人TK1抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及人TK1抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒。本发明专利技术的人TK1抗原表位肽的氨基酸序列为序列表SEQ ID NO.1所示的序列。本发明专利技术的人TK1抗原由人TK1抗原表位肽与蛋白载体偶联制得。本发明专利技术的人TK1单克隆抗体或多克隆抗体由本发明专利技术的人TK1抗原制得。本发明专利技术的人TK1单克隆抗体或多克隆抗体用于制备人TK1体外诊断试剂盒。本发明专利技术的人TK1抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人TK1的体外检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人胸苷激酶1(TK1)抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的TK1特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人TK1体外诊断试剂盒上的应用、以及人TK1体外诊断试剂盒。
技术介绍
TK1是一种与细胞DNA合成密切相关的激酶，在正常人体内含量极低或检测不出来。当体内发生异常增殖如肿瘤时，血清中TK1浓度大幅上升。因此通过检测TK1的变化可以提前预示肿瘤的发生，可用于肿瘤早期风险筛查，预后及治疗监测。胸腺嘧啶核苷激酶(TK)是胸腺嘧啶核苷(简称胸苷)合成DNA的关键酶之一。TK以两种同工酶的形式出现：细胞质胸苷激酶(TK1)和线粒体胸苷激酶(TK2)，但只有TK1的升高或降低是评估增殖细胞的增殖度的重要标志，TK1和DNA的合成升高成正相关。恶性肿瘤细胞中DNA的合成剧增导致肿瘤细胞的急剧增殖，TK1的升高与肿瘤细胞生长状态密切相关。正常成年人的静止细胞及血清中的TK1酶活性和浓度极微，一旦细胞发生癌变，TK1酶的活性和含量会大大超过正常水平。恶性肿瘤细胞中DNA的合成剧增导致肿瘤细胞的急剧增殖，实验证明，在95％的恶性肿瘤细胞中都发现TK1有不同程度的升高，TK1的升高与肿瘤细胞生长状态紧密相关。因此TK1升高与细胞周期、细胞增殖状态密切相关，是一广谱性的细胞增殖标志物。临床上可用于肿瘤早期筛查、肿瘤患者治疗疗效监控以及预后与复发风险评估。目前采用影像学的肿瘤检测手段对于早期肿瘤几乎无能为力，检测血清中的TK1水平的最理想的方法为免疫检测。此外，应用TK1抗体和先进的酶免疫、化学发光技术，通过常规抽血即可检查在多种治疗方案(如手术、化疗、放疗及生物治疗等)前后体内细胞增殖的活动能力，从而起到监控治疗和预后评估的效果。因此，寻找合适的具有免疫原性的TK1抗原表位肽、制备特异性的TK1抗原及抗体即成了重点。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种人TK1抗原表位肽，用该抗原表位肽制备的TK1特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其在制备人TK1试剂盒上的应用，以及人TK1体外诊断试剂盒。具体而言，本专利技术提供了：一种人TK1抗原表位肽，其中所述TK1抗原表位肽的氨基酸序列为：Tyr-Lys-Ser-Thr-Pro-Gly-Ser-Pro-Ser-Lys-Thr-Arg-Gly-Gln。本专利技术还提供了一种TK1抗原，其是通过使所述的人TK1抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了一种人TK1抗体，其是由所述的TK1抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述TK1抗原是通过使所述的人TK1抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的。本专利技术还提供了所述的人TK1抗体在制备人TK1体外诊断试剂盒上的应用。本专利技术还提供了一种人TK1体外诊断试剂盒，其包含所述的人TK1抗体作为包被抗体或结合抗体。优选地，所述试剂盒还包含另一种人TK1抗体，并且上述的人TK1抗体和所述的另一种人TK1抗体中的一者作为包被抗体，另一者作为结合抗体，其中所述的另一种人TK1抗体由包含如以下序列所示的抗原表位的另一种TK1抗原制备而成：Tyr-Arg-Gly-Thr-Glu-Lys-Glu-Val-Glu-Val-Ile-Gly-Gly-Ala-Asp-Lys优选地，所述包被抗体为单克隆抗体。优选地，所述结合抗体为多克隆抗体。优选地，所述试剂盒还包含酶标记的抗抗体。优选地，所述试剂盒用于检测血清中的人TK1蛋白。本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的人TK1抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。