用于诊断结核病的IP10和干扰素联合细胞因子及其试剂盒制造技术

一种细胞因子IP‑10与IFN‑γ作为联合标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。本发明专利技术提供的细胞因子及其组合实现对初诊结核病患者血浆中细胞因子的检测，能显著提高肺结核的诊断能力，有利于对疾病及其治疗情况的预判。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种疾病诊断技术，尤其涉及一种诊断结核病的细胞因子，以及检测这些细胞因子的试剂盒。
技术介绍
结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)引起的一种慢性传染病，据2014年WHO的统计，我国新发肺结核人数93万人，在22个结核病高负担国家中仅次于印度和印度尼西亚居第三位，结核病是我国单因素致死率最高的慢性传染性疾病。流行病学显示全世界约有1/3人口为结核分枝杆菌携带者，其中约10％的携带者可发展为活动性结核病[2]。随着多重耐药结核(multidrugresistancetuberculosisclebacillus，MDR-TB)的流行及人类免疫缺陷病毒(Humanimmunedeficiencyvinus，HIV)感染的增多，让结核分枝杆菌的感染更加难以控制，所以实现结核病一级预防的前提就是提高结核病的诊断效能。现有的结核病实验室诊断方法主要分为三类：细菌学方法、分子生物学方法以及免疫学方法。细菌学诊断方法主要有涂片染色显微镜检和分枝杆菌分离培养，是结核病实验室诊断的常用技术，但是由于涂片镜检的低检出率和分离培养周期较长，造成了漏检及延误治疗，增加疾病传播的机会；分子生物学检测主要基于体外核酸扩增技术，其敏感性增高的同时易出现假阳性，而且难以获得含有分枝杆菌DNA的合适样本因而限制了其应用；免疫学诊断方法包括结核菌素试验、结核抗原以及结核抗体检测。结核分枝杆菌是典型的细胞内寄生菌，人体免疫系统抗击结核分枝杆菌的主要方式是细胞免疫。随着细胞和分子免疫学研究的进展，发现了一些与结核病免疫及发病有关的细胞因子，在机体感染结核分枝杆菌的过程中，活化的免疫细胞会分泌大量的细胞因子参与机体的免疫反应，在抗结核治疗的过程中，其水平也会产生相应的改变，所以改变的细胞因子水平不仅可以成为结核病诊断的标志物，甚至可以对结核病治疗过程进行监测，指导临床用药。IFN-γ作为一种异型糖蛋白，通过与相应的受体结合来调节机体免疫系统，在结核病患者体内可以反映机体抗结核的免疫状态，并且与结核菌的载菌量相关，结核分枝杆菌感染机体以后，T细胞会识别并产生高水平的IFN-γ来进行抵抗，所以目前被广泛用于结核病的诊断。例如已有针对γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(interferon-gammareleaseassay，IGRAs)的商品化试剂盒T.SPOT.TB和QuantiFERON-TBGoldIn-Tube(QFT-IT)。但是，IFN-γ作为现有商品化结核分枝杆菌感染细胞免疫检测试剂中唯一的检测靶标，其敏感性和特异性并不能满足临床的要求，其原因可能一方面在于IFN-γ的检测性能不够高，部分研究表明其诊断结核病的准确性较低。另一方面，对于结核病这样异质性高的疾病而言，单一靶标的检测性能具有一定的局限性，国内外学者也在寻找更好的用于诊断结核病的生物标志物，探索联合多种细胞因子进行诊断的可能性。中国专利技术专利申请201210559258.6公开了一种单核细胞趋化蛋白2作为结核性胸水检测的标志物，MCP-2/CCL8蛋白作为鉴别诊断结核性胸水的标志物。中国专利技术专利申请201510317166.0公开了一种基于结核特异性IL-31检测的诊断结核分枝杆菌感染的试剂盒，包括IL-31捕获抗体和检测抗体、结核特异性抗原多肽、稀释液、标准品、显色液、终止液、缓冲液、固体载体和封板膜等。中国专利技术专利申请201410182316.7公开了一种活动性肺结核的免疫诊断试剂盒，该试剂盒能特异性识别细胞因子I-309、MIG、IL-8中至少一个，也可对所识别的细胞因子进行定量分析，也可以联合对结核分枝杆菌抗原38-KDa、32-KDa、14-16-KDa和Ag85B的特异性IgG抗体进行特异性识别。中国专利技术专利申请201410182365.0公开了一种结核分枝杆菌潜伏感染的诊断试剂盒，试剂盒能特异性识别细胞因子Eotaxin-2、MIG、Eotaxin、MCSF或IL-12p70中至少一个，并能对所识别的细胞因子进行定量分析，还可以特异性识别抗原38-KDa、32-KDa、14-16-KDa和Ag85B的特异性IgG抗体。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种IP-10与IFN-γ组成的联合细胞因子作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种试剂盒，以细胞因子IP-10及与IFN-γ为标记物。细胞因子(cytokine)是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子和生长因子等。炎症蛋白10(IP-10)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)和正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)均属于趋化因子家族的细胞因子。白细胞介素(IL)主要由淋巴细胞产生，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。IL-6属于一种白细胞介素。IFN-γ属于干扰素之一种，根据干扰素产生的来源和结构不同，可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ，他们分别由白细胞、成纤维细胞和活化T细胞所产生。各种不同的IFN生物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。细胞因子IP-10与IFN-γ共同作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。细胞因子IP-10及IFN-γ，与RANTES和Eotaxin之一种或几种细胞因子共同作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。一种试剂盒，以细胞因子IP-10和细胞因子IFN-γ为共同标记物。试剂盒还以细胞因子RANTES和细胞因子Eotaxin之一种或几种为标记物。试剂盒还包括检测细胞因子IP-10的组合物和检测细胞因子IFN-γ的组合物。试剂盒还包括IL-4、IL-7、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、G-CSF、PDGF-BB、VEGF、FGFbasic和TNF-α等细胞因子标记物。检测细胞因子IP-10的组合物包括IP-10的捕获抗体。细胞因子IFN-γ的组合物包括IFN-γ的捕获抗体。本专利技术技术方案实现的有益效果：本专利技术提供的多个细胞因子组合检测，对结核病具有较高的灵敏度和特异性。本专利技术提供的多个细胞因子组合实现对初诊结核病患者血浆中细胞因子的检测，能显著提高肺结核的诊断能力。本专利技术提供的多个细胞因子组合能为结核病的诊断和监测提供血液检测的依据，有利于对疾病及其治疗情况的预判。附图说明图1为本专利技术IFN-γ、IL-6、IP-10、Eotaxin和RANTES各个细胞因子在肺结核初诊患者与健康人血浆中的水平差异对比图；图2为本专利技术IFN-γ、IL-6、IP-10、Eotaxin和RANTES各个细胞因子诊断肺结核病人的ROC曲线。具体实施方式以下结合附图详细描述本专利技术的技术方案。本专利技术实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本专利技术进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
细胞因子IP‑10及IFN‑γ共同作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.细胞因子IP-10及IFN-γ共同作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。2.细胞因子IP-10及IFN-γ，与RANTES和Eotaxin之一种或几种细胞因子共同作为标记物在制备诊断或监测结核病的试剂盒中的应用。3.一种试剂盒，其特征在于以细胞因子IP-10和细胞因子IFN-γ为共同标记物。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于还包括检测细胞因子IP-10的组合物和检测细胞因子IFN-γ的组合物。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于还以细胞因子RAN...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯晓燕，张贺秋，朱绍荣，杨锡琴，
申请(专利权)人：上海荣盛生物药业有限公司，中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31