重组禽副粘病毒疫苗及其制备和使用方法技术

本发明专利技术包括工程化APMV组合物或疫苗。所述疫苗或组合物可以是重组APMV组合物或疫苗。本发明专利技术包括用于修饰APMV的基因组以产生重组APMV的方法；利用此类方法制备的经修饰的APMV；DNA和蛋白质序列；以及利用这样的重组APMV感染细胞和宿主动物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是申请日为2010年8月20日、专利技术名称为"重组禽副粘病毒疫苗及其制备 和使用方法"的专利技术专利申请No. 201080045564. 7的分案申请。 通过引用合并入本文 本申请要求保护2009年8月21日提交的美国临时申请系列No. 61/235,912的利 益。 专利
本专利技术设及禽副粘病毒（APMV)和APMV序列。本专利技术设及用于插入和表达外源基 因W用作保护免受多种病原体侵害的安全免疫媒介物的病毒载体。其设及在反向遗传学体 系中用于产生活减毒疫苗的载体疫苗。其还设及可用于在体外表达载体中产生亚单位或用 作待被整合入病毒或质粒类型体内表达载体的序列的多核巧酸。 本专利技术设及未修饰的和经修饰的APMV病毒，其制备和使用方法W及某些DNA和蛋 白质序列。更具体地，本专利技术设及其中病毒的天然基因组已被改变的APMV病毒广APMV突 变体"或"重组APMV")和设及制备及使用此类APMV变体或重组APMV的方法。[000引专利技术背景 病毒载体疫苗代表疫苗开发的最快速成长领域之一。主要的全球感染性疾病HIV、 肺结核（tuberculosis)和追疾的许多处于临床开发中的疫苗是基于病毒载体。动物的病 毒载体疫苗已上市，例如用于陪伴动物（companionanimal)和家禽的禽痘病毒疫苗、用于 家禽的禽瘤疹病毒载体疫苗和用于野生动物的痘苗病毒载体疫苗。但其它家畜类载体疫 苗处于开发中。病毒载体疫苗的有利方面是它们可被安全地施用，运是由于使用已被大大 减毒并且其本身在动物中不引发疾病的载体主链所致。目前使用的病毒载体的不利方面 是母传抗体或因W往感染而获得的抗体的存在。此类抗体将中和载体病毒，从而减少载体 疫苗的成功。载体疫苗开发的一个主要动力是最先在亚洲、随后在欧洲和非洲发生的高致 病性流感病毒册N1的出现。已开发了几种载体疫苗候选物，包括禽痘病毒（Taylor等人， 1988)、痘苗病毒（化ambers等人，1988)、劳氏肉瘤病毒化unt等人，1988)、腺病毒（Tang等 人，2002,Gao等人，2006)，委内瑞拉马脑炎病毒（Schultz-化er巧等人，2000)、新城疫病 毒扣S6, 719, 979,Veits等人，2006,Swayne等人，2002,Park等人，2006)、传染性喉气管炎 的瘤疹病毒（Veits等人，2003)，火鸡的瘤疹病毒值arteil等人，1995)W及基于腺病毒 的载体疫苗化oelscher等人，2008,Toro等人，2007)。已在首次用于实验的鸟中测试了运 些载体疫苗的功效，但到目前为止还没有公布关于运些载体疫苗在对所述病毒载体和/或 由所述插入物编码的蛋白质有预存免疫的鸟类中的功效的报导。 副粘液病毒科包括人（麻疹，腮腺炎，副流感和呼吸道合胞病毒）和动物病原体 (新城疫病毒和牛攝病毒），所述病毒对公共卫生W及全球经济造成重大影响化amb等人， 2007)。该病毒科的成员定义为具有单组分（monopartite)反义单链RNA基因组。副粘液 病毒科由两个亚科即副粘病毒亚科（Paramyxovirinae)和肺炎病毒亚科（Pneumovirinae) 组成。根据最近的重新分类，副粘病毒亚科包括5个属即麻疹病毒属（Morbillivirus)、亨 尼波病毒属化enipavirus)、Rubulavirus、呼吸系病毒属巧espirovirus)和Avulavirus， 而肺炎病毒亚科包括肺炎病毒属（Pneumovirus)和偏肺病毒属（Metapneumovirus) (Mayo， 2002)。