一种毒素Tx4(6‑1)无标签重组蛋白的生产方法技术

本发明专利技术涉及一种毒素Tx4(6‑1)无标签重组蛋白的生产方法，本发明专利技术提供的基因，是如下由序列表中序列1所示的DNA分子；（1）利用序列表1的基因序列，可以实现该毒素基因在大肠杆菌中的可溶性高水平融合表达；（2）融合表达的可溶性蛋白经切割和去除非目标蛋白，得到了与天然成熟Tx4(6‑1)蛋白在氨基酸序列上完全相同的重组蛋白；（3）得到的与天然成熟Tx4(6‑1)蛋白在氨基酸序列上完全相同的重组蛋白具有很强的生物活性。本发明专利技术优化了Tx4(6‑1)的DNA序列，筛选了表达菌株、表达载体且提供了一种高效生产活性Tx4(6‑1)重组蛋白的方法，有利于对该毒素蛋白的抗虫特性和生物安全性开展详细研究，并对相应抗虫植株、高毒力转基因生物杀虫剂的筛选具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种毒素Tx4(6-1)无标签重组蛋白的生产方法
本专利技术涉及利用生物
，具体涉及一种蜘蜘神经毒素Tx4(6-1)的优化编码基因与重组蛋白的生产。
技术介绍
昆虫神经毒素是一类只作用于昆虫神经系统，有毒杀作用的多肽类神经毒素，主要来自于蝎，其次来自蜘蛛。这类对昆虫有专一毒杀作用的毒素的作用位点是各种离子通道，具有高效昆虫专一性的神经毒素主要是作用于钠离子通道的长链神经毒素，这类长链神经毒素一般由60-70个氨基酸组成，有2-4对链内二硫键。不同种属来源的神经毒素在氨基酸的组成上没有明显的保守性，而同种来源神经毒素在一级结构上具有很高的保守性。蜘蛛神经毒素基因TX4(6-1)是一种源自巴西流浪蜘蛛”(Phoneutrianigriventer)的昆虫专一性神经毒素，对农业害虫具有很可的毒杀活性。昆虫神经毒素具有控制农业害虫的重要潜在价值，但天然昆虫神经毒素在毒腺中的含量低且提取困难的，并且往往只能得到非常少量的纯品，这就给我们进一步研究这些毒素的特性带来了很大的困难。因此，通过分离少量昆虫毒素，测定其氨基酸组成，再得到其成熟基因全长，通过体外大量表达，成为研究这些毒素的一条重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种经过优化和筛选的Tx4(6‑1)基因，是由序列表中序列1所示编码具有毒杀昆虫活性蛋白的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.一种经过优化和筛选的Tx4(6-1)基因，是由序列表中序列1所示编码具有毒杀昆虫活性蛋白的DNA分子。2.根据权利要求1所述的DNA分子编码得到的一种由序列表中序列2所示蛋白质分子。3.含有权利要求1所述基因的重组载体和重组菌；所述重组载体具体为将权利要求1所述的基因插入表达载体中，得到表达权利要求2所述蛋白的重组载体。4.一种制备权利要求2所述的蛋白的方法，包括步骤：将含有权利要求1所述的基因的重组表达载体导入宿主细胞，所述宿主细胞优选为大肠杆菌，用于构建所述重组表达载体的原...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洪波，蒋鹰，夏玉先，
申请(专利权)人：怀化学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43