基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法，对HIV-1感染者的血浆/血清HIV-1特异性抗体进行检测，将结果扫描成图像，导入灰度值分析软件进行灰度值分析，并将数据进行转换；利用矩形方框选取目标区域，使用定义框在目的条带附近定义背景区域，同时选中一组目的条带和其相应的背景区域，依次完成所有目的条带与其相应背景区域的关联，软件进行背景扣除后的条带灰度值均值为条带灰度值；利用自身的血清对照条带灰度值作为自身内对照，计算出每个样本的每个条带相对灰度值。本发明专利技术只需利用少量的病人血浆/血清样本即可检测，操作简单，成本较低，较易开展。

Detection method of HIV-1 new infection based on WB gray value

The invention relates to a method for the detection of HIV-1 WB band gray value of new infections based on HIV-1 infected plasma / serum HIV-1 specific antibody detection, the results of scanning image analysis software, gray value and gray value of import, convert data; using a rectangular box select target area. Using the definition of frame with defined near the background region in the objective, at the same time to select a group of bands and their corresponding background area, in order to complete all the purpose of the association with the corresponding background, software background after deducting the band gray value with gray value; use of their serum control band gray value as its own internal control, calculate each sample band relative gray value. The invention can be detected by using only a small amount of patient plasma / serum samples, and the operation is simple, the cost is low, and the method is easy to carry out.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新医药技术与生物医药
，具体涉及一种基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法。
技术介绍
免疫印迹法(WesternBlot,WB)是HIV确证的金标准。它利用硝酸纤维试剂膜条上的天然灭活HIV-1新型毒蛋白的分离颗粒和特异性的HIV-2型合成多肽与稀释的血液或血浆样本中的抗体结合。结合后的特异性抗体再与带有碱性磷酸酶的羊抗人IgG抗体结合，加入底物液显色。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供一种基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法。本专利技术解决上述技术问题所采取的技术方案是：利用新加坡MP生物医学公司生产的HIV-1确诊试剂盒(HIVblot2.2,MPDiagnostics,Singapore)对HIV-1感染者的血浆/血清HIV-1特异性抗体进行检测，并对各抗原的条带进行灰度值分析。具体如下：一种基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法，包括以下步骤：(1)利用HIV-1确诊试剂盒对HIV-1感染者的血浆/血清HIV-1特异性抗体进行检测，将20ul的感染者血浆加入到事先加有2mL封闭液的孵育槽内，置于水平摇床上，以12次/分钟的速度在室温下孵育20小时；清洗三遍后，加入酶结合物，同样的条件孵育30分钟，最后再清洗三遍后加入显色剂处理15分钟；将硝酸纤维试剂膜条置于滤纸上自然干燥。将检测结果扫描成图像，备用；(2)选取目标区域：将扫描后的图像导入灰度值分析软件，在多条带分析功能模块进行灰度值分析，并将数据进行转换；利用矩形方框选取目标区域，框选的范围包括10个条带所在的位置，所述的10个条带分别为：HIV-1膜区蛋白gp41、gp120和gp160，pol区蛋白p51、p31和p66，以及GAG蛋白p17、p24、p39和p55；(3)背景区域的选择：使用定义框在每一个目的条带附近定义一个相应的具有代表性的背景区域，然后用鼠标同时选中一组目的条带和其相应的背景区域，使目的条带与相应背景区域相关联，并依次完成所有目的条带与其相应背景区域的关联，软件自动进行背景扣除的计算；(4)抗体表达量的计算：用相对灰度值表示抗体表达量，以扣除背景后的条带灰度值均值为条带灰度值，每个样本利用自身的血清对照条带灰度值作为自身内对照，计算出每个样本的每个条带相对灰度值，计算公式为：目的条带的条带灰度值均值/血清对照的条带灰度值均值。