用于量化分析物的方法以及配置成实施该方法的自动分析装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及用于确定样品中的分析物的量的新颖方法，该方法包括：初始纯化步骤，该纯化步骤在第一容器内发生，所述纯化步骤包括以下步骤：在第一容器内使样品、脱脂剂以及涂覆有第一分析物结合配偶体的磁性颗粒混合、温育混合物、从混合物中除去未结合的试剂，以及将在洗脱溶液中结合的分析物洗脱；转移步骤，包括将一定体积的包括分析物的洗脱溶液从第一容器转移至第二容器；以及量化步骤，量化步骤在第二容器内发生，该量化步骤由量化所述洗脱溶液中的分析物的步骤组成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于确定样品中的分析物的量的新颖方法，更具体地涉及一种利用免疫测定的方法和配置成实施该方法的自动分析装置。
技术介绍
本专利技术涉及一种用于量化样品中存在的分析物的量的方法，特别是使得能够量化分析物而无需预先进行复杂费力的样品纯化分析前阶段的方法。本专利技术还涉及确定用于诊断疾病的分析物的量的方法。简化提取和分离方法是改进方法的关键特征。要求单独进行纯化步骤会显著延长该方法的时间，且由于存在至少一个手动操作样品的步骤，因此不仅可能在确定浓度时引入潜在误差，而且可能使样品的可跟踪性产生潜在误差。从样品中除去化合物(例如，脂类)常常需要沉淀步骤，沉淀步骤需要许多手动操作和离心分离。量化之前进行的分析物纯化步骤中的一个步骤可能需要使用有机溶剂，有机溶剂可有毒且可能需要蒸发设备，蒸发设备在临床生化实验室中使用起来很不方便。
技术实现思路
本专利技术旨在克服与现有方法关联的问题。因此，本专利技术满足对用于量化样品中的分析物的一种简单有效的方法的需求。其基于消除了脱脂-提取-纯化的复杂手动操纵。本专利技术已实现了使得能够大大降低完成时间的方法，该方法比之前的方法更有效，因此更具成本效益，且允许完全追踪所有操作，因此更适于临床实验室的常规使用。本专利技术基于以下发现，即一步式纯化(其中，在同一容器内混合样品、脱脂剂和分析物结合配偶体)有效地工作。如此，在第一方面，本专利技术涉及一种用于量化样品中的分析物的方法，包括：-初始纯化步骤，在第一容器内发生，包括以下步骤：a)在第一容器内混合样品、脱脂剂和涂覆有第一分析物结合配偶体的第一磁性颗粒，b)温育容纳第一容器内的混合物，以沉淀样品中所包含的脂类并使样品中包含的分析物结合至第一分析物结合配偶体，c)将第一容器置于磁场中，以通过磁力将第一磁性颗粒吸引至第一容器的内壁部分，d)从第一容器中容纳的混合物中除去未结合的试剂，e)在洗脱溶液中洗脱结合的分析物以将分析物与第一分析物结合配偶体分离，-转移步骤，包括以下步骤：f)将第一容器置于磁场中，以通过磁力将第一磁性颗粒吸引至第一容器的内壁部分，g)将一定体积的包括分析物的洗脱溶液从第一容器转移至第二容器，以及-量化步骤，该步骤在第二容器内发生，由量化所述洗脱溶液中的分析物的步骤组成。本专利技术可用于任何人类含水生物介质，例如血液、血清或血浆。根据本专利技术的方面，第一容器和第二容器中的至少之一为透明小容器(cuvette，小玻璃管)、试管或类似的器皿。第一容器和第二容器中的每一个都可以是透明小容器、试管或类似的器皿。根据本专利技术的方面，第一容器和第二容器中的至少一个由玻璃或塑料制成。第一容器和第二容器中的每一个均可由玻璃或塑料制成。所述转移步骤可使用诸如采样和移液装置(pipetting device，吸液装置)的工具进行。根据本专利技术的一个方面，温育步骤包括样品脱脂步骤。应注意，有利的是，脱脂剂有利地配置成有利于样品中所包含的脂类沉淀。脱脂剂可以是聚阴离子分析物，例如硫酸葡聚糖、磷钨酸，或肝素(在存在II族阳离子的情况下，例如镁、锰或钙)。这种与脱脂剂的温育允许脂类沉淀(由于脱脂剂)，并允许分析物与磁性颗粒上涂覆的第一分析物结合配偶体结合。根据本专利技术的方面，除去步骤包括洗涤步骤，洗涤步骤包括利用洗涤溶液洗涤第一磁性颗粒。