人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用。该试剂盒包括A液、B液、C液和质控标准品，所述A液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～10，优选pH6.5的缓冲体系；所述B液为0.1～10mM含有人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；所述C液为荧光素检测试剂；所述质控标准品为5mg/ml的hCE1的pH6.5的磷酸盐溶液。所述人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物为4，5-二氢-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯或4，5-二氢-2(6-氨基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯,该试剂盒可用于检测不同生物样本中hCE1的存在与否及其酶活的定量测定，还用于快速筛选hCE1的抑制剂/诱导剂。本发明专利技术的优点为操作简单、单位检测成本低、灵敏、快速、可高通量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医药生物
，具体涉及一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用。
技术介绍
人羧酸酯酶1(hCE1)是人体内分布的一种重要功能蛋白，其在人群的肝脏中含量很高，其蛋白表达量在肝脏分布蛋白中排前十位。hCE1是一种膜结合蛋白，定位于细胞内质网中【CANCERRESEARCH1998；58:3627-32&DrugMetab.Pharmacokinet.2006；21:173-85】，同时也会分泌到细胞外进入血液循环系统【Proteomics2009；9:3989–99】。hCE1的基本代谢反应是催化含较小醇基和较大酰胺基底物的水解。虽然，在多种组织的中都检测到hCE1的蛋白表达，但其在人肝脏组织含量远高于其它组织。hCE1参与多种外源性物质的代谢清除，例如药物奥司他韦、哌醋甲酯等。同时，hCE1在维持人体正常生理功能功能发挥不可忽视的作用，参与人体内胆固醇酯和游离脂肪酸的运输和代谢过程，维持脂质代谢平衡【Chemistry&Biology,Vol.10,341–349,April,2003】。在正常健康人体中，hCE1除了以较高的含量分布在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如下四种试剂：A液、B液、C液和质控标准品；其中所述A液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～10；所述B液为0.1～10mM含有人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；所述C液为荧光素检测试剂，含0.5mM的ATP，10mM的Mg2+及50g/ml的荧光素酶；所述质控标准品为5mg/ml的hCE1的pH 6.5的磷酸盐溶液；所述人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物为4，5‑二氢‑2(6‑羟基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯或4，5‑二氢‑2(6‑氨基‑2‑苯咪唑)4‑羧酸噻唑甲酯，其结构通式如式为：其中R为‑OH或‑N...

【技术特征摘要】
1.一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括如下四种试剂：A液、B液、C液和质控标准品；其中所述A液为100mM磷酸盐缓冲液，pH＝5.5～10；所述B液为0.1～10mM含有人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物的溶液，溶剂为二甲基亚砜；所述C液为荧光素检测试剂，含0.5mM的ATP，10mM的Mg2+及50g/ml的荧光素酶；所述质控标准品为5mg/ml的hCE1的pH6.5的磷酸盐溶液；所述人羧酸酯酶1的特异性生物探针底物为4，5-二氢-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯或4，5-二氢-2(6-氨基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酯，其结构通式如式为：其中R为-OH或-NH2；在pH6.5的缓冲体系中，上述化合物的甲酯键可被hCE1特异性水解为相应水解产物4，5-二氢-2(6-羟基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酸或4，5-二氢-2(6-氨基-2-苯咪唑)4-羧酸噻唑甲酸。2.按照权利要求1所述的一种人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒，其特征在于所述A液优选pH为6.5。3.一种权利要求1所述人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒的使用方法，其特征在于其检测步骤如下：(1)预孵育：将待测样品与A液混匀，20～60度下孵育...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨凌，王丹丹，葛广波，吕侠，于洋，杜逊甫，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21