禽副粘病毒（APMV)被分类在腮腺炎病毒属中，包括已使用血凝抑制化I)试验 (Alexander, 1988)确定的9个抗原上不同的血清型。在运9个血清型中，属于APMV-1亚 型的分离株可引起商业家禽的灾难性疾病，并且被分类为速发型新城疫病毒（NDV)。NDV 的更溫和形式被称为中发型和缓发型分离株，其中后一种形式在家禽中大多无症状。属于 APMV-2、3、6和7的分离株也与家禽的疾病相关。具体地，APMV-2和3的分离株引起的感 染可引发轻度呼吸性疾病和蛋质量和数量上的问题度ankowski等人，1981 ;Redmann等人， 1991 ;Tumova等人，1979 ;Zhang等人，2007)。已知APMV-6和7的分离株感染火鸡、鸭和候 鸟并且可诱导呼吸性疾病，所述疾病可牵设继发感染（Saif等人，1997;化ortridge等人， 1980)。在另一方面，已从鸭、水禽和其它野生鸟类分离了APMV-4、5、8和9的分离株，但所 述鸟类在病毒感染后极少显示临床症状（Alexander等人，1983 ;Capua等人，2004 ;Gou曲 等人，1984;Maldonado等人，1995 ;化ortridge等人，1980)。 几个NDV分离株的完整基因组序列已被确定并且用于阐释NDV毒力的各种决定 簇（deLeeuw等人，1999;K;rishnamu;rthy等人，1998;Zou等人，2005)。在最近两年中， 除APMV1外的几种APMV序列已被公布，例如APMV-2的GenBank登录号抓338414、APMV-3 的EU403085、APMV-4 的FJ177514、APMV-6 的EU622637、APMV-7 的FJ231524、APMV-8 的 FJ215863、FJ215864和FJ619036、APMV-9的抓910942。除了序列信息外，关于致病因子知 之甚少。APMV2-9的分离株大部分是从候鸟分离的。有趣地，鲜见用此类分离株对鸡进行 实验性感染的报导（Saif等人，1997)。由于运些APMV在野生鸟类中广泛传播，并且在某 些情况下已从有时引起它们死亡（Saif等人，1997 ;Shihmante;r等人，1998 ;Shihmante;r等 人，1998)的商业鸟群中狂hang等人，2007)分离到所述APMV，因此需要了解关于它们在禽 类中的毒力的知识。 大多数APMV分离株引起相对轻度的疾病，所述疾病在伴随细菌或病毒感染存 在时可恶化，运可能导致经济影响。具体地，APMV-2最早在1956年作为二级病原体从南 加利福尼亚的受急性喉气管炎影响的鸡中分离到度ankowski等人，1960)。由于该血清 型的许多株已从几个鸟类物种分离到，运表明APMV-2在世界上被广泛传播（Amlral等 人，1984;&radshaw等人，1979;Fleury等人，1979 ;Goo血an等人，1988;Lang等人，1975 ; Lipkind等人，1982;Lipkind等人，1979;Zhang等人，2006)。Bankowski等人报导 了产蛋 雌火鸡对APMV-2的自然W及人工暴露造成了解化率和家禽产率（poultry^eld)的显 著下降度ankowski等人，1981)。APMV-4分离的最初实例是从美国密西西比候鸟迁栖所 经路径上的猎人杀死的野生鸭（Webster等人，1976)W及在家禽的流行性感冒监测分析 (influenzasurveillanceprogramsofpoultry)期间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物或疫苗，其包含(i)重组APMV病毒载体和(ii)药用或兽医学上可接受的载体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M·巴布洛特，T·梅巴特森，J·普利特查德，E·蒙德特，
申请(专利权)人：梅里亚有限公司，佐治亚州大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US