本发明专利技术属于生物疫苗的设计与研制技术领域，特别是涉及一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，该方法包括下述步骤：步骤1：猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4∶1~3的配比成抗原液，备用；步骤2：将步骤1中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比1∶1制成抗原液与佐剂的混合液，采用均质机，在12000-15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10-15min，即制成含有TH多肽的新型猪瘟疫苗。本发明专利技术主要用于猪瘟病毒预防与免疫。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于生物疫苗的设计与研制
，特别是涉及一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，该方法包括下述步骤：步骤1：猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4∶1~3的配比成抗原液，备用；步骤2：将步骤1中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比1∶1制成抗原液与佐剂的混合液，采用均质机，在12000-15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10-15min，即制成含有TH多肽的新型猪瘟疫苗。本专利技术主要用于猪瘟病毒预防与免疫。【专利说明】一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法
本专利技术属于生物疫苗的设计与研制
，特别是涉及一种含有TH多肽的新 型猪瘟疫苗的制备方法。
技术介绍
目前猪瘟疫苗为猪瘟兔化弱毒疫苗和猪瘟病毒E2重组杆状病毒灭活疫苗。猪瘟 兔化弱毒疫苗具有良好的免疫原性，但是在临床使用过程中不能区分是免疫疫苗产生的抗 体，还是由感染野毒产生的抗体，不能够鉴别诊断，净化猪瘟病毒；猪瘟病毒E2重组杆状病 毒灭活疫苗亦具有良好的免疫原性，免疫猪后可通过抗体检测，来区分疫苗免疫产生的抗 体和野毒感染产生的抗体，可用于鉴别诊断；但猪瘟病毒E2重组杆状病毒灭活疫苗，免疫 猪后只产生体液免疫，不产生细胞免疫，而TH多肽可刺激猪产生细胞免疫。 文献检索披露：生产猪瘟病毒E2重组杆状病毒灭活疫苗的SOP，猪瘟病毒E2重组 杆状病毒感染昆虫细胞后，表达猪瘟病毒E2蛋白，经猪瘟病毒E2蛋白的定量、灭活、乳化制 成油包水剂型的疫苗，当猪瘟病毒E2蛋白含量多20 y g时，免疫猪后可产生良好的保护；TH 多肽在口蹄疫合成肽疫苗中添加后，可显著提高疫苗的效力。国内尚无机构和学者在猪瘟 病毒E2蛋白中添加TH多肽进行疫苗的研制。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：研制的新型猪瘟病毒E2蛋白添加TH多肽疫苗，在不减少或减 少猪瘟病毒E2蛋白使用量的情况下，添加TH多肽使猪只产生细胞免疫，以提高或保持猪瘟 病毒E2灭活疫苗的效果，以期为今后猪瘟病毒的预防和净化提供有力的物质保障。 本专利技术的技术方案如下：一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，该方法包 括下述步骤：步骤1:猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1?4 : 1?3的配比成抗原液，备 用；步骤2:将步骤1中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比I : 1制成抗原液与佐剂的 混合液，采用均质机，在12000-15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10-15min，即制成 含有TH多肽的新型猪瘟疫苗；其中，步骤1中所述的猪瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所 示，按照常规公知的生物学方法制备而成的；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常规 公知的生物学方法制备而成；步骤2中所述的563VG佐剂为法国赛比克公司生产市售的产 品。 本专利技术的有益效果：取猪瘟抗体为阴性的健康猪65头，其中60头分别免疫不同配 比的含有TH多肽的猪瘟病毒E2蛋白疫苗，另5头为对照组，免疫组每头耳后颈部肌肉注射 猪瘟病毒E2重组杆状病毒灭活疫苗2ml，一免后21d以相同剂量和方式进行二免，二免后 14d，连同对照猪5头，各注射猪瘟病毒石门系血毒I. Oml/头（含IO5 tlMLD)，观察16d，对照 猪应全部发病，且至少死亡3头，免疫猪应全部健活或稍有体温反应，但无猪瘟临床症状， 证明了猪瘟病毒E2蛋白添加TH多肽疫苗具有良好的免疫效力，可减少E2蛋白的添加量， 降低生产成本，同时为今后猪瘟病毒的净化提供物质保障。 【具体实施方式】 下面将结合实施例对专利技术作进一步说明。 