一种流行性乙型脑炎病毒的微流体基因芯片检测方法技术

本发明专利技术涉及一种快速、灵敏的流行性乙型脑炎病毒微流体基因芯片检测方法。本发明专利技术的检测方法整合了逆转录聚合酶链式反应RT-PCR和微阵列Microarray这两种强大的分子生物学技术，将RT-PCR与微阵列芯片杂交反应腔整合到一张芯片上，PCR杂交的探针直接固定在微阵列中的杂交舱中。检测方法包括如下步骤：样本处理，RNA核酸提取，RT-PCR扩增反应，杂交，清洗，结果判定。通过本发明专利技术可大幅度提高出入境口岸一线检验检疫人员的检测效率，既可减少工作量、又可最大限度地解决传统检测方法可能存在的阳性漏检问题，从而最大限度地防止重大虫媒传染病的输入。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种流行性乙型脑炎病毒的微流体基因芯片检测方法，其特征在于：包括以下检测步骤：(1)样本混匀处理；(2)RNA核酸提取；(3)RT‑PCR扩增反应：a.RT‑PCR反应体系包括：RT‑PCR反应液,特异性正、反向引物混合液，逆转录酶/DNA聚合酶，DEPC水,RT‑PCR质控品,样本RNA核酸；b.将RT‑PCR反应液加入已固化特异性探针的芯片内，将芯片放入反应室内进行扩增反应；所述的特异性引物和探针是根据Nonstructural gene 4基因特异性引物扩增区内设计，能够区别其他病毒株，特异性引物和探针为：JEV‑F:5‑GGTGTAAGGACTAGAGGTTAGAGG‑3(SEQ ID NO 1)JEV‑R:5‑ATTCCCAGGTGTCAATATGCTGTT‑3(SEQ ID NO 2)JEV‑Probe:5‑CCCGTGGAAACAACATCATGCGGC‑3(SEQ ID NO 3)(4)杂交：RT‑PCR扩增完后，加入杂交反应液，使杂交液和扩增液都进入到杂交舱内进行杂交反应；(5)清洗：杂交后的芯片用洗液冲洗，直接用荧光扫描仪检测；(6)结果判定：根据杂交结果，判定感染情况。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：田桢干，张晓航，李俊，李深伟，李平，曹敏，张子龙，
申请(专利权)人：中华人民共和国上海出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：上海;31