本发明专利技术公开了一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，试纸依次设有检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区，所述硝酸纤维素膜区包括包被羊抗鼠IgM的质控线、包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线，本发明专利技术所采用的技术方案可以快速检测标本中人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体，对于人流行性乙型脑炎急性感染期的检测检测结果的总体符合率较高，操作简单，灵敏度高，对于临床上人流行性乙型脑炎有很好的辅助诊断意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂领域，具体地涉及一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸。
技术介绍
流行性乙型脑炎是一种常见的血液传染病，主要是经蚊传播，夏秋季多发，大多数患者症状较轻或呈无症状的隐性感染，仅少数出现中枢神经系统症状，表现为高热、意识障碍、惊厥、强直性痉挛和脑膜刺激征等，重型患者病后往往留有后遗症。该病症疑似病例诊断主要为在流行地区蚊虫叮咬季节出现发热、头痛、恶心、呕吐、嗜睡、颈抵抗、抽搐等。然后进行确诊诊断：①曾在疫区有蚊虫叮咬史；②高热、昏迷、肢体痉挛性瘫痪、脑膜刺激征及大脑椎体束受损(肌张力增强、巴氏征阳性)；③高热、昏迷、抽搐、狂躁，甚至由于呼吸衰竭、循环衰竭而死亡；④病原学或血清学检查获阳性结果。流行性乙型脑炎病毒简称乙脑病毒，当人受带病毒的蚊子叮咬后，乙脑病毒进入人体，在血管内皮细胞、淋巴结、肝、脾等吞噬细胞内增殖，并经血液循环到达脑部而引起炎症。人体接种疫苗可提高对乙脑病毒感染的抵抗力，对预防乙脑也有良好效果。乙脑尚无特效治疗方法，早期住院、中西医结合治疗，可以大大提高治愈率，减少后遗症，因此能在发病急性期快速的诊断是此病治疗的关键环节。乙脑病毒感染发病早期即产生特异性lgM，病后2～3周达到高峰，故单份血清可做出早期诊断，目前普遍采用采集急性期患者血清或脑脊液特异性lgM，也可做RT—PCR检测标本中的病毒核酸片段；常规血清学试验，(H1、CF、NT)需取双份血清，同时做对比试验，当恢复期血清抗体滴度比急性期≥4倍时，有辅助诊断意义，可用于临床回顾性诊断；微量间接免疫荧光法，用荧光素标记的抗u链血清，检测已与细胞抗原片结合的lgM，根据特异性荧光颗粒，判断血清标本中的lgM存在。由于乙脑患者病毒血症期短，需要快速的确诊并治疗，以上方法周期长，过程复杂，不利于对乙脑病毒的快速诊断，因此本专利技术提供了一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸。本专利技术所提供的检测试纸利用胶体金免疫层析技术，快速直观的检测出乙脑病毒中IgM抗体从而有利于流行性乙型脑炎患者的急性期的快速诊断。本专利技术的技术方案为：一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，所述的试纸包括检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区。进一步的，所述的检测样品区为玻璃纤维层；所述的胶体金标记区包括胶体金层和保护垫，所述的保护垫为玻璃纤维素膜；所述的硝酸纤维素膜区包括包被羊抗鼠IgM的质控线、包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线，所述的质控线是由浓度为1.5mg/ml的羊抗鼠IgM溶液在硝酸纤维素膜制成，所述的检测线由浓度为0.1mg/ml的人流行性乙型脑炎病毒抗原溶液制成；所述的吸水区为吸水滤纸。一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸的制备方法为：(1)胶体金层制备：a.稀释液制备：取10mM的Tris100ml、0.9％的NaCl50ml、0.05％的PEG75ml、5％的蔗糖50ml、0.1％的NaN325ml全部加入容量瓶，先加入纯化水，使之溶解完全，再加入BSA，静置1～2h，混匀，以纯化水定容1L，以0.22um微孔膜做除菌过滤，再用HCl溶液调节PH为7.3～7.5，置于2～5℃环境中，即制得所述的稀释液，备用；b.胶体金溶液制备：取1～3％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5～0.8％柠檬酸三钠溶液1.0ml，迅速混匀，继续煮沸10分钟，待溶液颜色由蓝经紫变酒红色后冷却至室温，然后加入2～3％的碳酸钾溶液100μl和1mg/ml的抗人IgM单克隆抗体溶液100μl，混合均匀后即得到标记的胶体金溶液；C.胶体金层制备：将b制得的混合溶液放入离心管中，在-5～3℃条件下，以15000转/分的转速离心30分钟，弃去上清液，将下层沉淀物用a制得的稀释液进行稀释，稀释液与离心前混合溶液的体积比为20∶1，稀释后得到的溶液以5cm/秒的速度均匀喷射在玻璃纤维层上即得到所述的胶体金层。