实施例1、一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，该方法包括下述步骤：步骤1 : 猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1?4 : 1?3的配比成抗原液，备用；步骤2 :将步骤1 中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比I : 1制成抗原液与佐剂的混合液，采用均质机， 在12000-15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10-15min，即制成含有TH多肽的新型猪 瘟疫苗；其中，步骤1中所述的猪瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所示，按照常规公知的生物 学方法制备而成的；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常规公知的生物学方法制备 而成；步骤2中所述的563VG佐剂为法国赛比克公司生产市售的产品。 具体实践验证：猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽的配比：分别按20 y g+0 y g/ml、 20 y g+5 y g/ml、20 y g+10 y g/ml、20 y g+15 y g/ml、15 y g+0 yg/ml、15ii g+5 y g/ml、 15 y g+10 y g/ml、15 y g+15 y g/ml、10 y g+0 yg/ml、10ii g+5 y g/ml、10 y g+10 y g/ml、 10 y g+15 y g/ml进行配置成抗原液；然后将配比好的抗原液与佐剂按质量比I: I混合；首 先将563VG佐剂倒入500ml烧杯中，在乳化机中以3000rpm低速搅拌1分钟，然后加入配置 好的与佐剂等量的抗原，再把乳化机转速提高至12000rpm，搅拌时间为lOmin，即制成含有 TH多肽的猪瘟病毒E2蛋白疫苗； 1、疫苗的效力检验：1. 1、效力检验用猪的筛选。采集4?5周龄健康仔猪血液，分 离血清，按如下方法测定猪是否为猪瘟抗体阴性。首先将猪瘟病毒兔化弱毒（抗原）用灭菌 生理盐水稀释成100个兔MID/ml，作为工作抗原（如果抗原对兔的MID为10_ 5_°/ml，则将抗 原稀释成1000倍使用）。然后将被检猪血清分别用灭菌生理盐水作2倍稀释，与含有100 个兔MID/ml的工作抗原等量混合，摇匀后，置10-15°C中和2小时，其间振摇2-3次。同时 设含有相同工作抗原量加等量生理盐水（不加血清）的对照组，与被检组在同样条件下处 理。中和完毕，被检组各注射兔1-2只，对照组注射兔2只，每只兔耳静脉注射I. 0ml，观察 体温反应，并判定结果。体温反应标准同《猪瘟活疫苗（传代细胞源）质量标准》中"兔的 体温反应标准"。当对照组2只兔均呈定型热反应（++)，或1只兔呈定型热反应（++)、另一 只兔呈轻热反应（+)时，方能判定结果。被检组如果用1只兔，须呈定型热反应；如果用2 只兔，每只兔应呈定型热或轻热反应，被检血清判为阴性。 1. 2、效力检验用猪的分组及免疫，见表1。 表1效力检验用猪的分组及免疫 【权利要求】1. 一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，其特征在于：该方法包括下述步骤： 步骤1 :猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4 : 1~3的配比成抗原液，备用； 步骤2 :将步骤1中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比1 : 1制成抗原液与佐剂 的混合液，采用均质机，在12000-15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10-15min，即制 成含有TH多肽的新型猪瘟疫苗； 其中，步骤1中所述的猪瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO. 1所示，按照常规公知的生物学 方法制备而成；所述的TH多肽如SEQ ID NO. 2所示，按照常规公知的生物学方法制本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含有TH多肽的新型猪瘟疫苗的制备方法，其特征在于：该方法包括下述步骤： 步骤1：猪瘟病毒E2蛋白和TH多肽按照1~4∶1~3的配比成抗原液，备用；步骤2：将步骤1中制备好的抗原液与563VG佐剂按质量比1∶1制成抗原液与佐剂的混合液，采用均质机，在12000‑15000rpm条件下，将混合液均质，时间为10‑15min，即制成含有TH多肽的新型猪瘟疫苗；其中，步骤1中所述的猪瘟病毒E2蛋白如SEQ ID NO.1所示，按照常规公知的生物学方法制备而成；所述的TH多肽如SEQ ID NO.2所示，按照常规公知的生物学方法制备而成；步骤2中所述的563VG佐剂为法国赛比克公司生产市售的产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李俊辉，赵毅，
申请(专利权)人：新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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