脂联素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种脂联素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用，脂联素化学发光免疫检测试剂盒包括：脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。这种脂联素化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成脂联素的检测。这种脂联素化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到0.01ng/mL，相对于传统的脂联素的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种脂联素化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种脂联素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
脂肪组织主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素(Adiponectin/ADPN)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，在人体内以3-30ug/ml的浓度出现在循环血浆中。脂联素又被称作Acrp30、apM1、AdipoQ、GBP28，最初,脂联素是在人体皮下脂肪组织、血浆和鼠科动物的脂肪细胞中被发现。人体内的脂联素由244个氨基酸组成，分子量为30KD。由氨基末端的分泌信号序列(aa 1-18)，一段特异序列(aa19-41),一组由22个氨基酸组成的胶原重复序列(aa 42-107)，一段球状序列(aa108-244)组成。其中球状区是脂联素生物活性的关键部位，和TNF-α的结构相似，脂联素与胶原Ⅷ、X和补体C1q高度同源。脂联素的单聚体和三聚体是其生物活性形式或受体亲和配基可以特异性结合骨骼肌或肝脏细胞膜上的G蛋白藕联受体一型或二型脂联素受体，进而调节脂肪酸氧化和糖代谢。脂联素是一种胰岛素增敏激素(An Insulin-sensitizing Hormone)，能改善胰岛素抗性(Insulin resistance)和动脉硬化症；对人体的研究发现，脂联素水平能预示II型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。传统的脂联素的检测方法主要采用酶联免疫吸附法，然而，受限于酶联免疫的特点，传统的脂联素的检测方法在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染，并且由于检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测精度较差。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种检测精度较高的脂联素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用。一种脂联素化学发光免疫检测试剂盒，包括：脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。在一个实施例中，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体为表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒。在一个实施例中，所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒为表面带有氨基、羧基、甲苯磺酰基或环氧乙烷基的磁微粒。在一个实施例中，所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的粒径为0.05μm～3μm。在一个实施例中，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物为异鲁米诺、三联吡啶钌、吖啶酯、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物与所述脂联素单克隆抗体通过化学反应键直接连接或通过蛋白交联剂连接。在一个实施例中，所述蛋白交联剂选自碳酰二亚胺盐和琥珀酰亚胺中的至少一种。在一个实施例中，所述蛋白交联剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和磺酸化N-羟基琥珀酰亚胺中的至少一种。在一个实施例中，还包括脂联素定标品。一种上述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将脂联素单克隆抗体和固相载体混合并充分反应，得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体；以及将化学发光标记物和脂联素单克隆抗体混合并充分反应，得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。在一个实施例中，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体为表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒；所述将脂联素单克隆抗体和固相载体混合并充分反应，得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体的操作为：取表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用缓冲液重悬，接着活化剂活化所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的表面连接基团，接着加入脂联素单克隆抗体，室温下充分反应，磁分离去除上清后重悬，得到脂联素单克隆抗体包被的表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒。在一个实施例中，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素；所述将脂联素单克隆抗体和固相载体混合并充分反应，得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体的操作为：将偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素的固相载体和偶联有生物素的脂联素单克隆抗体在缓冲液中混合，充分反应后得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素；所述将化学发光标记物和脂联素单克隆抗体混合并充分反应，得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体的操作为：将偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素的化学发光标记物和偶联有生物素的脂联素单克隆抗体在缓冲液中混合，充分反应后得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物与所述脂联素单克隆抗体通过化学反应键直接连接；所述将化学发光标记物和脂联素单克隆抗体混合并充分反应，得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体的操作为：将脂联素单克隆抗体和化学发光标记物在缓冲液中混合，充分反应后得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。在一个实施例中，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物与所述脂联素单克隆抗体通过蛋白交联剂连接；所述将化学发光标记物和脂联素单克隆抗体混合并充分反应，得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体的操作为：将脂联素单克隆抗体、化学发光标记物和蛋白交联剂在缓冲液中混合，充分反应后得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。一种脂联素的浓度的检测方法，采用上述脂联素化学发光免疫检测试剂盒，所述脂联素的浓度的检测方法包括如下步骤：使用脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体对待测样本进行夹心免疫试验，所述待测样本中的脂联素与脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体反应，形成夹心复合物，经过清洗分离后，测得待测样本的发光强度；使用脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体对脂联素定标品进行夹心免疫试验，所述脂联素定标品中的脂联素与脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体反应，形成夹心复合物，经过清洗分离后，测得脂联素定标品的发光强度，根据所述脂联素定标品的发光强度和所述脂联素定标品的浓度构建横纵坐标分别为浓度和发光强度的脂联素的标准曲线；以及将所述待测样本的发光信号带入所述脂联素的标准曲线中，计算得到所述待测样本中的脂联素的浓度。这种脂联素化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成脂联素的检测。这种脂联素化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：脂联素单克隆抗体包被的固相载体和化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体为表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒。3.根据权利要求2所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒为表面带有氨基、羧基、甲苯磺酰基或环氧乙烷基的磁微粒。4.根据权利要求2或3所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的粒径为0.05μm～3μm。5.根据权利要求1所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素。6.根据权利要求1所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物为异鲁米诺、三联吡啶钌、吖啶酯、碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。7.根据权利要求1或6所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物上偶联有链霉亲和素、亲和素或中性亲和素，所述脂联素单克隆抗体上偶联有生物素。8.根据权利要求1或6所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体中，所述化学发光标记物与所述脂联素单克隆抗体通过化学反应键直接连接或通过蛋白交联剂连接。9.根据权利要求8所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白交联剂选自碳酰二亚胺盐和琥珀酰亚胺中的至少一种。10.根据权利要求9所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白交联剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和磺酸化N-羟基琥珀酰亚胺中的至少一种。11.根据权利要求1所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括脂联素定标品。12.一种权利要求1～11中任一项所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将脂联素单克隆抗体和固相载体混合并充分反应，得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体；以及将化学发光标记物和脂联素单克隆抗体混合并充分反应，得到化学发光标记物标记的脂联素单克隆抗体。13.根据权利要求12所述的脂联素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述脂联素单克隆抗体包被的固相载体中，所述固相载体为表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒；所述将脂联素单克隆抗体和固相载体混合并充分反应，得到脂联素单克隆抗体包被的固相载体的操作为：取表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用缓冲液重悬，接着活化剂活化所述表面带有用于蛋白质化学反应连接基团的磁微粒的表面连接基团，接着加入脂联素单克隆抗体，室温下充分反应，磁分离去除上清后重悬，得到脂联...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏福臻，钱纯亘，王刚，祝亮，何雨禧，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44