本发明专利技术提供了缺乏以下基因的功能性形式的减毒的非洲猪瘟(ASF)病毒：多基因家族360基因9L，10L，11L，12L，13L和14L；和多基因家族505基因1R，2R，3R和4R。本发明专利技术还提供了缺乏DP 148R基因的功能性形式的减毒非洲猪瘟(ASF)病毒。本发明专利技术还提供了包含该减毒病毒的疫苗及其用于预防ASF的用途。此外，本发明专利技术涉及减毒ASF病毒的鼻内施用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及减毒的非洲猪瘟病毒。工程化病毒保护猪免受随后用毒性病毒的攻击。本专利技术还涉及此类减毒病毒用于治疗和/或预防非洲猪瘟的用途。本专利技术还涉及减毒非洲猪瘟病毒的鼻内施用。专利技术背景非洲猪瘟(ASF)非洲猪瘟是由双链DNA病毒，非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的家猪的毁灭性出血性疾病。ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)家族的唯一成员，并且主要在细胞的细胞质中复制。ASFV的强毒株可在感染的约5-14天内杀死家猪，其中死亡率接近100％。ASFV可以在疣猪(Phacochoerussp.)，南非野猪(bushpigs)(Potamocherussp.)和蜱属物种(Ornithodorosspecies)的软蜱中感染和复制，但是在这些物种中几乎没有观察到任何临床症状(clinicalsigns)和可以建立长期持续的感染。该疾病目前流行于许多撒哈拉以南的国家和欧洲的撒丁岛。在2007年引入反高加索地区的格鲁吉亚之后，ASFV已广泛传播到包括俄罗斯联邦在内的邻国。报道了在2012年首次爆发于乌克兰，和2013年首次爆发于白俄罗斯。在2014年，报道了在乌克兰的猪中的进一步爆发并在立陶宛和波兰的野猪中检测到。目前没有用于ASF的治疗。在非洲以外的国家已经在国家基础上尝试，通过限制引入猪和猪肉产品，在向猪喂食之前在许可下强制煮沸废物动物产品以及在诊断出疾病时应用屠宰政策进行预防。非洲的预防是基于保持疣猪和被疣猪污染的材料远离畜群的措施。到目前为止，还没有开发出有效的减毒或灭活疫苗(参见http://www.thepigsite.com/pighealth/article/441/african-swine-fever-asf)。因此，需要改进的措施来控制ASFV感染和防止疾病的传播。非洲猪瘟病毒(ASFV)ASFV基因组编码位于左手35kb或右手15kb末端可变区内的5个多基因家族(MGF100，MGF110，MGF360和MGF505/530)。MGF构成ASFV基因组的总编码容量(codingcapacity)的17％至25％。它们缺乏与其他已知基因的相似性。尽管单个MGF基因的功能是未知的，但已经显示MGF360和505家族编码对于涉及促进感染细胞存活和抑制I型干扰素反应的宿主范围功能(hostrangefunction)所必需的基因。OURT88/3分离株OURT88/3是来自葡萄牙的ASFV的非致病性分离株。先前用ASFVOURT88/3的感染已经显示赋予针对用相关毒性病毒攻击的保护(Boinas等(2004)JGenVirol85:2177-2187；Oura等(2005)J.Gen.Virol.86：2445-2450)。已经证明，由OURT88/3病毒株诱导的保护需要CD8+T细胞，因为抗体介导的CD8+T细胞的耗竭(depletion)消除了保护(Oura等人，2005，如上)。使用NIH近交猪系cc和dd进行了研究。在这些研究中，用OURT88/3免疫3头dd猪的对照组和6头dd猪的对照组。在这些实验的第一个中，在OURT88/3免疫后，一头dd猪形成了log102-3TCID50/ml的短暂低病毒血症，但没有发烧或疾病的临床迹象。观察到用OURT88/3免疫的6头cc近交猪中的3头在用OURT88/3分离株致死性攻击后不受保护，而在所有dd猪中诱导了保护性反应。这些结果表明猪的遗传背景影响对OURT88/3接种的反应。在随后的实验中，用OURT88/3免疫5头dd和5头cc猪，并用OURT88/1攻击(Takamatsu等，2003未发表的结果)。这证实了在所有dd猪中诱导了保护性反应，但在用OURT88/3免疫后并未在所有cc猪中诱导保护性反应，并且在一些cc猪中诱导了包括短暂性发热，关节肿胀和跛足在内的不良反应。在法国使用SPF猪的Anses畜群(Ansesherd)进行了随后的实验。在这些猪中，与用cc猪的观察类似，一些猪形成了不良反应，包括用OURT88/3免疫后的短暂发热，关节肿胀和跛足(未公开的结果)。虽然OURT88/3已经显示在某些动物中诱导保护性免疫应答，但是这种效果似乎不是普遍的。用OURT88/3免疫似乎在保护一些猪免受随后的攻击方面是无效的。其还与一些猪中诱导不良免疫应答相关，例如关节肿胀。因此，需要具有改善的功效和安全谱(safetyprofiles)的替代ASFV疫苗候选物。附图简述图1-显示产生具有五个MGF360基因10L，11L，12L，13L，14L缺失和三个MGF505基因1R，2R，3R缺失的重组病毒BeninΔMGF的示意图。