磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法，涉及一种免疫检测试剂盒及其检测方法。其目的是为了提供一种磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法，该方法综合采用了悬浮磁微粒载体技术和化学发光检测技术，使系统能够充分满足临床对检测结果的要求。本发明专利技术所述试剂盒包括荧光素标记的抗原、碱性磷酸酶标记的抗体和包被有抗所述荧光素的抗体的磁微粒。本发明专利技术的检测方法包括：待测样品与荧光素标记的抗原；然后与包被有抗荧光素的抗体的磁微粒混合；分离磁微粒；清洗后加入碱性磷酸酶标记的抗体；分离磁微粒；洗涤；加入发光底物，测定吸光度。本发明专利技术的检测方法准确性好、精密度高、灵敏度高，操作简单省时，检测范围宽。

Magnetic particle chemiluminescence immune detection reagent kit and detection method thereof

The invention discloses a magnetic particle chemiluminescence immune detection reagent kit and a detection method thereof, relating to an immunoassay reagent kit and a detection method thereof. The purpose is to provide a magnetic particle chemiluminescence immune detection kit and detection method, this method uses a combination of magnetic particle carrier technology and chemiluminescence detection technology, the system can fully meet the requirements of clinical test results. The kit of the present invention comprises a fluorescein labeled antigen, an antibody labeled with alkaline phosphatase, and a magnetic particle coated with an antibody against the fluorescein. The detection method comprises the following steps: sample with fluorescein labeled antigen to be tested; then anti fluorescein antibody magnetic particles coated with the magnetic particles; separation; cleaning after adding antibody labeled with alkaline phosphatase; separation of magnetic particles; washing; adding substrate, determination of absorbance. The detection method has the advantages of good accuracy, high precision, high sensitivity, simple and time-saving operation and wide detection range.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种借助于生物特有的结合方法来测定或分析材料的试剂盒及其测定方法，特别是涉及一种免疫检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
