猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物及该疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及动物生物制品领域，具体而言，涉及一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物及其制备方法，所述猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物由猪瘟活疫苗和疫苗稀释液组成；所述猪瘟活疫苗每头份含猪瘟疫苗株病毒含量为750～30000RID。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物生物制品领域，具体而言，涉及一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物及该疫苗的制备方法。
技术介绍
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种世界性的高度接触性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疾病目录。在我国，猪瘟是威胁养猪业的重大病毒性传染病之一。我国于1954年成功研制出猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)也称猪瘟C株，推广应用至今，取得了显著成效，猪瘟发病率和感染率逐年下降，但仍在我国几乎所有的养猪地区成地方流行性。我国科学家研制的HCLV弱毒疫苗是世界上最有效、应用范围最广的猪瘟疫苗。以此疫苗免疫为基础，欧美发达国家使用HCLV毒株成功根除了猪瘟病毒。我国于1956年提出了消灭猪瘟的规划，然而到现在60年过去了，猪瘟仍在我国不间断地流行，消灭猪瘟仍然还有一段路要走。在临床上，猪瘟疫苗广泛运用，规模化猪场种猪猪瘟免疫覆盖率基本达到100％，因此初生仔猪通过初乳可以获得被动免疫，其被动免疫持续时间与种猪免疫状态密切相关。种猪抗体效价较高的子代小猪母源抗体可以持续到10周甚至更长时间。被动免疫力的存在虽然在一定程度上保护力仔猪免受猪瘟野毒的感染，但是也给猪瘟免疫带来了干扰。当仔猪母源抗体效价较高时使用疫苗免疫，进入体内的疫苗可快速被母源抗体中和而导致免疫失败。基于该原因，在临床上要获得比较好的免疫效果，需要对仔猪进行母源抗体的监测以指定符合特定猪场的免疫程序。但即便如此，由于仔猪个体差异也会造成仔猪的母源抗体的极大差异，因此使用该种方法免疫后依然有部分仔猪无法得到较好的免疫效果。除此之外，由于猪瘟弱毒疫苗免疫后抗体产生慢，在免疫后有一段时间的免疫空窗期(即抗体阴性时间)，由于免疫空窗期的存在，加剧了猪瘟感染野毒的风险。因此，提供一种能杜绝母源抗体对仔猪猪瘟病毒免疫的影响、且无免疫空窗期的存在的新型猪瘟疫苗势在必行。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物，以解决上述问题。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗由猪瘟粘膜免疫活疫苗和疫苗稀释液组成；所述猪瘟粘膜免疫活疫苗每头份的量为750～30000RID。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗，所述疫苗稀释液包括以下组份：卡波姆0.1～10g/L以及左旋咪唑0.1～20g/L；所用溶剂为含有如下组份的磷酸盐缓冲液：130～140mM氯化钠、2～3mM氯化钾、1～30mM磷酸氢二钠以及1～5mM磷酸二氢钾。本专利技术采用的疫苗稀释液中的主要成分为卡波姆和左旋咪唑，其中左旋咪唑具有增强免疫的作用，卡波姆是一种多聚物，在水溶液中形成凝胶，具有缓释的功能，该物质还可以与疫苗形成复合物阻止动物体液内的抗体中和疫苗的作用。一种猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，包括如下步骤：向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒进行培养得到病毒液，收获病毒液并测定病毒液效价后，按照750～30000RID每头份的量将所述病毒液添加到耐热冻干保护剂中冻干即得成品；优选的，所述猪源传代细胞系包括猪肾传代细胞或猪睾丸传代细胞。本申请所用猪源传代细胞系是猪肾细胞或猪睾丸细胞，购于中国兽医药品监察所，由畜禽生物制品四川省重点实验室检验保存。本专利技术创制出一种猪瘟的粘膜免疫疫苗，使用该疫苗可以通过滴鼻或口服的方式进行免疫，对高母源抗体仔猪滴鼻免疫后可以刺激仔猪产生特异性的抗体，且在整个检测时期内猪瘟抗体均为阳性，杜绝了母源抗体对仔猪猪瘟病毒免疫的影响，且无免疫空窗期的存在，是一种值得推广的新型猪瘟疫苗。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，所述向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒时的比例为：每100ml培养液接种0.1ml～1.5ml种毒。所述种毒为猪瘟兔化弱毒株，保藏号为：CVCCAV1412，购自中国兽医药品监察所，滴度为105RID/ml。