(2)硝酸纤维素膜制备：所述的质控线是由的将羊抗鼠IgM溶液稀释到浓度为1.5mg/ml喷洒到硝酸纤维素膜上，得到质控线；将人流行性乙型脑炎病毒抗原溶液稀释到浓度0.1mg/ml喷洒到硝酸纤维素膜上，得到检测线，35℃环境中干燥3～5h，封存，即得到所述的硝酸纤维素膜；(3)试纸制备：将检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区依次进行粘贴，硝酸纤维素膜与吸水滤纸相互交叠0.2mm，硝酸纤维素膜和样品区之间相互交叠0.2mm，按4～6mm的宽度切为小条，试剂条，将试剂条包装后，加上干燥剂，低温冷藏，即制得一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸。本专利技术试纸的使用方法及结果判断标准，将静脉血置于干净未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收缩，离心取血清，将血清60μl滴于检测试纸的检测样品区，5～10min之内观察色变情况：(1)阴性：包被羊抗鼠IgM的质控线上形成一个红色沉积反应标记，包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线上无反应标记出现，则表明被测样品中无乙脑病毒抗体；(2)阳性：包被羊抗鼠IgM的质控线上无反应标记出现，包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线上出现一个红色沉积反应标记，则表明被测样品中有乙脑病毒抗体；(3)无效：包被羊抗鼠IgM的质控线上无反应标记出现，包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线上无反应标记出现，则表明本次检测无效。本专利技术的试纸的有益效果体现在：本专利技术的试纸对急性期的流行性乙型脑炎病毒IgM抗体检测，准确率高，经临床验证检测结果的符合率在90％左右，对操作人员不需专业培训，按说明书即可完成操作，全过程只需15分钟，降低了使用成本，适合基层医院等偏远地区医疗机构使用。具体实施方式实施例1：一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，所述的试纸包括检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区。其中，所述的检测样品区为玻璃纤维层；所述的胶体金标记区包括胶体金层和保护垫，所述的保护垫为玻璃纤维素膜；所述的硝酸纤维素膜区包括包被羊抗鼠IgM的质控线、包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线，所述的质控线是由浓度为1.5mg/ml的羊抗鼠IgM溶液在硝酸纤维素膜制成，所述的检测线由浓度为0.1mg/ml的人流行性乙型脑炎病毒抗原溶液制成；所述的吸水区为吸水滤纸。一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸的制备方法为：(1)胶体金层制备：a.稀释液制备：取10mM的Tris100ml、0.9％的NaCl50ml、0.05％的PEG75ml、5％的蔗糖50ml、0.1％的NaN325ml全部加入容量瓶，先加入纯化水，使之溶解完全，再加入BSA，静置1h，混匀，以纯化水定容1L，以0.22um微孔膜做除菌过滤，再用HCl溶液调节PH为7.3，置于2℃环境中，即制得所述的稀释液，备用；b.胶体金溶液制备：取1％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5％柠檬酸三钠溶液1.0ml，迅速混匀，继续煮沸10分钟，待溶液颜色由蓝经紫变酒红色后冷却至室温，然后加入2％的碳酸钾溶液100μl和1mg/ml的抗人IgM单克隆抗体溶液100μl，混合均匀后即得到标记的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，其特征在于，所述的试纸包括检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区。
【技术特征摘要】
1.一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，其特征在于，所述的试纸包括检测样品区、胶体金标记区、硝酸纤维素膜区和吸水区。2.如权利要求1所述的一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，其特征在于，所述的检测样品区为玻璃纤维层；所述的胶体金标记区包括胶体金层和保护垫，所述的保护垫为玻璃纤维素膜；所述的硝酸纤维素膜区包括包被羊抗鼠IgM的质控线、包被人流行性乙型脑炎病毒抗原的检测线，所述的质控线是由浓度为1.5mg/ml的羊抗鼠IgM溶液在硝酸纤维素膜制成，所述的检测线由浓度为0.1mg/ml的人流行性乙型脑炎病毒抗原溶液制成；所述的吸水区为吸水滤纸。3.如权利要求1所述的一种快速检测人流行性乙型脑炎病毒IgM抗体的试纸，其特征在于，制备方法为：(1)胶体金层制备：a.稀释液制备：取10mM的Tris、0.9％的NaCl、0.05％的PEG、5％的蔗糖、0.1％的NaN3在纯化水溶解完全，再加入BSA，静置1～2h，混匀，以纯化水定容，以0.22um微孔膜做除菌过滤，再用HCl溶液调节PH为7.3～7.5，置于2～5℃环境中，即制得所述的稀释液，备用；b.胶体金溶液制备：取1～3％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0....
【专利技术属性】
技术研发人员：张金凤，
申请(专利权)人：张金凤，
类型：发明
国别省市：山东;37
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