抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒包括：抗核抗体单克隆抗体包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成抗核抗体的检测这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到4AU/mL，相对于传统的抗核抗体的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
抗核抗体（antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP)、DNA、可提取的核抗原（ENA) 和RNA 等作为靶抗原的自身抗体的总称，主要存在于血清中。抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE，95％～ 100％）、类风湿性关节炎（RA，10％～ 20％）、混合性结缔组织病（MCTD，80％～ 100％）、干燥综合症（SS，10％～ 40％）、全身性硬皮病（85％～90％）、狼疮性肝炎（95％～ 100％）、原发性胆汁性肝硬化（95％～ 100％）等。临床检测抗核抗体的常见方法包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着不足，具体如下所示。一、间接免疫荧光法该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：(1) 在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；(2) 操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；(3) 荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；(4) 结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；(5) 只能进行定性检测，不能进行定量测定。二、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（ELISA） 被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：（1）使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；（2） 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；（3） 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；（4） 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；（5） 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；（6） 在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。三、化学发光法化学发光法按发光原理可分为直接化学发光和酶促化学发光。酶促化学发光主要有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶两种，但都有一定的局限性，辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。吖啶酯作为标记物的直接化学发光相比酶促化学发光具有明细优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，可以两点定标，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种检测灵敏度较高的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，包括：抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。在一个实施例中，所述抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒中，所述抗核抗体单克隆抗体与所述羧基化的磁微粒的比例为1:20~100。在一个实施例中，所述抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，所述抗核抗体单克隆抗体与所述化学发光标记物的比例为1:2~200。在一个实施例中，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。在一个实施例中，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。在一个实施例中，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。在一个实施例中，所述A液为H2O2溶液，所述B液为NaOH溶液。在一个实施例中，还包括抗核抗体定标品。在一个实施例中，所述抗核抗体定标品为浓度分别为5AU/mL、45AU/mL、80AU/mL、160AU/mL、320AU/mL和640AU/mL的抗核抗体的溶液。一种上述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：取羧基化的磁微粒的悬浮液，磁分离去上清后用MES缓冲液重悬，接着加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接着加入抗核抗体抗原，室温下混悬2h~10h，磁分离去除上清后用Tris缓冲液重悬，得到抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒；以及取抗核抗体单克隆抗体，加入碳酸盐缓冲液后混匀，然后加入化学发光标记物后混匀，室温下避光反应1h~2h后除杂，得到抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成抗核抗体的检测这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，经过实验，其检测灵敏度达到4AU/mL，相对于传统的抗核抗体的检测方法灵敏度至少提高了10倍，这种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒的检测精度较高。附图说明图1为一实施方式的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法的流程图；图2为实施例3得到的抗核抗体标准曲线图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。一实施方式的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，包括：抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。优选的，抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒中，抗核抗体单克隆抗体与羧基化的磁微粒的比例为1:20~100。优选的，抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，抗核抗体单克隆抗体与化学发光标记物的比例为1:2~200。优选的，羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。化学发光标记物可以为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。其中，化学发光标记物优选为吖啶酯。在其他的实施例中，上述抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒还包括化学发光底物液。化学发光底物液包括A液和B液。A液可以为H2O2溶液，B液可以为NaOH溶液。本实施例中，A液为浓度为0.1mol/L的H2O2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。

【技术特征摘要】
1.一种抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒和抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物。2.根据权利要求1所述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗核抗体抗原包被的羧基化的磁微粒中，所述抗核抗体抗原与所述羧基化的磁微粒的比例为1:20~100。3.根据权利要求1所述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抑制素单克隆抗体标记的化学发光标记物中，所述抗核抗体单克隆抗体与所述化学发光标记物的比例为1:2~200。4.根据权利要求1所述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒径为0.05μm~1μm。5.根据权利要求1所述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。6.根据权利要求1所述的抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液。7.根据权利要求6所述的抗核抗体化学发光免...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冬舟，李爽，张昭，夏福臻，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44