HIV重组抗原、表达基因、表达载体以及HIV检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种可以应用于CMIA法检测HIV的HIV重组抗原，用于表达上述HIV重组抗原的表达基因和表达载体，以及含有上述HIV重组抗原的HIV检测试剂盒。HIV重组抗原，包括依次连接的HIV‑2亚型段和HIV‑1亚型段；所述HIV‑1亚型段为由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码得到的多肽；所述HIV‑2亚型段为由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列编码得到的多肽。这种HIV重组抗原应用于HIV检测试剂盒后，通过CMIA法检测HIV，经过试验验证，HIV检测试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性优异、可测定范围宽、检测自动化程度高和无环境污染等优点。

HIV recombinant antigen, expression gene, expression vector and HIV detection kit

The invention discloses an HIV recombinant antigen which can be applied to CMIA detection of HIV, an expression gene and an expression vector for expressing the HIV recombinant antigen, and an HIV detection kit containing the HIV recombinant antigen. The recombinant HIV antigen, which are connected to the 2 HIV subtype and HIV subtype 1 segment; polypeptide 1 isoforms by SEQ ID No.1 shows a nucleotide sequence encoding the HIV obtained; the polypeptide HIV 2 isoforms of SEQ encoding ID No.2 is shown the nucleotide sequence is obtained. The HIV HIV based on a recombinant antigen detection kit, detected by HIV CMIA method, through experiment, HIV test kit has strong specificity, high sensitivity, good repeatability and excellent stability, the advantages of wide measurement range, high degree of automation detection and no environmental pollution.

