本发明专利技术公开了一种检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒及应用，属于免疫学检测领域。包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述化学发光板的各孔包被有抗HER2抗体；所述试剂包括：HER2系列标准品溶液，HER2系列质控品，生物素标记抗HER2抗体，链酶亲和素‑HRP，样本稀释液，酶稀释液，化学发光底物A、B液，浓缩洗涤液；本发明专利技术的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的ELISA法比较，操作时间大幅度减少。可用作检测乳腺癌的辅助诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)的化学发光酶免疫(CLEIA)检测试剂盒，用于检测乳腺癌病人血清中的HER2蛋白的浓度。可用作检测乳腺癌的辅助诊断。属于免疫学检测领域。技术背景原癌基因人类表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2,HER2)是一种与癌的生物学特性直接相关的肿瘤蛋白，在乳腺癌的发生、发展过程中具有重要。乳腺癌是全世界范围内女性最常见的恶性肿瘤，严重威胁广大女性的身体健康。我国女性乳腺癌发病率呈逐年增高趋势，近十几年来我国乳腺癌发病率增长速度快，死亡率居全部恶性肿瘤第6位。HER2基因也称c-ErbB-2基因，位于人第17号染色体q11-22。此基因编码的HER2蛋白质分子质量约为185ku，又被称为p185HER2，具有酪氨酸激酶(TPK)活性，是人表皮生长因子(EGF)受体(EGFR)家族的成员之一。此家族还包括EGFR(HER1/ErbB1)，HER3(ErbB3)及HER4(tyro2或ErbB4)。HER2的结构可以分为三个区域，即细胞表面的配体结合区、跨膜区域、细胞质内的酪氨酸激酶区域。HER2的胞外区可从乳腺癌细胞表面脱落入血，可以通过一定方法检测血清中的HER2含量。有报道显示，HER2在健康人的血液中也可低表达，25％～40％乳腺癌患者HER2呈过表达，HER2在转移性乳腺癌患者的血液中呈高表达。因此，正确判断HER2状态有助于评估患者预后，而且是选择治疗方案的重要参考指标。血清学检测具有方便、实时性、连续性等特点。血清HER2蛋白成为指导乳腺癌患者临床用药和评价预后的潜在肿瘤标志物鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测HER2的方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒及应用。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点，用于检测乳腺癌病人血清中的HER2蛋白的浓度。为实现上述目的，本专利技术利用了化学发光酶免疫分析法，该方法是化学发光法和酶联免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏性和免疫分析法的高特异性。该方法采用了双抗体夹心法，主要原理是将包被抗体包被于微孔板中形成固相抗体，在包被后的微孔中加入标准品、质控品、样品反应后，弃上清洗涤，再加入生物素标记的抗HER2的检测抗体反应，弃上清洗涤，再加入HRP-链酶亲和素反应，最终形成固相抗体—抗原—生物素标记抗HER2检测抗体—HRP-链酶亲和素复合物，加入发光液A液、B液，立刻读数获得RLU值。在整个反应过程中，样品中HER2含量越高，反应体系中发光强度越强RLU值越高；反之，样品中HER2含量越少，发光强度越弱RLU值越低。本专利技术提供了HER2的化学发光酶免疫(CLEIA)测定方法及其检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，包括：1.化学发光板。为白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化学发光板，各孔包被有抗HER2的抗体，抗体包被浓度为5.0μg/mL。2.HER2系列标准品溶液。浓度分别为：0、10、25、150、400、1000ng/mL。3.质控品。浓度分别为：150±30、25±5ng/mL。4.生物素标记抗HER2抗体。由抗HER2抗体与生物素偶合制成的偶联物作为检测抗体。5.辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素。6.样本稀释液。为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有8gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4，1.44gNa2HPO4的水溶液。7.酶稀释液：为含有蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有50g蔗糖，8gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4，1.44gNa2HPO4的水溶液。8.化学发光底物A、B液。A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH＝8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na2HPO42.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的水溶液，所述百分比为质量百分比。9.浓缩洗涤液。浓缩洗涤溶液具体为含有吐温-20(Tween-20)缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。本专利技术提供的HER2的化学发光酶免疫(CLEIA)检测试剂盒的制备过程对本专利技术试剂盒检测的灵敏度以及相关性能影响很大，其制备关键步骤如下：1.预包被化学发光板的制备：采用将抗HER2抗体置于设定的包被溶液中，以设定的浓度，在37℃恒温箱中反应2小时包被。采用的抗体包被浓度为5.0μg/mL，采用的是pH＝9.5的碳酸钠—碳酸氢钠缓冲溶液。微孔板中所包被的抗HER2抗体在碱性环境下可以很好的结合在微孔板塑料表面上，可以经受多次洗板。