一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊制造技术

本发明专利技术旨在提供一种猪源抗菌肽PMAP‑36缓释胶囊，其通过对猪源抗菌肽PMAP‑36进行改造，获得了一种抗菌活性更高、安全性更好的抗菌肽产品，通过微胶囊技术的运用，制备得到一种猪源抗菌肽PMAP‑36缓释胶囊，该缓释胶囊具有稳定性好、抗菌活性更长久的优点。

A swine antimicrobial peptide PMAP-36 sustained release capsule *

【技术实现步骤摘要】
一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊
：本专利技术涉及生物
，具体涉及一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊。
技术介绍
：我国是世界上最大的抗生素生产和使用国，也是抗生素滥用和细菌耐药性的重灾区。抗生素滥用，特别是畜牧业领域尤其严重。畜牧业养殖户之所以喜欢使用抗生素,原因在于抗生素不仅可以防病治病,而且还能促进动物生长、提高产量，许多养殖户普遍将饲用抗生素添加到饲料中，当做保健品来促生长。而这导致的“超级细菌”风险、环境污染加重等问题，正在挑战国人健康底线，兽用抗生素所导致的细菌抗药性和所产生的“超级细菌”，不会局限于禽畜,也会影响到人类。数据显示，全国2013年使用的16.2万吨抗生素中，兽用52%，人用48%，一年超过5万吨抗生素排放进水土环境中。2014年以来，抗生素使用量仍在上升，其中绝大部分是作为饲料添加剂而不是治疗疾病使用。抗生素由于具有药物残留及细菌耐药性问题，因此迫切需要发现一种绿色、无污染和无细菌耐药性的抗生素替代物。抗菌肽（antimicrobialpeptide）是一种具广谱抗菌、抗病毒甚至抗寄生虫活性的阳离子短肽，是生物体内广泛存在一种具有抗菌作用的活性多肽，是生物非特异性防御系统的免疫应答产物，具有广谱抗菌活性，可以抑制多种细菌或真菌的生长。抗菌肽由于其主要通过物理渗透作用于细菌胞膜而产生抑菌或者杀菌作用，而细菌等微生物很难改变其自身磷脂双分子层的胞膜结构，因此使得抗微生物肽产生耐药性的几率大大降低。并且大部分抗菌肽具有热稳定性高的特点，所以抗菌肽越来越引起人们的重视。抗菌肽广泛存在于微生物以及动植物体内，目前已发现的抗菌肽有1800多种。至今在鱼类中鉴定出的抗菌肽包括hepcidin，defensins，pleurocidin，piscidin，moronecidin，misgurain，pardaxin，parasin，LEAP-2和NK-lysin等数十种。抗菌肽的研究已成为基因工程和药物开发等领域的研究热点，具有极为广阔的市场应用前景。专利技术专利申请CN201510084023.X公开了一种抗菌肽C-BF在制备防治仔猪断奶应激药物中的应用；抗菌肽C-BF能改善肠道形态，增加绒毛高度，缓解肠道炎症，提高断奶仔猪生长性能，减少腹泻率；抗菌肽C-BF通过腹腔注射给药。专利技术专利申请CN201410669038.8通过生物软件对猪源抗菌肽PR-39的氨基酸序列进行空间结构分析，将其39个氨基酸中的3处氨基酸进行突变，获得一种新型猪源抗菌肽PR-39突变体，使其抗菌效力获得显著提高。在此基础上，选用毕赤酵母偏爱密码子，人工合成新型猪源抗菌肽PR-39突变体基因，克隆于毕赤酵母中表达，获得新型抗菌肽重组酵母菌株，并将发酵规模放大到发酵罐水平，实现抗菌肽产品的高密度发酵和高效表达。发酵液进一步纯化后可制成粉剂、液体等抗菌肽制剂用于畜禽疾病的预防和治疗。专利技术专利申请CN200710176477.5公开了一种提取猪血抗菌肽的方法，该方法包括以下步骤：1)将猪血粉溶入缓冲液中，然后在混合液中加入木瓜蛋白酶进行酶解，调整酶解液的pH为3.5～4.5；2)将氯仿和亚硫酸氢钠加入到所述酶解液中进行脱色，然后调整脱色后酶解液的pH值至6.0～7.0，成为猪血抗菌肽的粗提物。为了得到猪血抗菌肽的精制品，对所述粗提物进行以下纯化步骤：1)冷冻干燥所述猪血抗菌肽的粗提物，并将所述粗提物过凝胶型阳离子交换柱，对交换柱进行洗脱，收集洗脱液；2)对所述洗脱液进行真空冷冻干燥，成为猪血抗菌肽。翟少伟（水生生物学报）等研究了饲料中添加抗菌肽Surfactin对吉富罗非鱼肠道健康指标的影响，试验表明,吉富罗非鱼饲料中适量添加抗菌肽Surfactin可增加肠道皱襞高度、调节肠道菌群和提高肠道抗氧化能力而改善肠道健康状态。李伦锋（中国动物传染病学报）等以猪链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、猪致病性大肠杆菌、化脓性链球菌7株猪呼吸道常见菌为实验菌,检测猪小肠抗菌肽对常见的猪呼吸道菌的抑菌效果。结果显示,猪小肠抗菌肽对这7株呼吸道菌均有不同程度的抑菌作用,对化脓性链球菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显,最小抑菌浓度均为49.5μg/mL,对猪链球菌和大肠杆菌也有较为明显的抑菌活性,而对猪支气管败血波氏杆菌的最小抑菌浓度为398μg/mL。尽管抗生肽的研究较多，但是也存在一些问题，例如，抗菌活性低，对于正常细胞如红细胞等也造成溶血作用等等问题。微胶囊(Microcapsule,简称MC)是指一些由天然或人工合成的高分子材料研制成的具有聚合物壁壳的微型容器或包装物,其外形一般呈球型。微胶囊的大小在几微米至几百微米范围内(直径一般为5um-200um),需要通过显微镜方能观察到。微胶囊化就是将固体、液体或气体物质包裹、封存在一种微型囊内而成为一种固体微粒产品的技术。这样做的目的是为了使被包裹的物料与外界不利环境相隔绝,达到最大限度地保护被包裹物料的原有性能、生物活性和色香味,防止各种营养物质和有效成分被破坏。此外,微胶囊具有靶向性,可将被包裹的物料按照设计要求运送到靶器官。
技术实现思路
：基于现有技术中抗菌肽生产和使用中存在的诸多问题，以及丰富抗菌肽种类的考虑，本专利技术旨在提供一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊，其通过对猪源抗菌肽PMAP-36进行改造，获得了一种抗菌活性更高、安全性更好的抗菌肽产品，通过微胶囊技术的运用，制备得到一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊，该缓释胶囊具有稳定性好、抗菌活性更长久的优点。为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊，其特征在于，所述猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊由以下方法制备得到：步骤一：人工合成氨基酸序列为SEQIDNo.1的猪源抗菌肽PMAP-36，并配置称浓度为200μg/mL的猪源抗菌肽PMAP-36溶液；步骤二：将海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液用高速匀质机混匀，形成缓释颗粒，所述高速匀质机以10000转/min的速度进行搅拌混合；步骤三：将步骤一的猪源抗菌肽PMAP-36溶液和步骤二的缓释颗粒一同加入医用混合机中进行包埋，得到抗菌肽微粒，然后对抗菌肽微粒进行β-环糊精包埋，即得到猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊。其中，所述SEQIDNo.1的氨基酸序列为：VGRFRRVRKKSRKRLKKEGKVLKWAPPIVGSAPLGCG。其中步骤二中海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液的质量比为3：5：1。其中，壳聚糖酸溶液中壳聚糖质量体积浓度为1.7％、脱乙酰度为80％，壳聚糖由分子量为3.3×105-4.6×105的高分子量壳聚糖和分子量为0.72×105-1.19×105的低分子量壳聚糖按1∶2的质量比组成；其中氯化钾溶液的浓度为1mol/L；海藻酸钠水溶液中海藻酸钠的质量浓度为2.1％。步骤二中将海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液混合后，调整pH值为6.0。步骤二中壳聚糖酸溶液的溶剂为体积浓度为2％的醋酸溶液；步骤二形成的缓释颗粒的粒径约为20-30nm。步骤三中猪源抗菌肽PMAP-36溶液与缓释颗粒的质量比为1：1。步骤三中β-环糊精包埋按以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪源抗菌肽PMAP‑36缓释胶囊，其特征在于，所述猪源抗菌肽PMAP‑36缓释胶囊由以下方法制备得到：步骤一：人工合成氨基酸序列为SEQ ID No.1的猪源抗菌肽PMAP‑36，并配置称浓度为200μg/mL的猪源抗菌肽PMAP‑36溶液；步骤二：将海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液用高速匀质机混匀，形成缓释颗粒，所述高速匀质机以10000转/min的速度进行搅拌混合；步骤三：将步骤一的猪源抗菌肽PMAP‑36溶液和步骤二的缓释颗粒一同加入医用混合机中进行包埋，得到抗菌肽微粒，然后对抗菌肽微粒进行β‑环糊精包埋，即得到猪源抗菌肽PMAP‑36缓释胶囊。

