本发明专利技术属生物技术领域，涉及针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体、其抗原结合片段，和它们的应用。所述抗体其主要特征是由于存在于抗体轻链和重链基因可变区中的互补决定区(CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合H10N8亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的抗体；利用所述抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体，进一步用于制备在临床上预防或治疗H10N8亚型禽流感病毒相关疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，涉及针对H10N8亚型禽流感病毒的单克隆抗体及应用，尤其涉及针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体、其抗原结合片段，和它们的应用。
技术介绍
现有技术公开了禽流感病毒是感染鸟类的流感病毒，通常不感染人类。然而，1997年我国香港首次报告了人类感染禽流感病例。这种高致病性禽流感病毒为H5N1亚型，截止2013年12月10日已造成全球15个国家和地区共648例病例报告，其中384例死亡。随后，H9N2、H7N9等多个禽流感病毒亚型也相继被发现具有感染人类的能力。值得注意的是，2013年12月，我国江西发现人感染新型H10N8禽流感病例，这是国际上首次发现能感染人的H10N8禽流感病毒，已确诊两例病例，其中1例死亡。研究表明，流感病毒的主要免疫原性抗原是病毒囊膜表面的跨膜糖蛋白血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶蛋白(NA)，其中，HA识别靶细胞表面受体并与受体相结合，具有与宿主细胞膜融合活性，能够诱导机体产生保护性中和抗体；由于HA基因突变而引起的HA抗原变异往往会导致免疫失败和变异毒株流行，流感病毒频繁并且持续的发生抗原性变异，目前还没有有效的针对H10N8等新型禽流感病毒的疫苗，也没有特效的治疗药物。因此，本领域研究者关注有关新型特异性抗病毒感染的生物工程制剂的研发工作，其中，抗体在抗感染治疗及紧急被动免疫预防方面一直扮演着重要的角色，尤其是特异性针对H10N8亚型禽流感病毒的抗体，其将有效的用于紧急预防和治疗H10N8亚型禽流感的发生与发展。据报道，通过抗体分子基因水平的重组可获得多种多样的特异性鼠源、人源化及全人源抗体，使对单克隆抗体的研究有了突破性进展并越来越显示出其重要意义及实际应用前景。上世纪80年代末90年代初兴起的噬菌体抗体基因库技术兴起和整个基因工程抗体技术研究领域的发展，使当今世界全人源单克隆抗体及新结构抗体的开发研究取得很大进展并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白用以预防和治疗传染病已历史悠久，而全人源单克隆抗体的发展，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和远大前景。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护机体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如抗甲肝病毒、汉坦病毒、RSV病毒、SARS病毒、亨尼帕病毒、埃博拉病毒等单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击。基于现有技术的研究基础，本申请的专利技术人拟提供针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体，其抗原结合片段，和它们对人感染H10N8亚型禽流感良好的预防和治疗的应用。与本专利技术相关的现有技术有：1.Chen，H.etal.ClinicalandepidemiologicalcharacteristicsofafatalcaseofavianinfluenzaAH10N8virusinfection：adescriptivestudy.Lancet383，714-721(2014).2.Dimitrov，D.S.Therapeuticantibodies，vaccinesandantibodyomes.MAbs2，347-56(2010).3.Ying，T.etal.ExceptionallypotentneutralizationofMiddleEastrespiratorysyndromecoronavirusbyhumanmonoclonalantibodies.JVirol88，7796-805(2014).
