用于检测人类疱疹病毒8型感染的多肽及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了人类疱疹病毒8型来源的多肽，以及利用该多肽开发的一种间接ELISA抗体检测试剂盒，本发明专利技术还提供了所述的多肽和间接ELISA抗体检测试剂盒在检测人类疱疹病毒8型感染中的应用。经实验证明，本发明专利技术提供的用于检测人类疱疹病毒8型感染的间接ELISA抗体检测试剂盒不仅可以对人类疱疹病毒8型特异性抗体进行定性检测，还可以对人血清样品进行高通量检测，以达到早期、快速诊断人类疱疹病毒8型感染的目的，从而对人类疱疹病毒8型感染的诊断、流行病学调查和病原监测具有较高的临床使用及推广价值。

【技术实现步骤摘要】
用于检测人类疱疹病毒8型感染的多肽及试剂盒
本专利技术属于免疫学
，具体涉及一种多肽以及人类疱疹病毒8型感染的间接ELISA抗体检测试剂盒。
技术介绍
人类疱疹病毒8型(humanherpesvirus8，HHV-8)，又称卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’ssarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)，属于γ-2型疱疹病毒。HHV-8为双链DNA病毒，病毒基因组全长约170kb，包含至少81个开放阅读框(openreadingframe，ORF)。与其他疱疹病毒一样，绝大多数的HHV-8在感染细胞后，以附加体的形式潜伏存在，随细胞的分裂而增殖。ORF50基因编码产物作为“分子开关”控制着HHV-8由潜伏到增殖状态的转换，被其激活后的HHV-8大量增殖，最终引起细胞破裂并释放子代病毒。人类疱疹病毒8型是一种重要的人类肿瘤病毒，它与卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma，KS)、原发性渗出性淋巴瘤、多中心卡斯特莱曼病和嗜生发中心淋巴细胞增殖紊乱等多种血液系统恶性疾病的发生密切相关，其中卡波西肉瘤是艾滋病患者常见的肿瘤及致死原因。艾滋病毒流行前，地中海地区HHV-8的人群感染率为4％～35％，而卡波西肉瘤的发病率每年只有0.03％，为美国的10倍；非洲KSHV的人群感染率高达30％～60％，而卡波西肉瘤只占男性肿瘤的6.4％～6.6％，女性中几乎没有卡波西肉瘤患者。但是在艾滋病流行后，非洲乌干达卡波西肉瘤患者占据男性癌症患病的48.6％，女性癌症患者的17.9％，成为当地最常见的肿瘤之一；在美国，卡波西肉瘤也成为患有艾滋病的男性同性恋者的常见肿瘤。艾滋病毒的感染能够极大的提高卡波西肉瘤的发病率，并且艾滋病相关的波济肉瘤具有更强的侵袭性(常常播散到肺、胃肠道、肝、脑和脾脏)和较高的死亡率。艾滋病流行前我国人群卡波西肉瘤的发病率较低，上个世纪80年代起新疆地区才有少量病例报告。然而，艾滋病毒的流行使我国艾滋病相关的卡波西肉瘤患者急剧增加。目前我国人群的艾滋病毒感染数量已逾300万，并且仍处于增长期。随着艾滋病毒感染者数量的进一步增加，预计不久的将来中国将会出现大量的艾滋病相关卡波西肉瘤患者。为了评估疱疹病毒8型的感染率及由此发生艾滋病相关卡波西肉瘤的可能风险，可以高通量、快速、简便的检测疱疹病毒8型感染的试剂盒在当下就显得尤为重要。然而，目前国内尚无检测疱疹病毒8型感染的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种分离的多肽及其应用，本专利技术还提供了用于检测疱疹病毒8型感染的试剂盒及其应用，采用该试剂盒检测疱疹病毒8型感染不仅简便、快速，而且具有高通量、特异性强和灵敏度高的特点。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在一优选例中，检测人类疱疹病毒8型感染及相关疾病的产品为间接ELISA抗体检测试剂盒，但产品并不局限于此，还包括应用胶体金、斑点杂交、Westernblot等方法的试剂盒。本专利技术中出现的“5％脱脂奶粉”的制备方法为：每取5g脱脂奶粉(BD公司，货号232100)，需要在其中加入PBS(Beyotime公司，货号C0221A)直至100mL，即得到“5％的脱脂奶粉”。