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，所述向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒进行培养得到病毒液的操作包括：1)、向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒，34℃～37℃培养44h～52h；2)、换液，34℃～37℃培养48h～96h后收获病毒液。进一步优选的，在步骤1)中，培养时所用的培养液为含3％～10％猪瘟专用血清的MEM培养基。进一步优选的，在步骤2)中，培养时所用的培养液为含1％～3％猪瘟专用血清的MEM培养基。猪瘟专用血清购自呼和浩特市草原绿野生物工程材料有限公司；MEM培养基购自ThermoFisherScientific。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，重复步骤2)多次；更优选的，重复步骤2)8～12次。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，将每次收获病毒液分别编号后置于-15℃～-25℃保存。优选的，如上所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，病毒液效价大于5×105RID/mL。上述多次收获病毒液后，将得到的病毒液混合取样后再进行病毒液效价的测定。兔体感染量(RID)测定法将疫苗稀释后经耳缘静脉注射试验兔，通过测定兔体温变化判定疫苗效价，是我国使用最为广泛的猪瘟活疫苗效检方法。该方法可直接检测猪瘟疫苗中的活病毒含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：使用本专利技术提供的疫苗可以通过滴鼻或口服的方式进行免疫，对高母源抗体仔猪滴鼻免疫后可以刺激仔猪产生特异性的抗体，且在整个检测时期内猪瘟抗体均为阳性，杜绝了母源抗体对仔猪猪瘟病毒免疫的影响，且无免疫空窗期的存在，是一种值得推广的新型猪瘟疫苗。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例11、按照常规方法复苏、传代猪睾丸细胞系(ST细胞)，将传代后生长良好的ST细胞使用细胞消化液(0.25％胰酶，5mMEDTA，pH7.2)进行消化，使用含3％猪瘟专用血清的MEM培养基分散细胞，进行细胞计数后按照适宜的浓度接种培养瓶或发酵罐。按照培养液体积的0.1％接种猪瘟种毒，34～37℃培养。2、培养52小时后，去除细胞培养液，使用1％血清的MEM培养基代替；继续培养96小时后进行第一次病毒液收获，收获后加入等量的1％血清的MEM培养基，连续收获8次。将收获的病毒液分别编号后置于-15℃～-25℃保存。3、将8次收获的病毒液混合取样后按照《中华人民共和国兽药典》附录规定的方法进行RID的测定，测定结果显示混合样大于5×105RID/ml。4、耐热保护剂的制备：将耐热保护剂各组分，包括蔗糖、海藻糖、水解乳蛋白、酶解酪蛋白、明胶等按照一定比例配制后经高压灭菌备用。5、配苗、冻干及分装：在耐热保护剂中按照10000RID每头份的量加入一定量的猪瘟半成品，混匀后分装为2ml/瓶，加盖后置于冻干机内，经预冻、升华过程冻干疫苗形成成品。6、成品检验：按照《中华人民共和国兽药典》附录规定的方法对成品进行无菌检验、霉菌检验、支原体检验、安全性检验和效力检验均合格，置于2～8℃保存备用。7、稀释液制备：每1L稀释液含有：130mM氯化钠、2mM氯化钾、30mM磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗由猪瘟粘膜免疫活疫苗和疫苗稀释液组成；所述猪瘟粘膜免疫活疫苗每头份的量为750～30000RID。

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟粘膜免疫活疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗由猪瘟粘膜免疫活疫苗和疫苗稀释液组成；所述猪瘟粘膜免疫活疫苗每头份的量为750～30000RID。2.根据权利要求1所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗，其特征在于，所述疫苗稀释液包括以下组份：卡波姆0.1～10g/L以及左旋咪唑0.1～20g/L；所用溶剂为含有如下组份的磷酸盐缓冲液：130～140mM氯化钠、2～3mM氯化钾、1～30mM磷酸氢二钠以及1～5mM磷酸二氢钾。3.一种猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒进行培养得到病毒液，收获病毒液并测定病毒液效价后，按照750～30000RID每头份的量将所述病毒液添加到耐热冻干保护剂中冻干即得成品；优选的，所述猪源传代细胞系包括猪肾传代细胞或猪睾丸传代细胞。4.根据权利要求3所述的猪瘟粘膜免疫活疫苗的制备方法，其特征在于，所述向猪源传代细胞系中接种猪瘟种毒时的比例为：每100ml培养液接种0.1ml～1.5m...

【专利技术属性】
技术研发人员：周远成，王敖，蔡雨函，李碧，牛婷，
申请(专利权)人：四川华神兽用生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51