自身免疫性疾病是自身免疫反应达到一定程度而导致的疾病。免疫系统最基本的功能是认识自身和识别异体，达到保护自身和排斥异体的目的。正常人体血清中可存在多种针对自身抗原的抗体，但它们的水平极低，不足以破坏自身成分，可清除衰老退变的自身组织，这就是自身免疫反应。当这种反应过强，导致严重组织损伤，表现出临床症状时，就称为自身免疫病。这类自身免疫疾病指标包括但不限于以下所列：AMAM2,P0,His,nucl,dsDNA,PCNA,CENPB,Jo-1,PM-Scl,Scl-70,SSB,SSA,Sm,nRNP,GBM,MPO,PR3,SAL/LP,GP210,SP100,LC-1,LKM等。对于这些指标的检测可以作为辅助疾病诊断的参考，但是单独一种指标的检测并不能直接得出疾病诊断的结果，必须综合临床症状等多种指标才能得出疾病诊断的结论。常见的自身免疫病有以下几种：系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮是一种与自身免疫系统密切相关的慢性、多脏器受累的炎症性疾病。该病往往在女性人群中高发。常见的临床表现包括游走性关节疼痛和关节炎、面颊和其它皮肤部位的发疹、胸膜炎和心包炎、肾脏或中枢神经系统的病变以及血液系统中的血细胞减少等。临床对于SLE的诊断需要密切结合临床表现和血清学检测结果。对于处于活动期症状严重的患者临床通常使用皮质类固醇、羟化氯喹和一些免疫抑制剂进行治疗。约70-90％的患者为女性(以育龄期女性为主)。SLE在黑人和亚洲人中的发病率要高于白人。该病可以在任何年龄段发病，包括新生儿。由于临床医生对于SLE的诊断越来越重视，因此每年报道的病例数持续上升。在一些国家，SLE的发病率甚至超过类风湿关节炎(RA)。环境因素引起的自身免疫反应，是遗传易感人群发病的一个主要因素。由于SLE的临床表现具有多脏器累及的特点，因此临床往往混淆SLE与其它风湿性疾病的诊断。例如：早期具备明显关节症状的SLE患者，可能被误诊为类风湿关节炎。可能与SLE发生误诊的疾病还包括，混合结缔组织病(MCTD)、风湿样多关节炎，多发性肌炎/皮肌炎、结节病和副瘤性综合征等。值得注意的是，一些感染性疾病(例如细菌性心内膜炎和组织胞浆菌病等)也可能误诊为SLE，从而导致不必要的免疫抑制治疗。因此，实验室血清学抗体检测是区分SLE与其它临床疾患的重要依据。临床实验室针对SLE患者的检测主要包括：血清抗核抗体(ANA)检测；全血细胞计数(CBC)；尿液分析；和肝肾器官生化指标的检测。综合所有这些指标，才能得出诊断结果。干燥综合征干燥综合征是一种表现为眼干和口干的自身免疫性疾病。该病最大的特点是在产生泪液和唾液的泪腺和腮腺腺体部位出现明显的炎症，而上述部位的炎症直接导致口干和眼干等临床症状和表现。干燥综合征根据临床表现，可分为原发性干燥综合征和继发性干燥综合征两种。前者仅有口干和眼干症状，而后者则合并有其它混合结缔组织病，例如：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮或硬皮病等。临床针对干燥综合征的诊断包括眼干和口干检测。目前，在眼科中眼科医生已经有更加先进的检测方法可以完成眼部干燥的检测。干燥综合征患者的唾液腺部位可能肿大变硬。唾液腺炎症的检查可以通过放射性核医学扫描完成。同时，唾液腺分泌唾液量的减少还可以通过唾液流动测试完成。而唾液腺组织活检结果对于干燥综合征具有更高的诊断价值。干燥综合征患者的一个典型临床表现是在体内产生多种自身抗体，这些自身抗体可以通过血清学方法完成检测。其中尤其以SSA和SSB抗体、类风湿因子、抗甲状腺抗体等最为典型，这些抗体在大部分干燥综合征患者体内均可检测到。另外，干燥综合征患者还可能出现血细胞减少(贫血)和血沉加快等临床表现。混合结缔组织病混合结缔组织病最早报道于1972年。由于该病患者在临床上同时具备系统性红斑狼疮、硬皮病和多发性肌炎等三种疾病的临床表现，因此该病在当时被认为是上述三种疾病的重叠征。该病的一个典型临床表现是患者血清中可以检测到高滴度的抗核抗体和抗RNP抗体。目前，对于混合结缔组织病的明确诊断主要通过临床症状表现，并结合高滴度的抗核抗体和抗RNP抗体。在MCTD患者体内很少出现与系统性红斑狼疮高度特异的抗dsDNA和与硬皮病高度特异的抗Scl-70抗体。硬皮病硬皮病，又称系统性硬化症，是以局限性或弥漫性皮肤及内脏器官结缔组织纤维化、硬化及萎缩为特点的结缔组织病，其主要特点为皮肤、滑膜、骨骼肌、血管和食道出现纤维化或硬化。有些内脏器官，如肺、心脏、肾脏和大小动脉也可有类似的病变。本病的严重程度不等，轻者只有手指和脸部皮肤受累(局限型)，早期表现为面部、手和(或)足肿胀，皮肤发紧，不能提起，状如腊肠，又称腊肠样指，皮肤逐渐增厚，皮纹和皱折消失，晚期皮肤变硬萎缩，面部皮肤菲薄，表情呆板，鼻子变尖，耳轮变薄，张口受限，像个面具—样。大多数病人常以雷诺现象为本病最先出现的症状，有些病人在雷诺现象10余年后才有皮肤改变。1/3的病人可有关节痛和关节发僵，少数有肯定的关节炎。