【技术特征摘要】
1.一种猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊，其特征在于，所述猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊由以下方法制备得到：步骤一：人工合成氨基酸序列为SEQIDNo.1的猪源抗菌肽PMAP-36，并配置称浓度为200μg/mL的猪源抗菌肽PMAP-36溶液；步骤二：将海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液用高速匀质机混匀，形成缓释颗粒，所述高速匀质机以10000转/min的速度进行搅拌混合；步骤三：将步骤一的猪源抗菌肽PMAP-36溶液和步骤二的缓释颗粒一同加入医用混合机中进行包埋，得到抗菌肽微粒，然后对抗菌肽微粒进行β-环糊精包埋，即得到猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊。2.根据权利要求1所述的猪源抗菌肽PMAP-36缓释胶囊，其特征在于，其中步骤二中海藻酸钠水溶液、壳聚糖酸溶液和氯化钾溶液的质量比为3：5：1。3.其中，壳聚糖酸溶液中壳聚糖质量体积浓度为1.7％、脱乙酰度为80％，壳聚糖由分子量为3.3×105-4.6×105的高分子量壳聚糖和分子量为0.72×105-1.19×105的低分子量壳聚糖按1∶2的质量比组成；其中氯化钾溶液的浓度为1mol/L；海藻酸钠水溶液中海藻酸钠的质量浓度为2.1％。4.根据权利要求1所述的猪源抗菌肽P...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，曾和华，陈瑞，张志刚，
申请(专利权)人：九江牧威利元科技中心普通合伙，
类型：发明
国别省市：江西,36