在本专利技术的特定方面，由将碱性溶液(basic solution)(例如NaOH，例如0.3N至0.6N NaOH)加入包括结合的分析物的第一容器而形成洗脱溶液。然后，将中和溶液(例如，柠檬酸，更具体地说是0.3至0.6M柠檬酸)和方法缓冲液加入第一容器内。在本专利技术的更特定的方面，方法缓冲液包括在MOPS缓冲液中的BSA、polypep、甘露醇、蔗糖、氚核-抗氧化剂混合物、抗坏血酸钠、trolox以及碳酸氢钠。根据本专利技术的方面，可使用移液工具向第一容器和第二容器内加入以及从第一容器和第二容器除去任何液体(溶液、缓冲液、洗涤溶液等中的试剂)。根据本专利技术的一个方面，分析物可以是任何维生素D代谢物，更优选是1,25-二羟基维生素D(1,25D)，或类固醇(例如醛固酮、雄激素、雌激素、孕激素或胆固醇)。维生素D代谢物也可以是25-羟基维生素D，例如25-羟基维生素D2或25-羟基维生素D3。根据本专利技术的优选方面，分析物为1,25-二羟基维生素D(1,25D)。该分析物在血液中的浓度非常低，且由于其标准浓度是10至100微微克/毫升(picogrammes/ml(皮克/毫升))，因此其测定很具挑战性。人类血液中的1,25D的浓度可非常好地指示人体维生素D新陈代谢的有效性，并且可很好地指示慢性肾病。已经很难开发用于确定1,25D水平的方法，这主要是因为血液中的1,25D的浓度非常低。众所周知，在自动化系统上或利用手动方法进行分析之前，需要费力进行多次提取步骤来测量1,25D。如今市场上可用的现有提取方法需要大量设备，包括纯化柱、旋转器、离心分离机和氮蒸发器。常常需要溶剂。样品的阳性鉴定会受损。分析物的量化可通过本领域的技术人员所熟知的任何技术进行。本专利技术总体上涉及以下用于量化分析物的技术：-临床化学或生物化学测试，该测试使用血清或其它含水生物介质进行，且其中利用的测量原理基本上是分光光度法；-免疫测定，根据不同的技术方法(例如，ELISA、EIA)进行，测量通过分光光度法、荧光或CLIA(通过发光)进行。在本专利技术的特定方面，通过免疫测定来量化分析物，利用第二分析物结合配偶体来进行所述免疫测定。在本专利技术的特定方面，第一分析物结合配偶体和第二分析物结合配偶体中的至少一种(以及例如第一分析物结合配偶体和第二分析物结合配偶体中的每一个)可以是多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、工程化或人源化抗体、scFV或Fab片段。在本专利技术的特定方面，第一分析物结合配偶体和第二分析物结合配偶体是相同的或不同的。用于量化低浓度样品中存在的分析物的优选方法之一是通过竞争结合方法。当分析物为小分子且不会有多种结合的可能性时，需要该竞争结合方法。合适的竞争结合方法采用多种形式，且为本领域中的技术人员所熟知。典型的竞争结合方法将包括使分析物结合配偶体与分析物的标记形式和怀疑包含相同分析物的未标记形式的样品接触。被发现的与分析物结合配偶体结合的标记分析物的量指示样品中的未标记分析物的比例。替代地，竞争结合方法可包括提供与分析物的标记形式结合的分析物结合配偶体，将怀疑包含未标记形式的分析物的样品添加至分析物结合配偶体，并测量指示存在的未标记分析物的量的被取代标记分析物的量。在更具体和优选的方面，本专利技术的方法能够以完全自动化的方式进行。根据本专利技术的更优选的方面，方法通过自动分析装置进行，例如自动免疫测定分析仪。该方法固有的创新在于分析前阶段在相同仪器上完全自动化，而非手动进行或在分离的设备上进行。在本专利技术的一个方面，提供、移液、温育和混合步骤均由自动分析装置管控。