一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供的ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白特异的结合，具有较高的特异性和灵敏度，将ECM1蛋白抗体应用于检测ECM1蛋白，能特异且灵敏的检测到ECM1蛋白，使检测结果更为可靠准确；而应用ECM1蛋白抗体制备检测ECM1蛋白的试剂盒快速方便的检测ECM1蛋白，还能定量检测出ECM1蛋白，为后续的检测分析提供可靠的准确的数据，将ECM1蛋白抗体检测精液中ECM1蛋白，能精确快速得到检测结果。
ECM1 protein antibody and its application and kit
The invention relates to a ECM1 protein antibody and an application thereof, and belongs to the technical field of biomedicine. ECM1 protein antibody provided by the invention can combine with ECM1 protein, with high specificity and sensitivity, ECM1 protein antibody used to detect ECM1 protein, can detect the specificity and sensitivity of ECM1 protein, making the results more accurate and reliable; and the application of ECM1 protein antibody preparation kit for detecting ECM1 protein convenient and rapid detection of ECM1 protein, but also the quantitative detection of ECM1 protein, provide reliable and accurate data for subsequent analysis, the ECM1 protein ECM1 protein antibody in the semen test, can quickly and accurately obtain the detection result.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药
，且特别涉及一种ECM1蛋白抗体及其应用、试剂盒。
技术介绍
细胞外基质蛋白1(extracellularmatrixprotein1，ECM1)是1994年在鼠的成骨基质细胞中分离出来的一种分泌性糖蛋白。细胞外基质蛋白1广泛存在于各类组织器官中，与很多的疾病有一定关联。近年来的研究发现，ECM1具有多种功能，如ECM1基因的缺失，可导致类脂蛋白沉积症的发生，硬化性苔藓患者血清中存在高滴度的ECM1自身抗体，并且一些慢性硬化性苔藓患者容易并发恶性肿瘤，主要是鳞状细胞癌。目前已知细胞外基质的肿瘤的发生及转移等方面有主要作用。目前，梗阻性与非梗阻性无精症的检测多采用睾丸穿刺技术进行检测；该方法传统而且会给患者带来心理负担和生理痛苦，同时还会给患者带来感染的风险。需要采用新的方法对梗阻性与非梗阻性无精症进行检测。目前，我们对对细胞外基质蛋白1的研究和应用主要集中在癌症方面，而细胞外基质蛋白1在人类精细胞中的表达及应用了解和研究还较少，但前景广泛，在本技术中，可以用于初步区分检测梗阻性与非梗阻性无精症。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种ECM1蛋白抗体，该抗体能特异的识别ECM1蛋白，具有较高的特异性和灵敏度。本专利技术的第二目的在于提供上述ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。本专利技术的第三目的在于提供上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。本专利技术的第四目的在于提供一种ECM1蛋白检测试剂盒，该试剂盒能方便快速的检测ECM1蛋白。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。一种ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。上述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。一种ECM1蛋白检测试剂盒，其包括上述的ECM1蛋白抗体。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：ECM1蛋白抗体能够与ECM1蛋白特异的结合，具有较高的特异性和灵敏度，将ECM1蛋白抗体应用于检测ECM1蛋白，能特异且灵敏的检测到ECM1蛋白，使检测结果更为可靠准确；而应用ECM1蛋白抗体制备检测ECM1蛋白的试剂盒快速方便的检测ECM1蛋白，还能定量检测出ECM1蛋白，为后续的检测分析提供可靠的准确的数据。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种ECM1蛋白的抗体及其应用、试剂盒进行具体说明。细胞外基质蛋白1(extracellularmatrixprotein1，ECM1)是1994年在鼠的成骨基质细胞中分离出来的一种分泌性糖蛋白。最初在是在小鼠的成骨基质细胞株MN7的细胞中通过二维SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳发现了该蛋白的存在。