2.用本专利技术制备的TK1单克隆抗体和多克隆抗体能够高度特异地与血液(特别是血清)样本中的TK1结合。3.本专利技术的人TK1体外诊断试剂盒可以有效地检测血液样本(特别是血清样本)中的TK1的水平，可用于肿瘤的早期筛查，肿瘤患者治疗疗效监控以及预后与复发风险评估。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。一、人TK1抗原表位肽本文中所述的人TK1蛋白是本领域已知的，其氨基酸序列是本领域已知的，可以在NCBI等专业数据库中查到。本专利技术提供了人TK1抗原表位肽(1)和(2)，其氨基酸序列分别如序列表SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，为：(1)Y-K-S-T-P-G-S-P-S-K-T-R-G-Q和(2)Y-R-G-T-E-K-E-V-E-V-I-G-G-A-D-K。本专利技术的专利技术人经过大量的理论研究和实验摸索，最终筛选得到两种具有良好的抗原性的抗原表位肽。TK1抗原表位肽(1)包含人TK1蛋白(NCBI登录号AAH07986.1)N端第11至第20位的肽段，并且在该肽段的N末端加上Y、K、S和T，从而构成含14个氨基酸的TK1抗原表位肽(1)。TK1抗原表位肽(2)包含人TK1蛋白(NCBI登录号AAH07986.1)C端第167位至第180位的肽段，并且在该肽段的N末端加上Y和R，从而构成含16个氨基酸的TK1抗原表位肽(2)。这两个肽段均具有亲水性、抗原性强并且易于合成的特点。目前，本专利技术研究发现，本专利技术的TK1抗原表位肽具有如下功能：1.具有抗原性；2.与载体蛋白连接后作为免疫原刺激动物产生特异性的抗体；3.用抗原表位肽制备的抗体可特异性地与人TK1结合。本专利技术的TK1抗原表位肽的制备方法可用化学合成法：利用美国ABI431A型多肽自动合成仪，通过固相法合成抗原表位肽。本专利技术的抗原表位肽(1)和(2)的分子量分别为1727.83、2021.15，可用质谱进行确定，并通过多肽序列测定鉴定所合成的抗原表位肽序列。肽段的纯度可用薄层色谱和高效液相色谱进行评定，并测定抗原表位肽的浓度。二、TK1抗原本专利技术还提供了TK1抗原，其通过使本专利技术的人TK1抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成。具体而言，本专利技术提供了TK1抗原(1)和(2)，所述TK1抗原(1)通过使本专利技术的人TK1抗原表位肽(1)与载体蛋白偶联制备而成；所述TK1抗原(2)通过使本专利技术的人TK1抗原表位肽(2)与载体蛋白偶联制备而成。本专利技术的TK1抗原具有免疫原性和特异性，是一种免疫原，可用来免疫动物从而制备特异性的TK1抗体。在本专利技术中，可用的载体蛋白的例子包括KLH(钥孔血蓝蛋白)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白OVA等。由于KLH(钥孔血蓝蛋白)免疫原性强，结合位点多，免疫效果较好，并且与免疫动物亲缘关系较远，用其作为载体蛋白不易引起交叉反应，因此是优选的。三、TK1单克隆抗体、TK1多克隆抗体和人TK1体外诊断试剂盒本专利技术还提供了人TK1抗体，包括人TK1单克隆抗体和人TK1多克隆抗体，它们可以各自利用本专利技术的TK1抗原(1)或(2)(免疫原)免疫动物制备而得。制备方法可采用本领域的常规技术，具体可参见实施例2。在本文中，术语“另一种TK1抗原”即为TK1抗原(2)。当本专利技术的人TK1抗体由TK1抗原(2)(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人TK1抗原表位肽，其中所述TK1抗原表位肽的氨基酸序列为：Tyr‑Lys‑Ser‑Thr‑Pro‑Gly‑Ser‑Pro‑Ser‑Lys‑Thr‑Arg‑Gly‑Gln。

【技术特征摘要】
1.一种人TK1抗原表位肽，其中所述TK1抗原表位肽的氨基酸序列为：Tyr-Lys-Ser-Thr-Pro-Gly-Ser-Pro-Ser-Lys-Thr-Arg-Gly-Gln。2.一种TK1抗原，其是通过使权利要求1所述的人TK1抗原表位肽与载体蛋白偶联制备而成的。3.一种人TK1抗体，其是由权利要求2所述的TK1抗原制备而成的单克隆抗体或多克隆抗体。4.根据权利要求3所述的人TK1抗体在制备人TK1体外诊断试剂盒上的应用。5.一种人TK1体外诊断试剂盒，其包含权利要求3所述的人TK1抗体作为包被抗体或结合抗体。6.根据权利要求5所述的人TK1体外诊断试剂盒，其中所述试剂盒还包含另一种人TK1抗体，并且所述的人TK1抗体和...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：深圳市安群生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44