一种禽流感H5N6亚型的双色荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种禽流感H5N6亚型的双色荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法。本发明专利技术检测试剂盒含有特异性引物和探针，通过反应体系和条件的优化，一次试验可同时高灵敏、高特异地检测出H5N6的H5基因和N6基因，具有很好的特异性、敏感性和重复性；可特异性地检测H5N6，与SIV-H1N1、NDV、AIV-H7N2、AIV-H7N9、AIV-H9N2等病毒的不发生交叉反应；检测限达102拷贝/µl；重复性较好；本发明专利技术的检测方法是H5N6亚型禽流感病毒快速初筛及初步确认定型的良好方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种禽流感H5N6亚型的双色荧光定量PCR检测试剂盒，包括如下成分：病毒RNA核酸提取液、酶混合液、双色荧光定量PCR Mix、阳性质控品、阴性质控品，其特征在于：所述双色荧光定量PCR Mix中含有2×双色荧光定量PCR buffer、dNTPs、及禽流感病毒H5N6亚型的H5基因和N6基因的特异性引物及探针，序列分别为：H5基因的上游引物：H5‑F：5’‑ CACATGCTCAGGACATACTGGA‑3’（SEQ ID NO.1）；下游引物：H5‑R：5’‑ ACACATTGGGTTTCCGAGGA‑3’（SEQ ID NO.2）；荧光探针：H5‑P：5’‑Fam‑AGACACACAACGGGAAGCTCTGCGATC‑3’BHQ1（SEQ ID NO.3）；N6基因的上游引物：N6‑F：5’‑TATGTAGAACTAATCAGAGGGAGGCC‑3’（SEQ ID NO.4），下游引物：N6‑R：5’‑CCGTCATGCCAGGACCA‑3’（SEQ ID NO.5），荧光探针：N6‑P：5’‑CY5‑GTAGCACTCTGTGGATCCAAGGAGCGATT‑3’BHQ2（SEQ ID NO.6）；H5基因的荧光探针报告基团为Fam，淬灭基团为BHQ1；N6基因的荧光探针报告基团为CY5，淬灭基团为BHQ2。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓玮，徐贵峰，
申请(专利权)人：广州维伯鑫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44