ECM1蛋白由540个氨基酸组成，分子量为60.7kDa，等电点PI6.68。ECM1蛋白的540个氨基酸中，第1-19个氨基酸组成疏水性信号肽；第20-150个氨基酸组成不含半胱氨酸的区域；第151-279个与第280-405个组成两个前后重叠区域；第406-540个氨基酸组成C末端区域。ECM1蛋白的氨基酸含有6个成对的半胱氨酸，16个单个的半胱氨酸，其排列与血清白蛋白家族的半胱氨酸CC·(X7-10)-c典型模式相同。ECM1蛋白中有一个疏水性信号肽和几个糖基化位点，说明该蛋白是一种分泌性糖蛋白。男性不育很多情况是无精子症或严重少精子症。ECM1蛋白作为一种分泌性蛋白，在男性精液中也必然会产生，通过分析ECM1蛋白就能对男性的梗阻性无精症与非梗阻性无精症有一个初步的判断。一种ECM1蛋白抗体，ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应。ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。ECM1蛋白作为蛋白靶点，ECM1蛋白抗体能特异的识别ECM1蛋白，且具有较高的灵敏度，使检测的结果更加的准确和可靠。ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。上述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。进一步地，上述ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用，包括：浓度为0.3μg/mL-3μg/mL的ECM1蛋白抗体包被于酶标板，洗涤并拍干所述酶标板，加入待测样本和标准品后，再加入按照1:3000-1:10000稀释的酶标抗体并孵育，洗涤并拍干所述酶标板，然后加入显色液显色，加入终止液终止反应，在450nm波长下检测OD值。本应用主要采用双抗夹心的方式进行反应，将ECM1蛋白抗体包被于酶标板等固定相，然后洗掉多余的未结合在固定相的ECM1蛋白抗体。在酶标板上设置几个孔，加入梯度稀释的ECM1标准蛋白，另外设置一个空白孔加等量稀释液，其余的孔加入待测样本，使待测样本或标准蛋白与ECM1蛋白抗体通过抗原抗体反应，经过充分的反应后；洗涤酶标板，加入酶标抗体，使酶标抗体与待测样本或标准蛋白反应，加入显色液与酶标抗体反应，产生显色反应；然后加入终止液将反应终止，然后通过酶标仪，在450nm波长下，读取酶标孔的吸光度OD值读数。通过将标准蛋白按照10、102、103、104、105和106的倍数稀释，并测定每个梯度浓度的标准蛋白的OD值，并根据每个梯度浓度的OD值与梯度浓度的关系，得到蛋白浓度与OD值之间的关系的标准曲线。通过标准曲线可以计算出每个待测样本的ECM1蛋白的具体含量。进一步地，上述应用中，抗体包被前还包括样品采集，采集精液样本10-40μL，并且离心20-30nim，重复离心3次，取上清作为待测样本。采集的精液样本，先液化后，采用离心的方法，取上清，将取得的上清作为待测样本。上述的ECM1蛋白抗体在制备ECM1蛋白检测试剂盒中的应用。一种ECM1蛋白检测试剂盒，其包括上述的ECM1蛋白抗体。进一步地，ECM1蛋白检测试剂盒还包括标准蛋白、已包被的酶标板、洗涤液、样品稀释液、抗体稀释液、终止液、HRP标记的ECM1蛋白的抗体和TMB显色液中的至少一种。ECM1标准蛋白在试剂盒中，既可以作为一个阳性参考，还能将ECM1标准蛋白梯度稀释后，通过测定梯度稀释的ECM1标准蛋白的OD值，从而得到计算样本中ECM1蛋白含量的标准曲线。酶标板，一般选用96孔的酶标板，将酶标孔作为抗体包被以及后续反应等的一个反应池。洗涤液，在抗体包被，样品、标准品孵育，抗体孵育反应等步骤中，会有一些残余的抗体或者未结合的样品以及非特异性结合，用洗涤液清洗掉，避免对最终的读数的影响。终止液，用于终止整个反应，控制反应时间，避免持续的反应导致吸光度OD值的不稳定。封闭液，通常选用BSA蛋白或者脱脂奶粉配制封闭液，封闭液可以封闭遮盖未结合的靶点，使检测的结果更加的准确。酶标抗体，本技术将已知的ECM1蛋白的抗体用辣根过氧化物酶HRP标记，方便显色和检测。过氧化酶，通常来源于辣根(因此称辣根过氧化物酶，HorseradishPeroxidase，HRP)，是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ECM1蛋白抗体，其特征在于，所述ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种ECM1蛋白抗体，其特征在于，所述ECM1蛋白抗体用于与ECM1蛋白发生抗原抗体反应，ECM1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.如权利要求1所述的ECM1蛋白抗体在检测ECM1蛋白中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括：将浓度为0.3μg/mL-3μg/mL的所述ECM1蛋白抗体包被于酶标板，洗涤并拍干所述酶标板，加入待测样本和标准品后，再加入按照1:3000-1:10000稀释的酶标抗体并孵育，洗涤并拍干所述酶标板，然后加入显色液显色，加入终止液终止反应，在450nm波长下检测OD值。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述ECM1蛋白抗体包被前还包括：采集精液样本10-40μL离心20-30nim，重复离心操作2-3次，取上清作为待测样本。5.如权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘畅，王小容，许文明，
申请(专利权)人：成都朴华科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。