技术实现思路
本专利技术的目的是提供针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体及应用，尤其涉及针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体、其抗原结合片段，和它们的应用。本专利技术公开了特异性结合H10N8亚型禽流感病毒血凝素蛋白的全人源单克隆抗体。本专利技术的全人源单克隆抗体包括克隆m813和克隆m819。本专利技术还公开了这些抗体的抗原结合片段，双特异性抗体，及与效应分子的偶联物。本专利技术中，所述的抗体是由存在于抗体轻链和重链基因可变区中的互补决定区(CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合H10N8亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的抗体。利用此抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体；所述的抗体和其组合物可以用于，比如说，人感染H10N8亚型禽流感的预防和治疗。本专利技术还公开了编码所述的单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，及偶联物的核酸。在本专利技术的一些实施例中，公开了包含这些核酸的载体，及包含这些载体的宿主细胞。在进一步的实施方案中，公开了包含这些单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，偶联物，核酸，和载体的药用组合物；在其它实施方案中，这些单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，偶联物，核酸，和载体被用于制备检测，预防，或治疗H10N8亚型禽流感的制剂或药物；在本专利技术的一些实施方式中，单克隆抗体，或抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列和/或重链可变区的氨基酸序列，包含至少一个(比如三个)克隆m813或克隆m819的轻链和/或重链可变区的互补决定区(CDR)。更具体的，本专利技术的一种全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，包含：抗体的轻链可变区含有SEQIDNO：1的27-33位，51-53位，和/或90-99位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQIDNO：2的26-33位，51-57位，和/或96-109位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQIDNO：9的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQIDNO：10的26-33位，51-57位，和/或96-109位氨基酸残基，其中单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H10N8亚型禽流感病毒；或，所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其中：轻链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：1具有至少90％的相同性，且重链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：2具有至少90％的相同性；或轻链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：9具有至少90％的相同性，且重链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：10具有至少90％的相同性。本专利技术中，单克隆抗体或抗原结合片段是全人源的。本专利技术中优选，单克隆抗体为IgG；抗原结合片段是scFv，Fv，Fab或F(ab)2。本专利技术中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段为双特异性抗体，其与一种效应分子偶联，其中的效应分子是可检测标记，如荧光标记，放射性标记，亲和素，生物素，或酶；所获得的偶联物其中的效应分子是毒素或化疗剂，尤其所述毒素是绿脓杆菌外毒素。本专利技术中还公开了，一种核酸分子，其编码上述的单克隆抗体或抗原结合片段，双特异性抗体，或所述的偶联物；所述的核酸分子，可操作地连接至启动子。本专利技术中还公开了一种质粒，其含有上述的核酸分子；本专利技术所述的质粒尤其是一种病毒质粒。本专利技术中还公开了含有上述质粒的宿主细胞。本专利技术进一步公开了一种在生物样品中检测H10N8亚型禽流感病毒血凝素蛋白的方法，其包括：在来源于人类或禽类的生物样品，及所述的单克隆抗体或抗原结合片段，双特异性抗体，或所述的偶联物在足以形成免疫复合物的条件下，检测免本文档来自技高网...
【技术保护点】
针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO：1的27‑33位，51‑53位，和/或90‑99位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO：2的26‑33位，51‑57位，和/或96‑109位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO：9的27‑32位，50‑52位，和/或89‑97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO：10的26‑33位，51‑57位，和/或96‑109位氨基酸残基，其中单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H10N8亚型禽流感病毒。
【技术特征摘要】
1.针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQIDNO：1的27-33位，51-53位，和/或90-99位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQIDNO：2的26-33位，51-57位，和/或96-109位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQIDNO：9的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQIDNO：10的26-33位，51-57位，和/或96-109位氨基酸残基，其中单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H10N8亚型禽流感病毒。2.按权利要求1所述的针对H10N8亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其中：轻链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：1具有至少90％的相同性，且重链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：2具有至少90％的相同性；或轻链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：9具有至少90％的相同性，且重链可变区的氨基酸序列与SEQIDNO：10具有至少90％的相同性。3.按权利要求1或2所述的针对H10N8亚型禽流感病毒的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中的单克隆抗体或抗原结合片段是全人源的。4.按权利要求1-3中任一项所述的针对H10N8亚型禽流感病毒的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中的单克隆抗体为IgG。5.按权利要求1-3中任一项所述的针对H10N8亚型禽流感病毒的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中抗原结合片段是scFv，Fv，Fab或F(ab)2。6.一种双特异性抗体，含有权利要求1-5中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段。7.权利要求1-5中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段，或权利要求6所述的双特异性抗体，与一种效应分子偶联成偶联物。8.权利要求7所述的偶联物，其中的效应分子是可检测标记。9.按权利要求8所述的偶联物，其中的可检测标记是荧光标记，放射性标记，亲和素，生物素，或酶。10.按权利要求7所述的偶联物，其中的效应分子是毒素或化疗剂。11.按权利要求10所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：应天雷，崔胜，钱朝晖，王丽丽，郑旺良，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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