另外有些病人表现为严重的肌肉乏力，与肌炎不易鉴别。部分病人病情逐渐进展，往往经过很长时间，有人长达数十年，才出现特殊内脏受累的临床表现。严重的硬皮病病人可有广泛的皮肤改变，累及胸腹部和背部(弥漫型)。弥漫型硬皮病病人可有内脏受累，部分病人发现患病时已有肾脏、心脏等重要器官受累，病情进展凶险，甚至危及生命。多发性肌炎/皮肌炎多发性肌炎和皮肌炎是一种自身免疫性结缔组织疾病。因为是非化脓性炎性肌病，所以抗生素治疗无效。多发性肌炎主要表现为肢体近端如胯部、大腿、肩、颈等部位的肌痛及肌无力。肌炎病人如同时伴有特征性皮疹，则称为皮肌炎。其实多发性肌炎和皮肌炎的损害并不仅限于皮肤和肌肉，也可损及内脏系统。该病属少见病。在英美国家发病率为0.1/10万～0.6/10万，日本约为0.5/10万。皮肌炎男女之比约为1：21，多发性肌炎约为1：25，在伴有其他结缔组织病的多发性肌炎或皮肌炎患者中，男女之比为1：8，可见该病好发于女性。该病可发生在任何年龄，发病率年龄分布呈双峰型，前峰10～14岁，后峰在50岁左右，伴发恶性肿瘤的病人年龄在60岁左右，也就是说老年多发性肌炎或皮肌炎病人应警惕肿瘤。这也就是为什么老年性肌炎或皮肌炎病人住院各项检查众多的原因所在。合并有系统性红斑狼疮、类风湿关节炎和硬皮病的多发性肌炎或皮肌炎病人年龄多在35岁左右。本病散发，无传染性，一家中多人发病的情况很少见。癌胚抗原(CEA)是一种分子量为180-200kDa的多糖蛋白复合物。它存在2～6月龄的胎儿胃肠道组织和直、结肠癌细胞组织中，胃癌、胰腺癌、卵巢癌、食道癌等组织中也有存在。通常CEA被认为是一种广谱的肿瘤标志物。CEA最常用于消化系统的癌症，如结肠、直肠、胃、肝脏和胰腺等器官。此外，还用于乳癌、肺癌和前列腺癌。测定血清中的CEA含量，对恶性消化道肿瘤治疗前、后和定期连续性的动态含量变化的观察及判断预后具有一定的参考价值。CEA含量与肿瘤大小、有无转移存在一定关系，当发生肝转移时，CEA的升高尤为明显。此外，CEA轻度增加也见于某些良性消化道疾病如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括荧光素标记的抗原、碱性磷酸酶标记的抗体和包被有抗所述荧光素的抗体的磁微粒；其中，所述碱性磷酸酶标记的抗体为碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体、碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体或碱性磷酸酶标记的抗人IgA抗体。

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括荧光素标记的抗原、碱性磷酸酶标记的抗体和包被有抗所述荧光素的抗体的磁微粒；其中，所述碱性磷酸酶标记的抗体为碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体、碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体或碱性磷酸酶标记的抗人IgA抗体。2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述荧光素为FITC。3.根据权利要求1或2所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述抗原为自身免疫疾病抗原或肿瘤相关抗原。4.根据权利要求3所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述自身免疫疾病抗原为SS-A、核糖体P蛋白、SS-B、nRNP/Sm、Sm、着丝点、scl-70、Jo-1、双链DNA、组蛋白、核小体、线粒体2型、环瓜氨酸肽、髓过氧化物酶、蛋白酶3、肾小球基底膜、抗肝肾微粒体1型、肝细胞溶质抗原1、可溶性肝抗原、PM-SCL、PCNA和类风湿因子中的一种。5.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述荧光素标记的抗原为液体，且所述碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体、所述碱性磷酸酶标记的抗人IgM抗体和所述碱性磷酸酶标记的抗人IgA抗体均为液体。6.一种磁微粒化学发光...

【专利技术属性】
技术研发人员：张念林，
申请(专利权)人：北京久峰润达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11