The invention relates to the field of animal biological products, in particular to a method for determining the potency of a hog cholera virus vaccine. The principle of using cell ELISA methods were HCV vaccine virus content determination, indirect determination of breeding virus particles, to avoid the interference of lethal virus particles due to various external factors, simple operation, short time, high accuracy, can greatly improve the production efficiency, it is worthy of popularization of classical swine fever in rabbits attenuated vaccine virus content determination method.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物生物制品领域，具体而言，涉及一种猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法。
技术介绍
猪瘟(ClassicalSwineFever，CSF)是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus，CSFV)引起的一类高发病率的高度接触性传染病。该病被OIE列为A类传染病之一，是国际畜牧兽医产品贸易重要检疫对象。家猪和野猪是CSFV的唯一自然宿主。针对该病尚无有效的治疗药物，通常应用疫苗免疫进行预防，目前，国内广泛使用猪瘟兔化弱毒疫苗来预防猪瘟的发生。CSF临床记载发现于19世纪初期，1903年被证实为病毒感染所致。CSFV感染后导致的病理变化及病程与感染猪的年龄、健康状况、饲养环境和免疫状态息息相关，但更大程度却决于CSFV毒株的毒力强弱。由于猪瘟兔化弱毒疫苗是经家兔传代致弱而来，该病毒注射到家兔体内可以使家兔呈现暂时性的发热反应(兔体热反应实验)，因此在很长一段时间，疫苗生产企业均使用兔体热反应法对疫苗的半成品和成品...
【技术保护点】
一种猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，其特征在于，包括：1)、将待测猪瘟兔化弱毒疫苗样品用DMEM培养液梯度稀释后将各浓度样品分别接种到预先培养好的敏感细胞中，同时设置加入DMEM培养液的阴性对照及已知病毒效力的猪瘟兔化弱毒疫苗作为阳性对照；加入各浓度样品及对照样品后进行病毒培养；2)、病毒培养完成后去掉细胞培养液，加入固定液进行固定，随后依次加入抗体及TMB显色液；每次换液前均去掉上一次所用溶液并清洗；3)、加入终止液终止反应；酶标仪读取450nm吸光值并计算病毒效力。
【技术特征摘要】
1.一种猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，其特征在于，包
括：
1)、将待测猪瘟兔化弱毒疫苗样品用DMEM培养液梯度稀释
后将各浓度样品分别接种到预先培养好的敏感细胞中，同时设置加
入DMEM培养液的阴性对照及已知病毒效力的猪瘟兔化弱毒疫苗
作为阳性对照；加入各浓度样品及对照样品后进行病毒培养；
2)、病毒培养完成后去掉细胞培养液，加入固定液进行固定，
随后依次加入抗体及TMB显色液；每次换液前均去掉上一次所用
溶液并清洗；
3)、加入终止液终止反应；酶标仪读取450nm吸光值并计算病
毒效力。
2.如权利要求1所述的猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，
其特征在于，在步骤1)中，所述敏感细胞为猪睾丸细胞、猪肾细
胞的原代细胞或传代细胞或兔肾细胞的原代细胞或传代细胞中的一
种。
3.如权利要求1所述的猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，
其特征在于，在步骤1)中，所述敏感细胞培养于细胞培养板中；
接种于所述细胞培养板时的细胞汇合度为90％以上，接种的密度为
4～6×105个/mL。
4.如权利要求3所述的猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，
其特征在于，所述敏感细胞培养于细胞培养板中的培养条件为：
在36～38℃，4.5～5.5％CO2的培养环境中培养12～24小时。
5.如权利要求1所述的猪瘟兔化弱毒疫苗病毒效力测定方法，
其特征在于，在步骤1...
【专利技术属性】
技术研发人员：周远成，蔡雨函，
申请(专利权)人：四川华神兽用生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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