人ApoE-ε4抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及人ApoE-ε4抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒。本发明专利技术的人ApoE-ε4抗原表位肽的氨基酸序列为序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列之一。本发明专利技术的ApoE-ε4抗原由人ApoE-ε4抗原表位肽与蛋白载体偶联制得。本发明专利技术的人ApoE-ε4单克隆抗体或多克隆抗体由本发明专利技术的ApoE-ε4抗原制得。本发明专利技术的人ApoE-ε4单克隆抗体或多克隆抗体用于制备人ApoE-ε4体外诊断试剂盒。本发明专利技术的人ApoE-ε4抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人ApoE-ε4的体外检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人载脂蛋白E-ε4(ApoE-ε4)抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的ApoE-ε4特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人ApoE-ε4体外诊断试剂盒上的应用，人ApoE-ε4体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人ApoE-ε4蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。
技术介绍
老年性痴呆(Alzheimer’sdisease,AD)是一种原发性大脑退行性疾病，已经成为人类继心血管病、癌症、中风之后的第四大杀手。按目前的医疗水平，对于AD的治疗，只能延缓早期患者的病情发展，对中晚期的患者尚无有效的治疗方法。因此，早期诊断、早期干预、延缓病情发展成为AD治疗的关键。近年来，对老年性痴呆早期诊断的研究已经引起许多研究者的注意，寻找一种有效的、可靠的、非侵入式的、生化检测手段是众多研究者的共同心愿。ApoE-ε4就是这样的一种生化标志物。ApoE是研究较多的基因，也是影响老化途径的最重要的遗传因素之一，ApoE-ε4基因携带者是公认的AD致病因素。研究发现，19号染色体上的载脂蛋白E(ApoE)基因的ε4等位基因是AD的准风险因子,且二者之间存在着剂量依赖效应。因此，通过在血清中检测载脂蛋白E，可以判断AD。因此，ApoE-ε4有希望作为AD诊断的标志物。检测血清中的ApoE水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具有免疫原性的ApoE抗原表位肽、制备特异性的ApoE抗原及抗体即成了重点。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种人ApoE-ε4抗原表位肽，用该抗原表位肽制备的ApoE-ε4特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其在制备人ApoE-ε4试剂盒上的应用，以及人ApoE-ε4体外诊断试剂盒。具体而言，本专利技术提供了：一种人ApoE-ε4抗原表位肽，其中所述ApoE-ε4抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Tyr-Lys-Val-Glu-Gln-Ala-Val-Glu-Thr-Glu-Pro-Glu-Pro-Glu-Leu-Arg；(2)Tyr-Ser-Arg-Thr-Arg-Asp-Arg-Leu-Asp-Glu-Val-Lys-Glu-Gln-Val-Ala-Glu-Val-Arg-Ala-Lys。本专利技术还提供了一种ApoE-ε4抗原，其是通过使所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种ApoE-ε4抗原，其是通过使所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人ApoE-ε4抗体，其是由所述的ApoE-ε4抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述ApoE-ε4抗原是通过使所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人ApoE-ε4抗体，其是由所述的ApoE-ε4抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述ApoE-ε4抗原是通过使所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了所述的人ApoE-ε4抗体在制备人ApoE-ε4体外诊断试剂盒上的应用。本专利技术还提供了一种人ApoE-ε4体外诊断试剂盒，其包含所述的人ApoE-ε4抗体作为包被抗体，其中所述包被抗体优选为单克隆抗体。优选地，所述试剂盒还包含结合抗体，所述结合抗体为所述的人ApoE-ε4抗体，并且该结合抗体优选为多克隆抗体，并且当所述结合抗体来源于所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的一者时，所述包被抗体来源于所述的人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)中的另一者。优选地，所述试剂盒还包含酶标记的第二抗体。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的人ApoE-ε4抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。2.用本专利技术制备的ApoE-ε4单克隆抗体和多克隆抗体能够高度特异地与血液样本中的ApoE-ε4结合。3.本专利技术的人ApoE-ε4体外诊断试剂盒可以有效地检测血清中的ApoE-ε4的水平，可用来判断老年性痴呆。4.本专利技术将荧光分析技术与快速层析免疫技术相结合，提供了一种用于定量检测待测物中人ApoE-ε4蛋白的荧光免疫层析试纸，用该试纸检测待测物中的人ApoE-ε4蛋白，操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽、特异性高、灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。5.本专利技术在制备所述人ApoE-ε4蛋白的荧光免疫层析试纸的过程中，通过大量的试验摸索，优化了各方面的制备条件，使得用本发明的荧光免疫层析试纸进行检测时，荧光信背比大大提高，从而提高了检测灵敏度和结果可信度；此外，本专利技术还通过试纸的检测区与质控区的荧光强度比值的变化来反应样品中ApoE-ε4的含量，这与传统的层析技术只考查检测区的绝对荧光强度相比，最大程度上减少了外界条件和背景等的影响，进一步提高了检测结果可信度。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本发明的范围之内。一、人ApoE-ε4抗原表位肽本文中所述的人ApoE-ε4蛋白是本领域已知的，其氨基酸序列是本领域已知的，可以在NCBI等专业数据库中查到。本专利技术提供了人ApoE-ε4抗原表位肽(1)和(2)，其氨基酸序列分别如序列表SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，为：(1)Y-K-V-E-Q-A-V-E-T-E-P-E-P-E-L-R；和(2)Y-S-R-T-R-D-R-L-D-E-V-K-E-Q-V-A-E-V-R-A-K。本专利技术的专利技术人经过大量的理论研究和实验摸索，最终筛选得到两种具有良好的抗原性的抗原表位肽。ApoE-ε4抗原表位肽(1)包含人ApoE-ε4蛋白(NCBI登录号AAB59546.1)N端第19位至第33位肽段，并且在该肽段的N段加上一个Y，从而构成ApoE-ε4抗原表位肽(1)。ApoE-ε4抗原表位肽(2)包含人ApoE-ε4蛋白(NCBI登录号AAB59546.1)C端第241位至第260位的肽本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人ApoE‑ε4抗原表位肽，其中所述ApoE‑ε4抗原表位肽的氨基酸序列为如下两者之一：(1)Tyr‑Lys‑Val‑Glu‑Gln‑Ala‑Val‑Glu‑Thr‑Glu‑Pro‑Glu‑Pro‑Glu‑Leu‑Arg；(2)Tyr‑Ser‑Arg‑Thr‑Arg‑Asp‑Arg‑Leu‑Asp‑Glu‑Val‑Lys‑Glu‑Gln‑Val‑Ala‑Glu‑Val‑Arg‑Ala‑Lys。

【技术特征摘要】
1.一种人ApoE-ε4抗原表位肽，其中所述ApoE-ε4抗原表位肽
的氨基酸序列为如下两者之一：
(1)Tyr-Lys-Val-Glu-Gln-Ala-Val-Glu-Thr-Glu-Pro-Glu-Pro-Glu-Leu
-Arg；
(2)Tyr-Ser-Arg-Thr-Arg-Asp-Arg-Leu-Asp-Glu-Val-Lys-Glu-Gln-V
al-Ala-Glu-Val-Arg-Ala-Lys。
2.一种ApoE-ε4抗原，其是通过使权利要求1所述的人ApoE-ε4
抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成的。
3.一种ApoE-ε4抗原，其是通过使权利要求1所述的人ApoE-ε4
抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成的。
4.一种人ApoE-ε4抗体，其是由权利要求2所述的ApoE-ε4抗
原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。
5.一种人ApoE-ε4抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44