The invention relates to an electrochemical sensor for detecting beta amyloid (A beta) oligomer and a preparation method thereof. The invention of nucleic acid gold nanoparticles and the thiol modified aptamer and thionine interaction to form nano conjugate stable antibody; at the same time the surface of the electrode modified with graphene oxide in carboxyl fixed; identification of A beta oligomers further with gold nanoparticles conjugates of aptamer modified, so as to form a sandwich type immunosensor; through the electrochemical signal of Thionine to achieve detection of A beta oligomers. The sensor has high sensitivity, good specificity and high stability; compared with the traditional immune sensor has the advantages of simple preparation and avoid using enzyme labeled antibody reagents, can be used for the detection of cerebrospinal fluid A beta oligomers, promote early diagnosis of Alzheimer's disease, a clinical application value.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于检测β-淀粉样蛋白寡聚体的类免疫电化学传感器及其制备方法,具体涉及一种以抗体和核酸适配体形成夹心型结构识别β-淀粉样蛋白寡聚体的类免疫电化学传感器及其制备方法,属于生物传感和电分析化学检测
技术介绍
随着我国步入老龄化社会,阿尔茨海默病(AD)的发病率逐渐提高,严重危害老年人的身心健康并影响生存质量。AD标志物的检测是实现早期诊断和了解病情发展的重要途径。研究表明,AD的发生和大脑里淀粉样斑块的形成密切相关。斑块形成是由于分泌酶复合物异常切割淀粉样前体蛋白而产生的过量β-淀粉样蛋白(Aβ)所致。与单体和纤维聚集体Aβ相比,Aβ寡聚体更大的比表面积使其含有丰富的β折叠构象,从而疏水残基从蛋白质表面被挤压出来引起钙离子内流、多巴胺外漏、线粒体去极化而导致细胞凋亡。因此,寡聚体被认为比纤维聚集体更具有毒性,可溶性Aβ寡聚体已经被作为AD的标志物。常用的检测Aβ寡聚体的方法主要有酶联免疫法、磁共振成像法、光谱法、比色法及电化学法。在这些方法中,酶联免疫法具有高的可靠性,但比较耗时且需要昂贵的酶标抗体试剂;磁共振成像法需要复杂的大型设备;光谱法往往需要合成复杂的探针分子且信号容易受到生物体系中其他物质的干扰;纳米金比色法实现了Aβ的快速测定,然而选择性仍然需要提高。电化学法由于具备快速、简便及易微型化等优点,研究者利用电化学方法和生物分子(包括抗体、蛋白及多肽)与Aβ的强相互作用在检测Aβ方面获得了 ...
【技术保护点】
用于检测β‑淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,通过如下方法实现:(1)、选用核酸适配体选用与Aβ寡聚体具有强结合能力的核酸适配体,其序列为:GCCTGTGTTGGGGCGGGTGCG,并进行5'SH C6的修饰;(2)、制备AuNPs溶液:将柠檬酸溶液加入到煮沸的HAuCl4·4H2O溶液中,搅拌反应,然后冷却到室温,得AuNPs溶液,放置在冰箱中备用;取制备好的AuNPs和硫堇溶液混合,室温下搅拌,离心,取下层,用培养液溶解;最后加入上述核酸适配体,在室温搅拌下反应,经离心、洗涤、溶解,即得到核酸适配体和硫堇共同修饰的AuNPs共轭物;(3)、氧化石墨烯的合成及羧基功能化采用改进的Hummers法制备氧化石墨烯: A、低温反应阶段,在0‑4℃冰浴中,加入浓硫酸,再加入石墨粉及硝酸钠,搅拌反应后从冰浴中取出 ,10‑20℃条件下,缓慢加入高锰酸钾并持续搅拌反应;B、中温反应阶段,将上述溶液移到37‑40℃的水浴中,加入去离子水,继续搅拌,反应停止后冷却到室温;C、将混合溶液移入到约90‑95℃水浴中,在搅拌的条件下继续反应,随后加入去离子水终止反应;再 ...
【技术特征摘要】
1.用于检测β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在
于,通过如下方法实现:
(1)、选用核酸适配体
选用与Aβ寡聚体具有强结合能力的核酸适配体,其序列为:GCCTGTGTTGGGGCGGGTGCG,
并进行5'SHC6的修饰;
(2)、制备AuNPs溶液:将柠檬酸溶液加入到煮沸的HAuCl4·4H2O溶液中,搅拌反应,然后
冷却到室温,得AuNPs溶液,放置在冰箱中备用;取制备好的AuNPs和硫堇溶液混合,室温下
搅拌,离心,取下层,用培养液溶解;最后加入上述核酸适配体,在室温搅拌下反应,经离心、
洗涤、溶解,即得到核酸适配体和硫堇共同修饰的AuNPs共轭物;
(3)、氧化石墨烯的合成及羧基功能化
采用改进的Hummers法制备氧化石墨烯:A、低温反应阶段,在0-4℃冰浴中,加入浓硫
酸,再加入石墨粉及硝酸钠,搅拌反应后从冰浴中取出,10-20℃条件下,缓慢加入高锰酸
钾并持续搅拌反应;B、中温反应阶段,将上述溶液移到37-40℃的水浴中,加入去离子水,继
续搅拌,反应停止后冷却到室温;C、将混合溶液移入到约90-95℃水浴中,在搅拌的条件下
继续反应,随后加入去离子水终止反应;再加入H2O2,搅拌条件下反应;最后加入HCl,经洗
涤、真空干燥后即得到氧化石墨烯固体;
(4)、取上述制备好的氧化石墨烯固体溶于超纯水中配制成溶液,随后向其中加入NaOH
和一氯乙酸,在超声波条件下进行反应,使氧化石墨烯表面的羟基和环氧基变成羧基,经过
滤、洗涤、真空干燥、称量、再溶解,得到羧基化的氧化石墨烯溶液;
(5)、电化学传感器的构筑:A、通过滴涂的方...
【专利技术属性】
技术研发人员:周艳丽,刘澜涛,常竹,张欢庆,徐茂田,
申请(专利权)人:商丘师范学院,
类型:发明
国别省市:河南;41
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