本专利技术进一步涉及一种配置成实施根据本专利技术的方法的自动分析装置，更具体地涉及一种自动分析装置，其包括：-多个容器，-转子，具有基本竖直的旋转轴线并绕其旋转轴线可旋转地受驱动，该转子界定了径向向外开口的腔，-装载装置，其适于将容器装载在转子的腔内，-至少一个采样和移液装置，适于向容置在转子的腔内的容器提供试剂和样品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于确定样品中的分析物的量的方法，包括：‑纯化步骤，包括以下步骤：a)将样品、脱脂剂以及涂覆有第一分析物结合配偶体的第一磁性颗粒在第一容器内混合，b)温育所述第一容器内容纳的混合物，以沉淀所述样品中包含的脂类并使所述样品中包含的分析物与所述第一分析物结合配偶体结合，c)将所述第一容器置于磁场中，以通过磁力将所述第一磁性颗粒吸引至所述第一容器的内壁部分，d)从所述第一容器中容纳的所述混合物中除去未结合的试剂，e)在洗脱溶液中洗脱结合的分析物，以使所述分析物与所述第一分析物结合配偶体分离，‑转移步骤，包括以下步骤：f)将所述第一容器置于磁场中，以通过磁力将所述第一磁性颗粒吸引至所述第一容器的内壁部分，g)将一体积的包括所述分析物的所述洗脱溶液从所述第一容器转移至第二容器，以及‑量化步骤，所述量化步骤发生在所述第二容器内，所述量化步骤由量化所述分析物的步骤组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.03 EP 13195534.61.一种用于确定样品中的分析物的量的方法，包括：-纯化步骤，包括以下步骤：a)将样品、脱脂剂以及涂覆有第一分析物结合配偶体的第一磁性颗粒在第一容器内混合，b)温育所述第一容器内容纳的混合物，以沉淀所述样品中包含的脂类并使所述样品中包含的分析物与所述第一分析物结合配偶体结合，c)将所述第一容器置于磁场中，以通过磁力将所述第一磁性颗粒吸引至所述第一容器的内壁部分，d)从所述第一容器中容纳的所述混合物中除去未结合的试剂，e)在洗脱溶液中洗脱结合的分析物，以使所述分析物与所述第一分析物结合配偶体分离，-转移步骤，包括以下步骤：f)将所述第一容器置于磁场中，以通过磁力将所述第一磁性颗粒吸引至所述第一容器的内壁部分，g)将一体积的包括所述分析物的所述洗脱溶液从所述第一容器转移至第二容器，以及-量化步骤，所述量化步骤发生在所述第二容器内，所述量化步骤由量化所述分析物的步骤组成。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述分析物为维生素D代谢物或类固醇。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述分析物为1,25-二羟基维生素D(1,25D)或25-羟基维生素D。4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述分析物为从由醛固酮、雄激素、雌激素、孕激素和胆固醇组成的组中选择的类固醇。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述样品为含水生物介质。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，利用免疫测定来完成所述分析物的量化。7.根据权利要求6所述的方法，其中，利用涂覆有第二分析物结合配偶体的第二磁性颗粒来进行所述免疫测定。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述第一分析物结合配偶体和所述第二分析物结合配偶体中的至少一个为多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、工程化或人源化抗体、scFV或Fab片段。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述脱脂剂为聚阴离子分析物。10.根据权利要求9所述的方法，其中，在存在II族阳离子的情况下，所述脱脂剂为从由硫酸葡聚糖、磷钨酸和肝素组成的组中选择的聚阴离子分析物。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰奎琳·特兰，诺贝特·布吕特，洛伊克·科尔诺，
申请(专利权)人：因慕勒代格诺斯迪克系统有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB