抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒包括：抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成抗透明带抗体的检测这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1U/L，相对于传统的抗透明带抗体的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。

Chemiluminescence immunoassay kit for anti zona pellucida antibody and preparation method thereof

The invention discloses a azpab chemiluminescent immunoassay kit and preparation method thereof, anti zona pellucida antibody chemiluminescence immunoassay kit includes: chemical anti zona pellucida antibody recombinant protein pack carboxylated magnetic particles were labeled and anti Human Immunoglobulin luminescent markers. This kind of anti zona pellucida antibody chemiluminescence immunoassay kit for detection tool by automatic chemiluminescence immunoassay analyzer, detection of the anti zona pellucida antibody of anti zona pellucida antibody immunoassay test kit, chemical experiments, the detection sensitivity of 1U/ L, compared with the traditional detection method of anti zona pellucida antibody sensitivity at least increased 10 times, the Zonapellucida high detection accuracy luminescence immunoassay kit for antibody chemistry.

【技术实现步骤摘要】
抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
透明带是一层包绕着卵母细胞及着床前孕卵的非细胞性明胶样酸性糖蛋白膜，主要由3种糖蛋白组成的内含特异性精子受体，其作用是诱发精子顶体反应、精卵识别、结合、穿透和阻止多精子入卵，在正常生理情况下，精子与透明带结合后，依靠精子的酶系统产生局部的溶解作用，受精后透明带恢复完整性，保护受精卵的发育。抗透明带抗体在体内与透明带结合，可以阻止精卵结合，干扰卵子与卵泡细胞间的反应，导致卵细胞和卵子闭锁。抗透明带抗体另一方面会使精子的运动能力下降，影响精子穿过宫颈黏液及上行，并影响精子获能；另外还会对透明带的孕卵产生损伤作用，结果导致不能正常发育而至流产。国内外研究均在不孕妇女中发现较高的透明带抗体检出率。因此抗透明带抗体检测对临床诊断与治疗不孕不育患者也有重要意义。目前临床检测抗透明带抗体的常见方法有酶联免疫吸附法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着一些不足之处。一、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；(2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；(3)缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；(4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；(5)检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。二、化学发光法化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光。酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶两种，但都有一定的局限性，辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比酶促化学发光具有明细优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。一种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，包括：抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。在一个实施例中，所述抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述抗透明带抗体重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。在一个实施例中，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述抗人免疫球蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。在一个实施例中，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。在一个实施例中，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。在一个实施例中，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。在一个实施例中，所述A液为H2O2溶液，所述B液为NaOH溶液。在一个实施例中，还包括抗透明带抗体定标品。在一个实施例中，所述抗透明带抗体定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗透明带抗体的溶液。一种上述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入抗透明带抗体重组蛋白，室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒；以及取抗人免疫球蛋白，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应1h~2h后除杂，得到抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成抗透明带抗体的检测这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到1U/L，相对于传统的抗透明带抗体的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。附图说明图1为一实施方式的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法的流程图；图2为实施例3得到的抗透明带抗体标准曲线图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。一实施方式的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，包括：抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。优选的，抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，抗透明带抗体重组蛋白与羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。优选的，抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，抗抗人免疫球蛋白与化学发光标记物的比例为50：1~10。优选的，羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。化学发光标记物可以为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。其中，化学发光标记物优选为吖啶酯。在其他的实施例中，上述抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒还包括化学发光底物液。化学发光底物液包括A液和B液。A液可以为H2O2溶液，B液可以为NaOH溶液。本实施例中，A液为浓度为0.1mol/L的H2O2溶液，B液为浓度为0.25mol/L的NaOH溶液。在其他的实施例中，上述抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒还包括抗透明带抗体定标品。抗透明带抗体定标品为浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗透明带抗体的溶液。具体的，抗透明带抗体定标品可以采用标准品缓冲液将抗透明带抗体配制成浓度分别为1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗透明带抗体的溶液。这种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒用于抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。

【技术特征摘要】
1.一种抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物。2.根据权利要求1所述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗透明带抗体重组蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述抗透明带抗体重组蛋白与所述羧基化的磁微粒的比例为1：25~35。3.根据权利要求1所述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗人免疫球蛋白标记的化学发光标记物中，所述抗透明带抗体重组蛋白与所述化学发光标记物的比例为50：1~10。4.根据权利要求1所述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。5.根据权利要求1所述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。6.根据权利要求1所述的抗透明带抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。7.根据权利要求6所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：段桂开，黄涛，夏福臻，钱纯亘，申国辉，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44