乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法，乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。制备该乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括反应膜的制备、金结合物垫的制备、切割装配几个步骤。该乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，特异性好，灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，特别是指一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
乙型脑炎是由乙脑病毒引起、由蚊虫传播的一种急性传染病。乙脑病毒属披盖病毒科中黄病毒属，为B组虫媒病毒，呈球形，直径40nm，含单股正链RNA，长约11kb。其RNA基因组编码单个多肽，内有衣壳蛋白(C)与核酸构成的核心，外披以含脂质的囊膜，表面有囊膜糖蛋白(E)刺突，即病毒血凝素，囊膜内尚有内膜蛋白(M)，参与病毒的装配，以及非结构蛋白NS1—NS5。乙脑主要通过蚊虫叮咬而传播，其中三带喙库蚊是主要传播媒介。人群对乙脑病毒普遍易感，感染后多数呈隐性感染，并获得持久免疫力。发病病例主要集中在10岁以下的儿童，以2-6岁组发病率最高。发病与否，取决于病毒的数量，毒力和机体的免疫功能。感染乙脑病毒的蚊虫叮咬人体后，病毒先在局部组织细胞和淋巴结、以及血管内皮细胞内增殖，不断侵入血流，形成病毒血症。发病后，可引起脑实质广泛病变，以大脑皮质、脑干及基底核的病变最为明显。其基本病变为：①血管内皮细胞损害，可见脑膜与脑实质小血管扩张、充血、出血及血栓形成，血管周围套式细胞浸润；②神经细胞变性坏死，液化溶解后形成大小不等的筛状软化灶；③局部胶质细胞增生，形成胶质小结。部分患者脑水肿严重，颅内压升高或进一步导致脑疝。该病的流行区域呈现不断扩大的趋势，有效防控仍然面临严峻的挑战。快速、准确的诊断方法的建立，有利于筛查病毒感染者，可控有效制其传染。目前对乙型脑炎病毒的检测主要有病毒分离培养、分子生物学检测和血清学诊断等手段。病毒分离培养法主要是通过采集患者血液和(或)脑脊液标本，从脑炎患者标本中分离到乙脑病毒的诊断方法，主要分为组织细胞培养法和新生乳鼠接种法。此类方法耗时长，实验仪器与操作要求高，不适于广泛使用与快速筛查。分子生物学检测主要是通过设计乙脑病毒特异性引物，通过聚合酶链式反应或实时荧光定量聚合酶链式反应检测标本中是否存在乙脑病毒特异性核酸，进而诊断是否感染。该方法比病毒分离培养法更加敏感、快速，可直接作出诊断，但也需特定的实验仪器与专业的实验人员操作。血清学检测主要有补体结合试验、中和试验、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验等，这些方法都需要在实验室内由专业技术人员操作，并需要荧光显微镜、酶标仪和多种配套试剂，操作步骤较为复杂。因此，亟需建立操作更加简便，成本低廉，特异性好，灵敏度高，适于普及并可单份检测，更适合于流行病学调查及现场应用的乙型脑炎病毒快速诊断试剂盒。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，操作简便，适用广泛，特异性好，灵敏度高。基于上述目的本专利技术提供的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有重组乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。较佳的，所述重组乙型脑炎病毒抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳的，制备所述重组乙型脑炎病毒抗原所用的PCR引物为：5'-CGCTCGAGTTAAGCATGCATTGGTCGCTAA-3'；5'-CGGAATTCTTTAATCGTTGTCTGGGAATGGGCAATCGTGACA-3'。较佳的，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳的，所述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。可选的，所述检测条放置于长方形塑料盒中，构成检测卡，该检测卡上设有样品孔和检测孔，所述样品孔与所述检测条的所述样品垫位置对应，所述检测孔对应所述检测条的所述检测线和所述质控线。基于相同的专利技术构思，本专利技术还提供一种制备上述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒的方法，包括以下步骤：(1)反应膜的制备：稀释所述重组乙型脑炎病毒抗原和所述羊抗鼠IgG多克隆抗体，并喷涂至所述反应膜上，分别形成所述检测线与质控线，干燥备用；(2)金结合物垫的制备：将所述鼠抗人IgG单克隆抗体与胶体金进行偶联制得胶体金标的记鼠抗人IgG单克隆抗体溶液，调整浓度，并浸泡所述金结合物垫，铺金，干燥备用；(3)切割装配：将所述反应膜、金结合物垫、粗纤维滤纸、样品垫装配至所述反应板，切割后形成所述检测条。较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：(1)使用碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5-9.0；(2)加入鼠抗人IgG单克隆抗体，搅拌；(3)加入10％牛血清白蛋白溶液，搅拌；(4)离心，弃去上清液；(5)加入胶体金结合物稀释液，即得。