本发明专利技术的目的是提供一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验的方法，是用待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗免疫家兔，免疫21日龄后ELISA检测猪瘟病毒抗体水平或采用猪瘟脾淋苗静脉注射进行攻毒，当免疫兔至少4/5的猪瘟病毒抗体阻断率S/P≥60％或攻毒后至少4/5兔体无定型热反应，即可判为合格。本发明专利技术的疫苗兔体效力检验方法不仅能够检验猪瘟基因工程亚单位疫苗的保护效力，还更加稳定、简便、有效、节省时间和成本评价猪瘟基因工程亚单位疫苗的效力，弥补了现有技术的不足，对后期的大规模生产培养工艺优化具有积极的评价指导作用，更有利于指导猪瘟基因工程亚单位疫苗产品的临床应用，具有广阔的市场应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于疫苗效果检测
，具体涉及一种猪瘟基因工程亚单位疫苗的效力检验方法。
技术介绍
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染病，死亡率极高，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。猪瘟已被世界动物卫生组织(OIE)列为家畜A类传染病，我国也将其列为一类动物疫病。临床以稽留高烧、皮肤和黏膜出现大量出血点为特征。多年的实践经验证明，疫苗接种是预防和控制动物疫病的主要手段。20世纪60年代，我国研制出经人工诱变获得的猪瘟兔化弱毒株(又称C株)疫苗在CSFV防控中起到了决定性作用，有效的控制了猪瘟在我国乃至世界范围内大规模的流行。猪瘟C株弱毒疫苗是目前国内外广泛使用的疫苗，其安全性和免疫效力已被社会认可，但其受母源抗体干扰，导致免疫失败的现象时有报道，接种此弱毒疫苗产生的抗体无法与野毒感染产生的抗体相区分，给免疫的制订和国家猪瘟防控净化也带来了巨大的挑战，制约着我国生猪及猪肉制品在非免疫国家和地区的贸易发展。在猪瘟活疫苗的研究基础上，利用基因工程操作技术研制了新一代猪瘟基因工程亚单位疫苗。我们将CSFVE2基因抗原优势区(共596个氨基酸)整合到HEK-293细胞染色体基因组，获得的了稳定表达外源基因E2的HEK-293细胞株，该表达E2蛋白制备的亚单位疫苗提供的保护性和脾淋苗无差异，并且具有灭活疫苗的特征，能够和疫苗毒与野毒感染相区分，同时能区分HEK-293-E2和脾淋苗(包括野毒)的鉴别诊断方法已经建立。此疫苗一旦投入使用，不但可以通过抗体鉴别技术区分疫苗免疫动物和野毒感染动物，极大地促进CSFV的净化或根除，可提高猪的存活率，增加猪的存栏量和出栏量，对猪肉市场上相关畜产品的供应和稳定物价具有重要的意义。疫苗效力是评价疫苗质量的关键指标，但是过去一直没有有效的对猪瘟基因工程亚单位疫苗进行效力检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验的方法，从而弥补现有技术的不足。本专利技术的方法，是用待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗免疫家兔，免疫21日龄后ELISA检测猪瘟病毒抗体水平或采用猪瘟脾淋苗静脉注射进行攻毒，当免疫兔至少4/5的猪瘟病毒抗体阻断率S/P≥60％或攻毒后至少4/5兔体无定型热反应，即可判为合格。其一种具体操作方法，包括如下的步骤：1)分组及免疫接种：选取体重为1.5～3kg健康易感家兔，从中挑选体温波动不大的随机分组，采用猪瘟脾淋毒作为阳性对照组和未免疫接种作为阴性对照组，而在实验组中接种待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗；所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗为HEK-293-E2疫苗；2)猪瘟病毒ELISA抗体检测免疫后第21天，采集各组兔的血液，分离血清，检测该疫苗免后21天猪瘟病毒抗体水平；3)检测结果判定：当免疫兔至少4/5的猪瘟病毒抗体阻断率S/P≥60％时，判定疫苗合格；另一种操作方法，其步骤如下：1)分组及免疫接种：选取体重为1.5～3kg健康易感家兔，从中挑选体温波动不大的随机分组，采用猪瘟脾淋毒作为阳性对照组和未免疫接种作为阴性对照组，而在实验组中接种待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗；所述的猪瘟基因工程亚单位疫苗为HEK-293-E2疫苗；2)免疫后第21d攻毒实验用无菌生理盐水将20头份猪瘟脾淋毒稀释成1头份/ml，注射给每组家兔，攻毒剂量为lml/只，攻毒前2天和攻毒当天上下午各测体温1次，24小时后，每隔6h测体温1次，连续测5d至体温恢复正常；3)检测结果判定：至少4/5数量的注射组兔体无定型热反应，即可判定疫苗效力为合格。本专利技术的疫苗兔体效力检验方法不仅能够检验猪瘟基因工程亚单位疫苗的保护效力，还更加稳定、简便、有效、节省时间和成本评价猪瘟基因工程亚单位疫苗的效力，弥补了现有技术的不足，对后期的大规模生产培养工艺优化具有积极的评价指导作用，更有利于指导猪瘟基因工程亚单位疫苗产品的临床应用，具有广阔的市场应用前景。