10,000
×
g离心30s，用移液器吸除残留液体，血浆外泌体即存在于管底部沉淀中，3)外泌体miRNA的提取外泌体miRNA提取使用试剂盒，主要操作步骤如下：
①
取外泌体，加入1ml Trizol充分匀浆，振荡器振荡或移液器吸打数次混匀，室温静置5min，使得核酸蛋白复合物完全分离，
②
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟华，陈德喜，李传云，李榕，陈静，罗淑敏，
申请(专利权)人：北京市肝病研究所，
类型：发明
国别省市：