包被好的微孔板可以用封闭溶液封闭，在37℃恒温箱中反应2小时封闭。2.HER2系列标准品溶液的制备：HER2抗原溶液浓度是决定本专利技术中HER2酶联免疫检测试剂盒测定范围及灵敏度的重要因素。将HER2抗原溶液可以用抗原稀释液稀释成1:1000的工作浓度，而后按照倍比稀释的方法稀释抗原至终浓度为0、10、25、150、400、1000ng/mL的系列标准品溶液。3.HER2系列质控溶液的制备：HER2质控溶液浓度是本专利技术中HER2酶联免疫检测试剂盒实验操作质控的重要因素。将HER2抗原纯品溶液用抗原稀释液稀释成1:1000的工作浓度，而后稀释至终浓度为150、25ng/mL的质控溶液。4.生物素标记抗HER2抗体的制备：10μl标记抗体加1μl溶解后的生物素，用标记液稀释至100μl，37℃水浴锅中反应1小时，而后转移至准备好的透析袋中，置于透析液中，置在磁力搅拌器上进行透析，透析液需4～6h更换一次，更换5次后即可收抗体。本专利技术提供的HER2的化学发光酶免疫(CLEIA)检测试剂盒的内设以及制备过程中的试剂溶液对本专利技术试剂盒检测的灵敏度影响很大，所涉及相关溶液的配制方法如下：1.HER2标准品溶液：以既定方法将HER2纯品用抗原稀释液配制成浓度分别为0、10、25、150、400、1000ng/mL的HER2系列标准溶液。2.HER2质控品溶液：以既定方法将HER2纯品用抗原稀释液配制成浓度分别为150、25ng/mL的质控品溶液。3.生物素标记抗HER2抗体：按照既定方法将生物素与抗体进行偶联透析后获得的生物素标记抗HER2抗体，用抗体稀释液稀释成1:2000的工作浓度作为检测抗体。4.抗原稀释液：为含有BSA，蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，50g蔗糖，8gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4，1.44gNa2HPO4的水溶液。5.抗体稀释液：为含有蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有50g蔗糖，8gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4，1.44gNa2HPO4的水溶液。6.样本稀释液：为含有BSA的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，8gNaCl，0.2gKCl，0.2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，其特征在于：化学发光板包被有抗HER2的抗体；试剂包括：HER2系列标准品溶液，HER2系列质控品溶液，样本稀释液，生物素标记抗HER2抗体，辣根过氧化物酶（HRP）标记的链酶亲和素，酶稀释液，化学发光溶液A、B液，浓缩洗涤溶液。
【技术特征摘要】
1.一种检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，其特征在于：化学发光板包被有抗HER2的抗体；试剂包括：HER2系列标准品溶液，HER2系列质控品溶液，样本稀释液，生物素标记抗HER2抗体，辣根过氧化物酶（HRP）标记的链酶亲和素，酶稀释液，化学发光溶液A、B液，浓缩洗涤溶液。2.根据权利要求1所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：化学发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，各孔包被有抗HER2的抗体，抗体包被浓度为5.0μg/mL。3.根据权利要求1所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：试剂盒的检测样本为人血清样本。4.根据权利要求1所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：HER2系列标准品溶液浓度分别为：0、10、25、150、400、1000ng/mL；HER2系列质控品溶液浓度分别为：150±30、25±5ng/mL。5.根据权利要求4所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：样本稀释液为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH=7.4，是每升含有16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。6.根据权利要求5所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：酶稀释液：为含有蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH=7.4，是每升含有50g蔗糖，8gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4，1.44gNa2HPO4的水溶液。7.根据权利要求6所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：浓缩洗涤溶液是含有体积分数0.05%吐温-20的pH=7.4，0.1mol/L磷酸盐缓冲液。8.根据权利要求6所述的检测原癌基因HER2的化学发光酶免疫检测试剂盒，其特征在于：化学发光溶液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH=8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na2HPO42.82g，0.75%的过氧化氢脲0.64mL的水溶液，所述百分比为质量百分比。9.根据权利要求1所述的检测原...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐恒，陆上苏，李孟，陶艳茹，孙旭，赵灿，
申请(专利权)人：南京健安医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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