其它“1％脱脂奶粉”、“2.5％脱脂奶粉”和“10％脱脂奶粉”依此类推。“1％BSA”的制备方法为：每取1gBSA(Beyotime公司，货号ST023)，需要在其中加入PBS(Beyotime公司，货号C0221A)直至100mL。本专利技术中出现的“待检测样品、阳性血清和阴性血清分别用5％脱脂奶粉按1:100进行稀释”是指当分别每取检测样品、阳性血清和阴性血清1mL时，需要分别在其中加入100mL的5％脱脂奶粉进行稀释。其它比例依此类推。本专利技术中出现的PBS-T洗涤液的制备方法为：每1LPBS(Beyotime公司，货号C0221A)溶液中加入1mL吐温20(Beyotime公司，货号ST825)，混匀后即为PBS-T洗涤液。本专利技术中出现的“辣根过氧化物酶标记的羊抗人二抗的工作浓度为1:2500”是指在使用辣根过氧化物酶标记的羊抗人二抗时，需采用5％脱脂奶粉以1:2500的比例加以稀释，即每取辣根过氧化物酶标记的羊抗人二抗1mL时，需在其中加入2500mL的5％脱脂奶粉。其它比例依此类推。本专利技术第一方面提供了分离的多肽，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体；在一优选例中，所述多肽为能与人类疱疹病毒8型感染者血浆和/或血清抗体发生特异性结合。本专利技术第二方面提供了分离的多肽，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体。本专利技术第三方面提供了分离的多肽，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体。本专利技术第四方面提供了多肽组合，包括所述的多肽。本专利技术第五方面提供了所述的多肽和多肽组合在制备检测人类疱疹病毒8型感染及相关疾病的产品中的应用。在一优选例中，所述相关疾病为卡波西肉瘤、原发性渗出性淋巴瘤和多中心卡斯特莱曼病中的任意一种。在一优选例中，检测人类疱疹病毒8型感染及相关疾病的产品为间接ELISA抗体检测试剂盒。本专利技术第六方面提供了一种预包被酶标板，包括所述的多肽。在一优选例中，所述预包被酶标板采用以下方法制备而成：将所述的多肽的水溶液用包被液稀释，然后采用酶标板包被过夜，最后加入封闭液进行封闭。在一优选例中，所述多肽的水溶液的浓度为1mg/mL。在一优选例中，所述包被液为浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液。在一优选例中，所述多肽的水溶液是用包被液稀释至10μg/mL。在一优选例中，所述包被过夜的温度是4℃。在一优选例中，所述封闭液为5％的脱脂奶粉。在一优选例中，所述5％脱脂奶粉为脱脂奶粉的PBS溶液，其中脱脂奶粉在溶液中的质量体积比为5％。在一优选例中，所述封闭液的工作条件为：37℃孵育60min。在一优选例中，所述预包被酶标板采用以下方法制备而成：用蒸馏水分别溶解所述的多肽至浓度均为1mg/mL，用浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液分别稀释多肽浓度至10μg/mL，包被96孔酶标板，每孔加入100μL，4℃包被过夜，然后分别在每孔继续加入200μL5％的脱脂奶粉进行封闭，37℃温箱中孵育1小时，用PBS-T洗涤液洗涤3次。本专利技术第七方面提供了预包被酶标板本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列有至少70％‑99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)‑3)所述的多肽的序列的变体；任选的，所述多肽为能与人类疱疹病毒8型感染者血浆和/或血清抗体发生特异性结合。

【技术特征摘要】
