本发明专利技术包括包含具有免疫原性和保护性性质的嵌合KSAC蛋白的疫苗或组合物，及使用方法，其包括给动物施用其抗原性KSAC蛋白，以保护动物。本发明专利技术也包括自从原核生物或真核生物产生的包含体制造及产生可溶性，解聚的，再折叠的或有活性的蛋白的方法。
【技术实现步骤摘要】
嵌合KSAC蛋白的表达和由高压产生可溶性蛋白的方法本分案申请是基于申请号为201380053720.8、申请日为2013年8月30日、申请人为“梅里亚有限公司”、专利技术名称为“嵌合KSAC蛋白的表达和由高压产生可溶性蛋白的方法”的原始中国专利申请(原国际申请号为PCT/US2013/057430)的分案申请。【相关申请的交叉引用】本申请要求2012年8月30日提交的US临时申请系列No.61/694,968和2013年6月3日提交的US临时申请系列No.61/830,425的权利。
本专利技术涉及对抗动物或人中的利什曼原虫属(Leishmania)感染的制剂。特别是，本专利技术提供包含嵌合利什曼原虫属(Leishmania)抗原的药物组合物和针对利什曼原虫属(Leishmania)疫苗接种的方法。本专利技术也涉及使用高压产生可溶性或解聚的蛋白的方法。
技术介绍
利什曼病是影响人，犬科动物及更少程度，猫科动物的主要和严重的寄生虫疾病。利什曼原虫属(Leishmania)和圭亚那亚属基于分子，生物化学和免疫学相似性分组进物种和亚种综合。有由它们的临床表现命名的几种形式的疾病，所述临床表现包括皮肤，粘膜皮肤或内脏利什曼病。各这些形式的疾病由在世界的不同地区发现的不同物种的白蛉导致。人的皮肤利什曼病在旧大陆与埃塞俄比亚利什曼原虫(L.aethiopica)，硕大利什曼原虫(L.major)及热带利什曼原虫(L.tropica)复合的成员相关，在新大陆与墨西哥利什曼原虫(L.mexicana)及巴西利什曼原虫(L.braziliensis)复合相关。内脏利什曼病在旧大陆地区由杜氏利什曼原虫(L.donovani)及婴儿利什曼原虫(L.infantum)导致，而恰加斯利什曼原虫(L.chagasi)主要负责新大陆的内脏疾病。因为婴儿利什曼原虫(L.infantum)是与犬科动物利什曼病关联的主要病因，狗中的感染常常被认为是内脏感染，即使它们趋向于导致内脏和皮肤疾病。内脏利什曼病的病因是原生动物寄生虫，且属于杜氏利什曼原虫(Leishmaniadonovani)复合。此寄生虫广泛分布于南欧洲，非洲，亚洲，南美洲和中美洲的温带和亚热带国家(DesjeuxP.etal.,1984,Nucl.AcidsRes.,12:387-395)。杜氏利什曼原虫婴儿亚种(Leishmaniadonovaniinfantum)(婴儿利什曼原虫(L.infantum))在南欧洲，非洲和亚洲负责猫科动物和犬科动物疾病。在南美洲和中美洲，病因是杜氏利什曼原虫恰加斯亚种(Leishmaniadonovanichagasi)(恰加斯利什曼原虫(L.chagasi))，其与婴儿利什曼原虫(L.infantum)紧密相关。在人中，病因是杜氏利什曼原虫杜氏亚种(Leishmaniadonovanidonovani)(杜氏利什曼原虫(L.donovani))，其也与婴儿利什曼原虫(L.infantum)及恰加斯利什曼原虫(L.chagasi)相关。利什曼病是缓慢进行性疾病，其可经时达7年而变得临床上明显(McConkeySEetal.,2002,CanineVetJ43:607-609)。甚至然后，迹象常是非特异性和罕考虑利什曼原虫属(Leishmania)的诊断。狗最通常被在人中负责亲内脏疾病的婴儿利什曼原虫(L.infantum)(杜氏利什曼原虫(L.donovani)复合)感染。但是，达90％的感染的狗呈现内脏和皮肤损伤(SlappendelRJetal.,1998,In:GreeneCE:InfectiousDiseasesoftheDogandCat,pp450-458)。另一方面，许多狗对此寄生虫呈现天然地抗性，和可保持无症状，尽管知道感染。(GrosjeanNL等人,2002,VetRec150:241-244)。估计在病区的仅10％的狗实际上发展临床疾病(LindsayDS等人,2002,CompendContEducPractVet24:304-312)。此临床疾病的更低发生率归因于特定狗的遗传倾向，以引发相比体液应答更保护性的细胞-介导的免疫应答(LindsayDS等人,McConkeySE等人,SlappendelRJ,等人)。此外，已报道达20％的感染的狗可引发充足的免疫应答和自临床病自发恢复(McConkeySE等人)。在引发体液应答的动物中，IgG1呈现与临床疾病关联，而无症状狗具有更高IgG2抗体水平(Lindsay等人)。利什曼病的一些更频繁地报道的临床体征包括倦怠，疲乏和与厌食症偶联的运动不耐性和最终以消耗病达到极点的体重减轻(McConkeySE等人)。