【技术实现步骤摘要】
HIV重组抗原、表达基因、表达载体以及HIV检测试剂盒
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种HIV重组抗原、表达基因、表达载体以及HIV检测试剂盒。
技术介绍
HIV(Humanimmunodeficiencyvirus)的感染在全球广泛流行，严重威胁着人们的生命健康，因此，必须对HIV感染进行监控。研发简便、准确、快速的检测产品，及早检测艾滋病病毒感染，杜绝艾滋病的传播成为预防控制艾滋病的首要手段。目前国内外用于检测艾滋病的方法有免疫学检验、核酸检测技术等。每种检测技术各有优缺，免疫学检测因为其操作简单、灵敏度和特异性好、成本低廉、检测时间短等特点，已经被各大血站、血液制品厂、医院等医疗结构所普遍采用，是应用最广的一项检测技术。免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。免疫分析经历了放射免疫检验、荧光免疫检验、酶标免疫检验等不同时期，化学发光免疫检验是免疫分析发展的一个新阶段，它环保、快速、准确的特点已得到人们的普遍认识。放射免疫法(RIA)在中国兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院，产品处于衰退期，在国际上现已基本退出临床应用，产品生命周期已终结。酶联免疫法(ELISA)，在中国兴起于20世纪80年代，现普遍使用于各级临床机构，为我国临床免疫诊断的基本方法，产品处于成熟期；国际上兴起于20世纪70年代，现仍在临床应用，产品处于衰退期。化学发光免疫法(CLIA)20世纪90年代导入中国，现个别较大医院开展个别项目，产品处于导入期或成长期；国际上兴起于20世纪80年代，现已被临床普遍使用，成为临床免疫诊断的支柱方法产品处于成熟期，仪器自动化程度高，试剂系列化状态。化学发光免疫分析根据其标记物的不同可分为三大类，即直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析、电化学发光免疫分析法。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶(AP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂过量，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长，故检测方式简单、成本较低。目前，对于HIV的检测方法较多，其中最常用的有ELISA法、胶体金，核酸检测等，随着医疗技术的发展，化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)开始用于HIV抗体的检测。相较于ELISA法，1)CMIA法的灵敏度更高：其灵敏度可达10-16mol/L(RIA为10-12mol/L)，又如化学发光底物(如AMPPD)可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍，因而对于血清中HIV抗体浓度较低的标本也可有效检出，减少假阴性的发生；2)CMIA具有更宽的线性动力学范围：发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系，这与显色的酶免疫分析吸光度(OD值)为2.0的范围相比，优势明显，虽然RIA也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用；3)光信号持续时间长：辉光型(glowtype)的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。4)使用期长：有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶联的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以提高劳动效率，也利于推广应用。5)CMIA法免去了ELISA反复加样、洗板等操作，可有效降低变异系数，提高可重复性；6)CMIA法采用全自动酶免疫分析仪，自动化程度高，可用于大量标本的快速、准确检测。然而，目前市场上并没有特异性和灵敏度较好的采用CMIA法的HIV检测试剂盒出现。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种灵敏度较好的、可以应用于CMIA法检测HIV的HIV重组抗原。此外还有必要提供用于表达上述HIV重组抗原的表达基因和表达载体，以及含有上述HIV重组抗原的HIV检测试剂盒。一种HIV重组抗原，包括依次连接的HIV-2亚型段和HIV-1亚型段；所述HIV-1亚型段为由SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编码得到的多肽；所述HIV-2亚型段为由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列编码得到的多肽。在一个实施例中，所述HIV重组抗原还包括连接在所述HIV-2亚型段远离所述HIV-1亚型段的一端的OSMY。一种表达基因，包括依次连接的HIV-2片段和HIV-1片段；所述HIV-1片段的序列如SEQIDNo.1所示；所述HIV-2片段的序列如SEQIDNo.2所示。在一个实施例中，所述表达基因还包括连接在所述HIV-2片段远离所述HIV-1片段的一端的用于表达OSMY的序列。一种表达载体，包括上述的表达基因。在一个实施例中，所述表达载体为pET-24a(+)或pET-21(+)。一种HIV检测试剂盒，包括上述的HIV重组抗原与磁微球的偶联物以及标记物标记的所述HIV重组抗原。在一个实施例中，所述HIV重组抗原与磁微球的偶联物中，所述HIV重组抗原与磁微球通过化学交联法偶联。在一个实施例中，所述HIV重组抗原与磁微球的偶联物中，磁微球带有氨基和羧基中至少一种。在一个实施例中，所述标记物标记的所述HIV重组抗原中，标记物为碱性磷酸酶。这种HIV重组抗原应用于HIV检测试剂盒后，通过CMIA法检测HIV抗体，经过试验验证，HIV检测试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性优异、可测定范围宽、检测自动化程度高和无环境污染等优点。附图说明图1为实施例1中得到的第一HIV重组抗原以及第二HIV重组抗原的SDS-PAGE电泳图，其中，泳道1为marker，泳道2为第一HIV重组抗原，泳道3为第二HIV重组抗原。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。本专利技术公开了一实施方式的HIV重组抗原，包括依次连接的HIV-2亚型段和HIV-1亚型段。HIV-2亚型段为由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列编码得到的多肽。HIV-1亚型段为由SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编码得到的多肽。优选的，上述HIV重组抗原还包括连接在HIV-2亚型段远离HIV-1亚型段的一端的OSMY。即，上述HIV重组抗原包括依次连接的OSMY、HIV-2亚型段和HIV-1亚型段。本专利技术还公开了用于表达上述HIV重组抗原的表达基因。用于表达上述HIV重组抗原的表达基因包括依次连接的HIV-2片段和HIV-1片段。HIV-1片段的序列如SEQIDNo.1所示，记为HⅠ。HIV-2片段的序列如SEQIDNo.2所示，记为HⅡ。优选的，用于表达上述HIV重组抗原的表达基因还包括连接在HIV-2片段远离HIV-1片段的一端的用于表达OSMY的序列(可记为OSMY片段)。上述基因片段为采用基因工程技术手段，通过大量分子生物学分析软件分析筛选出来的优势表位基因区段。HⅠ为HIV-1亚型的gp41蛋白的优势表位基因区段。HⅡ为H本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种HIV重组抗原，其特征在于，包括依次连接的HIV‑2亚型段和HIV‑1亚型段；所述HIV‑1亚型段为由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码得到的多肽；所述HIV‑2亚型段为由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列编码得到的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种HIV重组抗原，其特征在于，包括依次连接的HIV-2亚型段和HIV-1亚型段；所述HIV-1亚型段为由SEQIDNo.1所示的核苷酸序列编码得到的多肽；所述HIV-2亚型段为由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列编码得到的多肽。2.根据权利要求1所述的HIV重组抗原，其特征在于，所述HIV重组抗原还包括连接在所述HIV-2亚型段远离所述HIV-1亚型段的一端的OSMY。3.一种表达基因，其特征在于，包括依次连接的HIV-2片段和HIV-1片段；所述HIV-1片段的序列如SEQIDNo.1所示；所述HIV-2片段的序列如SEQIDNo.2所示。4.根据权利要求3所述的表达基因，其特征在于，所述表达基因还包括连接在所述HIV-2片段远离所述HIV-1片段的一端的用于表达OSM...

【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞净，孟媛，于秀玲，刘俊鹏，王益琼，林育佳，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44