肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开一种肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒及应用，属于蛋白和核酸检测领域。本发明专利技术通过适配体与靶分子结合，将靶分子信号转换成核酸信号，完成肺癌血清标志物信号与核酸信号的统一，利用qRT‑PCR进行检测。该检测方法能够将非核酸信号通过适配体转换成核酸信号，具有快速、简单、灵敏度高、亲和力强等特点，进而实现多配体同时检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白和核酸检测领域，具体的是肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒及应用。
技术介绍
传统蛋白质检测是以特定抗体同待检测的蛋白质结合，通过形成特定的抗原-抗体复合物实现的检测技术。以抗体捕捉待检测蛋白为例，是在固相介质上包被抗体，然后与待检测蛋白样品孵育，洗去未结合的蛋白，最后用特异性识别抗体的标记抗体去检测结合的抗体，许多检测方法都是间接检测的。标记包括放射性同位素，有机染料等。检测方法中ELISA检测(酶联免疫吸附检测)是临床上广泛应用的。核酸与蛋白在生物体内相互作用是很普遍的现象。单链DNA能自身折叠形成二级结构、三级结构等，可以形成茎环、口袋、发卡等结构，这对核酸和蛋白质相互作用具有非常重要的作用。通过SELEX技术(指数富集的配基系统进化技术)进行体外分离血清标志物的适配体，适配体只识别特异性的血清标志物，而与其他的蛋白不结合，通过qRT-PCR(实时荧光定量PCR)能够动态检测血清样品，能够快速分析样品中靶分子的量，并对其进行定量，进而为肺癌检测提供了一种新的分子生物学检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒，通过qRT-PCR同时检测适配体和基因序列，实现血清标志物适配体和基因同时检测的技术方法，对研究蛋白质组学、基因组学具有重要意义。本专利技术的另一目的是提供一种肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒的应用方法。本专利技术为实现上述目的所采用的技术方案是：肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒，其特征是：所述试剂盒主要包括待检测血清样品、琼脂磁珠、洗脱液、检测试剂、qRT-PCR检测体系；所述待检测血清样品含有被检测标志物适配体和基因；所述琼脂磁珠用于形成琼脂磁珠-肺癌血清复合物；所述洗脱液是1×Bindingbuffer(结合缓冲液)+1％tween-20；所述检测试剂是肺癌血清标志物适配体+1×Bindingbuffer混合液；所述qRT-PCR检测体系是含有靶分子适配体和基因探针和引物的常规检测试剂。肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒的应用，其特征是：包括以下步骤：(1)将琼脂磁珠加入到待检测血清样品中，37℃孵育30min，形成琼脂磁珠-待检测血清样品复合物，利用磁分离，分离出琼脂磁珠，用洗脱液洗4次，每次1min，保留洗脱后的琼脂磁珠；(2)将上述步骤(1)中洗脱后的琼脂磁珠加入到检测试剂中，检测试剂中肺癌血清标志物适配体与琼脂磁珠-靶蛋白形成复合物结构，将未结合形成的肺癌血清标志物适配体与琼脂磁珠-靶蛋白形成复合物结构用洗脱液洗掉，洗4次，每次1min，弃去洗脱液保留琼脂磁珠；(3)在步骤(2)中保留下的琼脂磁珠中加入100μL纯水，95℃下反应5min，吸取上清；(4)将步骤(3)中的上清进行扩增基因常规监测。所述待检测血清样品为去除血细胞、血脂的血清。所述基因是病原体、细菌、细胞生物体内的基因序列。所述步骤(2)中琼脂磁珠上连接肺癌血清标志物和特异性适配体，与靶蛋白结合形成琼脂磁珠-肺癌血清复合物。所述肺癌血清标志物适配体是由通过SELEX技术筛选得到的高特异性血清标志物适配体组成，适配体序列可以进一步优化，从而提高适配体的稳定性。所述扩增基因常规监测是qRT-PCR检测、基因扩增检测、生物芯片检测中的一种。所述肺癌血清标志物适配体和基因同时检测是指筛选得到高特异性、强亲和力的肺癌血清标志物适配体，将靶蛋白信号转换成核酸信号，与基因在分子水平上统一检测。本专利技术所述肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒的应用，有益效果是：本专利技术的试剂盒是通过适配体与靶分子结合将靶分子信号转换成核酸信号完成蛋白和基因同时检测的方法，利用qRT-PCR进行动态及定量检测。