较佳的，所述胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法步骤1)中，碳酸钾溶液调节胶体金pH值至8.5。本试剂盒的原理为：采用胶体金免疫层析技术原理，在硝酸纤维素膜上的检测线包被基因重组乙型脑炎病毒抗原，在质控线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体，在金标垫上包被胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体。用于定性检测全血或血清(浆)样本中的乙型脑炎病毒IgG抗体。检测阳性样本时，样本中的乙型脑炎病毒IgG抗体可与胶体金标记的鼠 抗人IgG单克隆结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物及样本在硝酸纤维素膜内部向前流动。当复合物经过检测线时与包被的重组乙型脑炎病毒抗原结合，形成“胶体金-鼠抗人IgG单克隆抗体-乙型脑炎病毒IgG-重组乙型脑炎病毒抗原”而凝集显色。剩余的胶体金标记鼠抗人IgG单克隆抗体与指控线包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合而凝集显色，检测阴性样本时，样本中不含乙型脑炎病毒IgG抗体，致使不能形成免疫复合物，则只能在质控线处显色。从上面所述可以看出，本专利技术提供的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒具有快速、简便、不需特殊设备，特异性高，灵敏度好。整个操作时间仅需15-20分钟，适用于疾病的快速诊断，以及现场检测，流行病学调研等。附图说明图1为本专利技术实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图；图2为本专利技术实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测卡的结构示意图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本专利技术进一步详细说明。实施例1：在本实施例中，所述乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，包括检测条或检测卡、样本稀释液。图1为本专利技术实施例乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒中检测条的结构示意图，如图1所示，所述检测条包括反应板1，以及依次叠压粘附于所述反应板上1的样品垫2、金结合物垫3、反应膜4、粗纤维滤纸5。在本实施例中，所述金结合物垫3包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体。作为一个较佳的实施例，所述鼠抗人IgG单克隆抗体标记胶体金前为无色透明液体，浓度为2.0-10.0mg/mL。较佳地，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2mg/mL。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)测定，上样量为10μL时，该鼠抗人IgG单克隆抗体显示为重链和轻链各一条带。在本实施例中，所述反应膜4为硝酸纤维素膜，包括检测线6和质控线 7。所述检测线6包被有重组乙型脑炎病毒抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测条，所述检测条包括金结合物垫和反应膜，所述金结合物垫包被有胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述反应膜包括检测线和质控线，所述检测线包被有乙型脑炎病毒抗原，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述重组乙型脑炎病毒抗原是应用基因工程方法重组表达获得，浓度为2.0-10.0mg/mL。3.根据权利要求2所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，制备所述重组乙型脑炎病毒抗原所用的PCR引物为：5'-CGCTCGAGTTAAGCATGCATTGGTCGCTAA-3'；5'-CGGAATTCTTTAATCGTTGTCTGGGAATGGGCAATCGTGACA-3'。4.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体浓度为4.0-10.0mg/mL，所述鼠抗人IgG单克隆抗体浓度为2.0-10.0mg/mL。5.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括样本稀释液，该样本稀释液为磷酸盐缓冲液。6.根据权利要求1至5任意一项所述的乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测条放置于长方形塑料盒中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海波，
申请(专利权)人：北京中检安泰诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11