具体实施方式申请人利用猪瘟脾淋苗能够感染兔子引起兔体反应热这一特性，建立了一种用兔体检验猪瘟基因公测很难过亚单位疫苗效力的方法，保证了猪瘟基因工程亚单位疫苗效力评价的简便性和稳定性，同时大大节省了检验成本。该方法用小动物兔子代替了大动物猪，大大节省了生产检验成本；而且该检验方法使用的兔子均为SPF兔，其生产性能和质量标准较猪更加稳定，可以进行疫苗生产质量评价应用。实施例1：兔体效力检验模型方法设计及步骤1材料1.1疫苗猪瘟基因工程亚单位疫苗(HEK-293-E2)，批号201403，由青岛易邦生物工程有限公司生产；猪瘟脾淋苗，批号201401批，20头份/ml，有效期至2015年6月，由青岛易邦生物工程有限公司生产。1.2试验动物1.5～3.0kgSPF家兔购自青岛康大兔业生物科技有限公司。1.4试剂盒猪瘟ELISA抗体检测试剂盒，购自IDEXX公司。1.5体温计购自上海鹿得医疗器械贸易有限公司。2试验设计2.1分组及免疫接种方法选取体重为1.5～3kg健康易感家兔30只，购回后第3d，每隔6h测温1次，连续测3次，从30只兔子中挑选体温波动不大的25只，随机分成5组，每组5只，采用猪瘟脾淋毒作为阳性对照组和未免疫接种作为阴性对照组，按照下表1的方法进行免疫接种；自接种后第1d连续测3d。表1疫苗免疫接种方法2.2猪瘟病毒ELISA抗体检测免疫后第21天，采集各组兔的血液，分离血清，按照猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书，检测该疫苗免后21天猪瘟病毒抗体水平。2.3攻毒试验免疫后第21d攻毒，用无菌生理盐水将20头份猪瘟脾淋毒稀释成1头份/ml，通过耳静脉注射给每组家兔，攻毒剂量为lml/只，攻毒前2天和攻毒当天上下午各测体温1次，24小时后，每隔6h测体温1次，连续测5d至体温恢复正常。3结果3.1兔体效力检验方法结果3.1.1兔体免疫前、后体温测定结果按照2.1.1的方法进行实际测温，将实际测温情况绘制表格，从表3所测结果中可以看出，免疫前各组家兔体温波动不大；用HEK-293-E2(0.05、0.1、0.2ml/只)免疫组家兔体温在正常范围内，用猪瘟脾淋苗家兔出现兔体反应热(≥40.5℃)与常规猪瘟脾淋苗检测结果一致。详见表3。3.1.2HEK-293-E2免疫家兔后ELISA猪瘟抗体检测结果免疫第7、14、21天，采集的各组免疫兔血清ELISA检测猪瘟病毒抗体，将实际抗体检测情况绘制表格。从表格4可以看出，HEK-293-E2免后21日，0.05ml/只免疫组抗体阳性率为3/5；0.1ml/只、0.2ml/只和猪瘟脾淋苗免疫组抗体阳性率均为5/5；未免疫对照组抗体阳性率为0/5。详见表4。3.1.3攻毒前、后体温测定结果免疫第21天后，各组兔子用猪瘟脾淋苗进行攻毒，将实际测温情况绘制表格，从所测结果表5可以看出，攻毒前各组免疫兔体温在正常波动范围内(＜40.5℃)，攻毒后0.2ml免疫组(0/5)、0.1ml免疫组(0/5)和猪瘟脾淋苗组(0/5)均未出现定型热反应，0.05ml免疫组(2/5)出现定型热反应，未免疫对照组(5/5)出现定型热反应。详见表5。表4免疫兔血清猪瘟病毒抗体ELISA检测结本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验的方法，其特征在于，所述的方法是用待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗免疫家兔，免疫21日龄后ELISA检测猪瘟病毒抗体水平或采用猪瘟脾淋苗静脉注射进行攻毒，当免疫兔至少4/5的猪瘟病毒抗体阻断率S/P≥60％或攻毒后至少4/5兔体无定型热反应，即判为合格。
【技术特征摘要】
1.一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力检验的方法，其特征在于，所述的方法是用待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗免疫家兔，免疫21日龄后ELISA检测猪瘟病毒抗体水平或采用猪瘟脾淋苗静脉注射进行攻毒，当免疫兔至少4/5的猪瘟病毒抗体阻断率S/P≥60％或攻毒后至少4/5兔体无定型热反应，即判为合格。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)分组及免疫接种：选取体重为1.5～3kg健康易感家兔，从中挑选体温波动不大的随机分组，采用猪瘟脾淋毒作为阳性对照组和未免疫接种作为阴性对照组，而在实验组中接种待检测的猪瘟基因工程亚单位疫苗；2)猪瘟病毒ELISA抗体检测免疫后第21天，采集各组兔的血液，分离血清，检测该疫苗免后21天猪瘟病毒抗体水平；3)检测结果判定：当免疫兔至少4/5的猪瘟病...
【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，范根成，刘蕾，杜元钊，李红卫，申洪银，郭玉广，陶晓珊，胡潇，曹志，韩乃君，邹桂荣，
申请(专利权)人：青岛易邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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