这些迹象可伴随或可不伴随发热，局部或一般化的淋巴结病(90％)和/或肝脾肿大(GrosjeanNL等人,2003,JAmVetMedAssoc222:603-606；LindsayDS等人,McConkeySE等人；Martínez-SubielaS等人,2002,VetRec150:241-244)。关节牵连也是相当常见的，和可表现为伴随肿胀的关节的跛或简单表现为僵步态。欠常见的发现包括眼损伤(<5％)，慢性腹泻(30％)和被称为甲弯曲的长，变形的脆甲(20％)(LindsayDS等人,SlappendelRJ等人)。皮肤损伤存在于达89％的感染的狗，有或无内脏涉及的明显的迹象。皮肤利什曼病损伤可在身体的任何部位发生，但最常见的部位是暴露于环境的那些及因此更敏感于白蛉叮咬。初始丘疹快速引起溃疡。如果不立即治疗，内脏利什曼病一向是致死的。内脏利什曼病影响内部身体器官，特别脾脏和肝。狗被认为是利什曼病的主要携带者。疾病特征在于在少于50％的感染的动物中发生的内脏-皮肤迹象的慢性进化(LanotteG.等人,1979,Ann.parasitol.hum.comp.54:277-95)。具有可检测的抗体的无症状和有症状狗可为感染性的(MolinaR.etal.,1994,Trans.R.Soc.Med.Hyg.88:491-3；CourtenayO.etal.,2002,J.Infect.Dis.,186:1314-20)。猫也可为原生动物寄生虫的携带者，及由此被认为是第二潜在携带者。由于许多因素，狗中利什曼病的治疗选项和对治疗的应答充其量也被限制。由于一些未定义的原因，相比在人中，在狗中内脏利什曼病更难治疗。无治疗选项对于清除寄生虫感染100％有效，和临床疾病随着停止治疗而常常再现(LindsayDS等人)。在病区，最常见的治疗方案曾是别嘌醇与五价锑诸如亚锑酸葡甲胺或葡萄糖酸锑钠的组合(LindsayDS等人,SlappendelRJ等人)。但是，近年来此流程被冷落，由于增加的寄生虫对药物的抗性以及与这些化合物关联的不利的副作用(LindsayDS等人)。为了进一步限定治疗选项，(葡萄糖酸锑钠)是在美国仅可利用的锑，和其分布由位于Atlanta，GA的疾病控制和预防中心(CDC)调控(LindsayDS等人)。其他调查寻求鉴定通过，例如，施用抗原性融合多肽预防和治疗利什曼病的方法(见US2009/0291099，其通过引用以其整体在本文合并)。已本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.组合物，其包含由利什曼原虫抗原动体目原生动物膜蛋白11(KMP11)、甾醇甲基转移酶(SMT)、A2和半胱氨酸蛋白酶(CP)组成的融合蛋白。
【技术特征摘要】
2012.08.30 US 61/694,968;2013.06.03 US 61/830,4251.组合物，其包含由利什曼原虫抗原动体目原生动物膜蛋白11(KMP11)、甾醇甲基转移酶(SMT)、A2和半胱氨酸蛋白酶(CP)组成的融合蛋白。2.权利要求1的组合物，其中所述融合蛋白与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性。3.权利要求1的组合物，其中所述融合蛋白由与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性的多核苷酸编码。4.权利要求1～3之任一项的组合物，其中所述融合蛋白基本上溶解于水溶液或基本上再折叠。5.权利要求1～3之任一项的组合物，其中所述融合蛋白由高压溶解或再折叠。6.权利要求5的组合物，其中所述高压是约1000巴～约5000巴。7.权利要求6的组合物，其中所述高压施加至少20小时。8.权利要求1～7之任一项的组合物，其中所述融合蛋白自大肠埃希氏菌(E.coli)包含体溶解或再折叠。9.权利要求8的组合物，其中所述大肠埃希氏菌(E.coli)包含体在不包含脲或包含低脲的缓冲剂中制备。10.权利要求8的组合物，其中所述大肠埃希氏菌(E.coli)包含体在包含二硫代苏糖醇(DTT)的缓冲剂中制备。11.权利要求9或10的组合物，其中所述大肠埃希氏菌(E.coli)包含体还经历约1000巴～约5000巴的高压。12.权利要求11的组合物，其中所述大肠埃希氏菌(E.coli)包含体在高压下处理约20小时～约100小时。13.权利要求12的组合物，其中所述大肠埃希氏菌(E.coli)包含体以约83巴/hr～125巴/hr的速度减压。14.权利要求5～13之任一项的组合物，其中所述高压逐步增加。15.治疗对利什曼原虫感染敏感的动物的方法，其包括给...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·B·菲舍，N·P·Y·卡尔布莱克，F·卢克斯，
申请(专利权)人：梅里亚有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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