本专利技术只需利用少量的病人血浆/血清样本即可检测，操作简单，成本较低，较易开展。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明。以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用到的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的试验均设置三次重复实验，结果取平均值。试验材料如下：WB检测试剂盒：新加坡MP生物医学亚太私人有限公司。扫描仪：中国惠普有限公司。灰度值分析软件：AlphaViewSoftware。实施例1：HIV-1WB确证检测试验WB确证检测试验的方法是：根据试剂盒说明书，采用隔夜孵育法进行。具体步骤是，将20ul的感染者血浆加入到孵育槽内(事先加入了2mL的封闭液)，盖上盖子，置于水平摇床上，以12次/分钟的速度在室温下孵育20小时。清洗三遍后，加入酶结合物，同样的条件孵育30分钟，最后再清洗三遍后加入显色剂处理15分钟。将硝酸纤维试剂膜条置于滤纸上自然干燥，利用惠普公司生产的扫描扫成灰度图像，备用。洗膜液、封闭液及酶结合物工作液的配置如下：洗膜液：以1：19的比例将20×的浓缩洗膜缓冲液与蒸馏水混合，充分混匀；封闭液：以1:9的比例将浓缩样品稀释液与蒸馏水混合，每20mL的混合液加入1g脱脂奶粉，充分混匀；酶结合物工作液：以1:1000的比例稀释酶结合物，稀释液为上述的封闭液。所有液体均需现配现用。实施例2：WB条带灰度值分析1.选取目标区域：将扫描后的图像导入AlphaView软件，在多条带分析功能(MultiplexBandAnalysis)模块进行灰度值分析，勾选“Invertdata”选项。利用矩形方框选取目标区域，框选的范围包括10个条带所在的位置。2.背景区域的选择：在AnalysisTools工具栏中选择MultiplexBandAnalysis中的Bkgrnd一栏，选中“Multi-RegionalBackground”，并使用定义框“BackgroundRegionTools”在每一个目的条带附近定义一个相应的具有代表性的背景区域。然后用鼠标同时选中一组目的条带和其相应的背景区域，点击“LinkBackground”按键，实现其条带与相应背景区域的关联。这样依次完成所有条带与其相应背景区域的关联，软件自动进行背景扣除的计算。3.抗体表达量的计算-灰度值：以扣除背景后的条带灰度值均值(BCaverage)为其灰度值。每个样本，利用自身的血清对照条带灰度值作为自身内对照，计算出每个样本的每个条带相对灰度值，计算公式如下：目的条带的BCaverage/血清对照的BCaverage。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于WB条带灰度值的HIV‑1新发感染的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用HIV‑1确诊试剂盒对HIV‑1感染者的血浆/血清HIV‑1特异性抗体进行检测，将检测结果扫描成图像，备用；(2)选取目标区域：将扫描后的图像导入灰度值分析软件，在多条带分析功能模块进行灰度值分析，并将数据进行转换；利用矩形方框选取目标区域，框选的范围包括10个条带所在的位置，所述的10个条带分别为：HIV‑1膜区蛋白gp41、gp120和gp160，pol区蛋白p51、p31和p66，以及GAG蛋白p17、p24、p39和p55；(3)背景区域的选择：使用定义框在每一个目的条带附近定义一个相应的具有代表性的背景区域，然后用鼠标同时选中一组目的条带和其相应的背景区域，使目的条带与相应背景区域相关联，并依次完成所有目的条带与其相应背景区域的关联，软件自动进行背景扣除的计算；(4)抗体表达量的计算：用相对灰度值表示抗体表达量，以扣除背景后的条带灰度值均值为条带灰度值，每个样本利用自身的血清对照条带灰度值作为自身内对照，计算出每个样本的每个条带相对灰度值，计算公式为：目的条带的条带灰度值均值/血清对照的条带灰度值均值。...

【技术特征摘要】
1.一种基于WB条带灰度值的HIV-1新发感染的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用HIV-1确诊试剂盒对HIV-1感染者的血浆/血清HIV-1特异性抗体进行检测，
将检测结果扫描成图像，备用；
(2)选取目标区域：将扫描后的图像导入灰度值分析软件，在多条带分析功能模块进行
灰度值分析，并将数据进行转换；利用矩形方框选取目标区域，框选的范围包括10个条带所
在的位置，所述的10个条带分别为：HIV-1膜区蛋白gp41、gp120和gp160，pol区蛋白p51、
p31和p66，以及GAG蛋白p17、p24、p39和p55；
(3)背景区域的选择：使用定义框在每一个目的条带附近定义一个相应的具有代表性的
背景区域，然后用鼠标同时选中一组目的条带和其相应的背景区域，使目的条带与相应背景
区域相关联，并依次完成所有目的条带与其相应背景区域的...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁浩，叶力，黄颉刚，蒋俊俊，王敏连，梁冰玉，臧宁，廖艳研，周波，王洪，陈荣凤，刘洁，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西;45