1.分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体；任选的，所述多肽为能与人类疱疹病毒8型感染者血浆和/或血清抗体发生特异性结合。2.分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体。3.分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列选自：1)包含SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；或2)多肽的同源序列，其与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)多肽变体，其与SEQIDNO:3所示的氨基酸序列相比具有至少一个氨基酸的取代、缺失和/或添加；或4)多肽衍生物，其为1)-3)所述的多肽的序列的变体。4.多肽组合，其特征在于，包括权利要求1-3所述的多肽。5.根据权利要求1或2或3中所述的多肽和权利要求4的多肽组合在制备检测人类疱疹病毒8型感染及相关疾病的产品中的应用；任选的，所述相关疾病为卡波西肉瘤、原发性渗出性淋巴瘤和多中心卡斯特莱曼病中的任意一种；任选的，检测人类疱疹病毒8型感染及相关疾病的产品为间接ELISA抗体检测试剂盒。6.一种预包被酶标板，其特征在于，包括权利要求1或2或3所述的多肽；任选的，所述预包被酶标板采用以下方法制备而成：将权利要求1或2或3所述的多肽的水溶液用包被液稀释，然后采用酶标板包被过夜，最后加入封闭液进行封闭；任选的，所述多肽的水溶液的浓度为1mg/mL；任选的，所述包被液为浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液；任选的，所述多肽的水溶液是用包被液稀释至10μg/mL；任选的，所述包被过夜的温度是4℃；任选的，所述封闭液为5％的脱脂奶粉；任选的，所述5％脱脂奶粉为脱脂奶粉的PBS溶液，其中脱脂奶粉在溶液中的质量体积比为5％；任选的，所述封闭液的工作条件为：37℃孵育60min；任选的，所述预包被酶标板采用以下方法制备而成：用蒸馏水分别溶解权利要求1或2或3所述的多肽至浓度均为1mg/mL，用浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液分别稀释多肽浓度至10μg/mL，包被96孔酶标板，每孔加入100μL，4℃包被过夜，然后分别在每孔继续加入200μL5％的脱脂奶粉进行封闭，37℃温箱中孵育1小时，用PBS-T洗涤液洗涤3次。7.预包被酶标板组合，其特征在于，包括含有权利要求1所述的多肽的预包被酶标板、含有权利要求2所述的多肽的预包被酶标板和含有权利要求3所述的多肽的预包被酶标板；任选的，所述含有权利要求1所述的多肽的预包被酶标板采用以下方法制备而成：将权利要求1所述的多肽的水溶液用包被液稀释，然后采用酶标板包被过夜，最后加入封闭液进行封闭；任选的，所述多肽的水溶液的浓度为1mg/mL；任选的，所述包被液为浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液；任选的，所述多肽的水溶液是用包被液稀释至10μg/mL；任选的，所述包被过夜的温度是4℃；任选的，所述封闭液为5％的脱脂奶粉；任选的，所述5％脱脂奶粉为脱脂奶粉的PBS溶液，其中脱脂奶粉在溶液中的质量体积比为5％；任选的，所述封闭液的工作条件为：37℃孵育60min；任选的，所述含有权利要求1所述的多肽的预包被酶标板采用以下方法制备而成：用蒸馏水分别溶解权利要求1所述的多肽至浓度均为1mg/mL，用浓度为50mM且pH为9.6的碳酸盐缓冲液分别稀释多肽浓度至10μg/mL，包被96孔酶标板，每孔加入100μL，4℃包被过夜，然后分别在每孔继续加入200μL5％的脱脂奶粉进行封闭，37℃温箱中孵育1小时，用PBS-T洗涤3次；任选的，所述含有权利要求2所述的多肽的预包被酶标板采用以下方法制备而成：将权利要求2所述的多肽的水溶液用包被液稀释，然后采用酶标板包被过夜，最后加入封闭液进行封闭；任选的，所述多肽的水溶液的浓度为1mg/mL；任选的，所述包被液为浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：程林，赵方，唐娴，王辉，陈志伟，杜飞嫦，何琳，
申请(专利权)人：深圳市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：广东,44