本专利技术操作简便，实用性强，可以组装成试剂盒或构建成生物芯片能够广泛的应用于基础研究与临床诊断，具有较高的经济效益和社会公益。附图说明图1为肺癌血清核酸蛋白qRT-PCR检测方法流程图。图2为肺癌血清适配体特异性鉴定实时荧光定量-PCR图。图中：1-阳性；2-阴性；3-空白；4，5-肺癌血清；6，7-正常人血清具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不局限于具体实施例。实施例肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒，主要包括待检测血清样品、琼脂磁珠、洗脱液、检测试剂、qRT-PCR检测体系；所述待检测血清样品含有被检测标志物适配体和基因；所述琼脂磁珠用于形成琼脂磁珠-肺癌血清复合物；所述洗脱液是1×Bindingbuffer+1％tween-20；所述检测试剂是肺癌血清标志物适配体+1×Bindingbuffer混合液；所述qRT-PCR检测体系是含有靶分子适配体和基因探针和引物的常规检测试剂。如图1所示的肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒应用方法，包括以下步骤：(1)制备血清样品：采血，3000rpm离心5min，分离血清，4℃保存；(2)琼脂磁珠-肺癌血清标志物复合物的形成：包被肺癌血清琼脂磁珠50μL，加入200μL制备好的血清样品，形成琼脂磁珠-血清复合物，37℃，孵育30min，洗出未结合的上清液，用1×Bindingbuffer+1％tween-20200μL洗4次，每次1min，加入肺癌血清肿瘤标志物适配体孵育30min，形成琼脂磁珠-血清-适配体复合物结构，用1×Bindingbuffer+1％tween-20200μL洗4次，每次1min，用磁分离，分离出琼脂磁珠，然后在琼脂磁珠中加入100μL纯水，95℃，5min，吸取上清；(3)qRT-PCR检测：将(2)中最后收集的上清加入到qRT-PCR检测检测体系中，进行动态检测及定量分析；(4)通过计算机采集数据、分析、整理数据，得到血清标志物和基因的分子拷贝数。以上内容是结合优选技术方案对本专利技术所做的进一步详细说明，不能认定专利技术的具体实施仅限于这些说明。对本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术的构思的前提下，还可以做出简单的推演及替换，都应当视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒，其特征是：所述试剂盒主要包括待检测血清样品、琼脂磁珠、洗脱液、检测试剂、qRT‑PCR检测体系；所述待检测血清样品含有被检测标志物适配体和基因；所述琼脂磁珠用于形成琼脂磁珠‑肺癌血清复合物；所述洗脱液是1×Binding buffer+1％tween‑20；所述检测试剂是肺癌血清标志物适配体+1×Binding buffer混合液；所述qRT‑PCR检测体系是含有靶分子适配体和基因探针和引物的常规检测试剂。

【技术特征摘要】
1.肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒，其特征是：所述试剂盒主要包括待检测血清样品、琼脂磁珠、洗脱液、检测试剂、qRT-PCR检测体系；所述待检测血清样品含有被检测标志物适配体和基因；所述琼脂磁珠用于形成琼脂磁珠-肺癌血清复合物；所述洗脱液是1×Bindingbuffer+1％tween-20；所述检测试剂是肺癌血清标志物适配体+1×Bindingbuffer混合液；所述qRT-PCR检测体系是含有靶分子适配体和基因探针和引物的常规检测试剂。2.根据权利要求1所述的肺癌血清标志物适配体和基因同时检测试剂盒的应用，其特征是：包括以下步骤：(1)将琼脂磁珠加入到待检测血清样品中，37℃孵育30min，形成琼脂磁珠-待检测血清样品复合物，利用磁分离，分离出琼脂磁珠，用洗脱液洗4次，每次1min，保留洗脱后的琼脂磁珠；(2)将上述步骤(1)中洗脱后的琼脂磁珠加入到检测试剂中，检测试剂中肺癌血清标志物适配体与琼脂磁珠-靶蛋白形成复合物结构，将未结合形成的肺癌血清标志物适配体与琼脂磁珠-靶蛋白形成复合物结构用洗脱液洗掉，洗4次，每次1min，弃去洗脱液保留琼脂磁珠；(3)在步骤(2)中保留下的琼脂磁珠中加入100μL纯水，95℃下反应5min，吸取上清；(4)将步骤(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗坤，修尘林，
申请(专利权)人：燕山大学，
类型：发明
国别省市：河北;13