一种猪瘟病毒重组亚单位疫苗的制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种猪瘟病毒重组亚单位疫苗的制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术所提供的重组亚单位疫苗制备方法通常包括以下步骤：将编码猪瘟病毒E2蛋白截短体(TE2)基因克隆到杆状病毒载体pFastBacTM1中，通过转染昆虫细胞sf9获得能够表达TE2蛋白的重组杆状病毒。利用重组杆状病毒感染处于对数生长期的昆虫细胞high five，使TE2蛋白在细胞培养上清中大量表达。最后回收纯化培养上清从而得到大量纯度大于90％的重组蛋白TE2。使用本发明专利技术所提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，从而缩短了蛋白纯化时间，并且避免了回收细胞内蛋白所需消耗的大量时间，简化了疫苗生产步骤。在简化生产步骤的前体下，本发明专利技术提供的TE2重组蛋白具有免疫原性强、安全性高等优点，动物试验也证明该重组蛋白能够有效刺激机体产生高效的体液免疫应答。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于生物疫苗制备

技术介绍
猪瘟在欧洲称为古典猪瘟（Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒 (Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起猪的一种急性、热性、接触性传染病。以发病 急，高热稽留和小血管壁变性引起广泛出血、梗塞和坏死等病变为特征，家养和野生猪是其 唯一的天然宿主。世界动物卫生组织（OIE)将其定为A类传染病，我国《动物防疫法》将其 列为一类传染病。猪瘟是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。 猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属成员，为单链线状RNA病毒。该病毒与同属的牛 病毒性腹泻病毒之间有共同抗原性。病毒粒子略呈圆形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有 脆弱的纤突结构。目前认为猪瘟病毒仍只有一种血清型，但是病毒株的毒力有强、中、弱之 分。CSFV基因组长约12. 5kb，仅含有1个大的开放性阅读框（ORF)，此ORF编码约4000个 氨基酸残基分子量约438ku的多聚蛋白，在病毒与宿主细胞蛋白酶的作用下将其加工为12 种成熟蛋白，依次为，。，C，E nis, El，E2, p7, NS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪瘟病毒重组亚单位疫苗的制备方法，其基本特征包括下述步骤：1)猪瘟病毒E2的截短体蛋白TE2其特征在于如(a)或(b)的蛋白质：(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸组成的蛋白质；(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个氨基酸或几个氨基酸且具有猪瘟病毒E2蛋白抗原性的由(a)衍生的蛋白质。2)将TE2蛋白编码基因克隆到杆状病毒表达系统中得到重组杆状病毒质粒Bacmid‑KSPTE2。3)转染sf9细胞得到重组杆状病毒Bv‑KSPTE2，用昆虫细胞扩大培养后回收纯化得到TE2蛋白。4)将TE2蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后得到猪瘟病毒重组亚单位疫苗。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宣春玲，钱泓，吴有强，吴素芳，吕朋，查银河，张屹峰，汪正亮，
申请(专利权)人：浙江海隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33