通过在野生型Benin97/1基因组上的MGF360基因9L和MGF5054R基因与转移载体质粒pΔMGFGUS之间同源重组，导致8个MGF基因缺失的和GUS的插入，来产生重组病毒BeninΔMGF。图2-通过PCR分析基因组病毒DNA基因缺失和插入。从野生型Benin97/1和重组病毒BeninΔMGF提取病毒DNA。通过PCR扩增特异性片段，并在1％琼脂糖TAE凝胶上分析产物。以下引物组用于泳道1(BeninD8F和BeninD8R)，泳道2和3(BeninD8F和RGUS)，泳道4和5(BeninD8INTF和BeninD8INT)。泳道0含有DNA梯度(DNAladder)。图3-与野生型Benin97/1的公开序列相比，重组病毒BeninΔMGF在缺失/插入位点处的DNA序列分析。从Benin△MGF感染的细胞中分离病毒gDNA，并用引物9LF对缺失/插入的左侧进行测序，用引物4RR对右侧进行测序。Benin△MGF的左侧序列显示序列vp72启动子，loxP和5'GUS的插入，8个MGF基因的缺失，以及MGF3609L基因的前五个核苷酸(包括ATG起始密码子)的缺失。Benin△MGF的右侧序列显示3'GUS基因的插入和MGF5054R基因的前七个核苷酸(包括ATG起始密码子)的缺失。图4-Benin97/1和重组BeninΔMGF病毒的复制动力学。用亲本BeninΔ97/1或重组BeninΔMGF病毒以高感染复数感染猪骨髓巨噬细胞。在感染后不同小时(如x轴所示)收获总病毒，并在96孔板上通过分析猪骨髓巨噬细胞培养物上的血液吸收来滴定感染性病毒。病毒滴度(HAD50/ml)是三个单独观察的平均值。图5-第一次接种后的临床评分。接种后不同天数(x轴)的个体猪的临床评分(y轴)。用104TCID50OURT88/3病毒接种的猪16，18，19和20。用102HAD50的BeninΔMGFA2病毒接种的猪21，22，23。用102HAD50的BeninΔMGFA1病毒接种的猪24和25。由King等2011设计的临床评分系统。图6-第一次接种后的温度。接种后不同天数(x轴)的单个猪的温度(y轴)。用OURT88/3病毒接种的猪16，18，19和20。用BeninΔMGFA2病毒接种的猪21，22，23。用Benin△MGFA1病毒接种的猪24和25。图7-IFN-γELISPOT测定。用仅培养基，OURT88/3或Beni本文档来自技高网...
【技术保护点】
减毒的非洲猪瘟(ASF)病毒，其缺乏以下基因的功能性形式：多基因家族360基因9L，10L，11L，12L，13L和14L；以及多基因家族505基因1R，2R，3R和4R。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.19 GB 1410971.41.减毒的非洲猪瘟(ASF)病毒，其缺乏以下基因的功能性形式：多基因家族360基因9L，10L，11L，12L，13L和14L；以及多基因家族505基因1R，2R，3R和4R。2.根据权利要求1的减毒的ASF病毒，其中以下基因是至少部分地缺失的：多基因家族360基因10L，11L，12L，13L和14L；以及多基因家族505基因1R，2R和3R。3.根据权利要求2的减毒的ASF病毒，其中以下基因是缺失的：多基因家族360基因10L，11L，12L，13L和14L；以及多基因家族505基因1R，2R和3R。4.根据前述权利要求中任一项的减毒的病毒，其中以下基因是中断的(interrupted)：多基因家族360基因9L；和多基因家族505基因4R。5.减毒的ASF病毒，其缺乏DP148R基因的功能性形式。6.根据权利要求5的减毒的ASF病毒，其中所述DP148R基因是缺失的，部分缺失的或中断的。7.根据权利要求5或6的减毒的ASF病毒，其进一步缺乏以下基因的功能性形式：多基因家族360基因9L，10L，11L，12L，13L和14L；以及多基因家族505基因1R，2R，3R和4R。8.根据前述权利要求中任一项的减毒的ASF病毒，其中基因组的其余部分对应于来自有毒力的ASFV病毒分离株(isolate)的基因组。9.根据权利要求8的减毒的ASF病毒，其中基因组的其余部分对应于来自以下有毒力的ASF有毒力的ASFV病毒分离株之一的基因组：Georgia2007/1，Benin97/1，Kenyan，MalawiLil20/1，Pretorisuskop/96/4和Tengani62。10.根据权利要求9的减毒的ASF病毒，其中基因组的其余部分对应于Benin97/1病毒基因组。11.根据前述权利要求中任一项的减毒的ASF病毒，其当对受试者施用时诱导针对用有毒力的ASF病毒的随后攻击的保护性免疫应答。12.根据前述权利要求中任一项的减毒的ASF病毒，其当对受试者施用时，诱导与由减毒病毒OURT88/3诱导的免疫应答相比减弱的T细胞介导的免疫应答。13.疫苗，其包含根据前述任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：C艾布拉姆斯，AI赖斯，C内瑟顿，L狄克逊，D查普曼，P桑切斯科登，
申请(专利权)人：皮尔布莱特研究所，
类型：发明
国别省市：英国;GB
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。