口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用技术

本发明专利技术公开了一种口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、疫苗组合物和应用。本发明专利技术的口蹄疫病毒样颗粒是由口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3、VP1构成，结构稳定，不仅温度稳定性及酸性环境稳定性增加，而且制备的疫苗组合物能快速形成特异性抗体，免疫持续期显著增长，能维持更长时间的免疫保护。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽用生物制品领域，更具体地，本专利技术涉及口蹄疫病毒样颗粒、制备方法、由该病毒样颗粒制备的疫苗组合物和应用。
技术介绍
口蹄疫(FMD)为一种急性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疾病，是哺乳类动物中感染性最强的疾病，其中偶蹄类动物染病更会造成全球重大的经济损失。遭受口蹄疫危害的动物包括牛、羊、山羊和猪。致病因子，口蹄疫病毒(FMDV)，是小核糖核酸病毒属家族的一种口疮病毒。该病毒分为7个血清型(A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2、和SAT3型)，其中我国主要流行O型、Asia1和A型口蹄疫病毒。疫苗免疫是控制此病、保护家畜免受危害的有效措施。病毒样颗粒(VLPs)是一种在体外和/或体内表达时能够自主包装成病毒外壳结构的类病毒粒子，它们是具有病毒的相似外壳结构但不具有病毒复制能力的假病毒。VLPs疫苗能有效地激发机体产生抗感染，抗肿瘤免疫，基于病毒样颗粒设计的疫苗是一种较为理想的疫苗形式。目前研究较多的口蹄疫病毒样颗粒是由口蹄疫结构蛋白VP0、VP3和VP1构成，然而，利用该方法制备的口蹄疫病毒样颗粒结构不稳定，活性降低，不能很好的诱导机体产生有效的免疫反应。此外，口蹄疫病毒易发生变异，尤其是我国流行的O型口蹄疫病毒CATHAY型变异株，其抗原发生较大变异，原有疫苗对其保护力明显下降，加之自身免疫原性较弱，不能诱导动物机体产生足够的免疫力。因此，筛选理想的毒株序列制备病毒样颗粒是当务之急，也符合国家提出的有效防控重大动物疫病，保障畜牧业健康可持续发展的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种抗口蹄疫的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含O型口蹄疫病毒样颗粒和/或亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒和/或A型口蹄疫病毒样颗粒和佐剂，其中，O型口蹄疫病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，A型口蹄疫病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.1，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.2，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.3，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.4。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.5，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.6，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.7，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.8。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.9，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.10，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.11，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.12。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.13，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.14，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.15，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.16。优选地，本专利技术提供的O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.17，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.18，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.19，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.20。优选地，本专利技术提供的亚洲1型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.21，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.22，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.23，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.24。优选地，本专利技术提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.25，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.26，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.27，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.28。优选地，本专利技术提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.29，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.30，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.31，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.32。优选地，本专利技术提供的A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4氨基酸序列为SEQ ID NO.33，VP2氨基酸序列为SEQ ID NO.34，VP3氨基酸序列为SEQ ID NO.35，VP1氨基酸序列为SEQ ID NO.36。作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术提供的预防和/或治疗FMDV感染的疫苗组合物包含氨基酸序列为SEQ ID NO.1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36所示的变体。“变体”旨在表示基本上类似序列。“变体”蛋白旨在表示通过在天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的缺失或添加，和/或天然蛋白中的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的取代而源于天然蛋白的蛋白。本专利技术包括的变体蛋白有生物学活性，即，它们有引发免疫应答的能力，能对FMDV攻击具有保护性反应的能力。变体包括等位基因变体。术语\等位基因变体\指称含有导致蛋白的氨基酸序列变化及在天然的群(例如，病毒物种或变种)之内存在的多态性的多核苷酸或多肽。该天然的等位基因变异可一般导致多核苷酸或多肽的1％～5％变异。等位基因变体可通过在许多不同物种中测序目的核酸序列来鉴定，其可通过使用鉴定那些物种中的相同的遗传座位的杂交探针来容易进行。任何和全部该核酸变异及得到的氨基酸多态性或是天然的等位基因变异的结果且不改变目的基因的功能活性的变异旨在本专利技术的范围之内。术语“预防”指通过其与FMDV相关的感染或疾病的症状被阻断或延迟；术语“治疗”指通过与FMDV相关的感染或疾病的症状被缓和或完全消除的过程。术语“保护性反应”意为在动物中预防FMDV相关疾病或由FMDV导致的感染的发作或减轻存在的这样的疾病的严重性。本专利技术涉及的FMDV蛋白，其有利地激发动物中的保护性反应。具体地，本专利技术实施方式的蛋白序列包含与其功能衍生物基本相同的氨基酸序列。“基本上相同”可以理解为本专利技术的蛋白优选地具有这样的氨基酸序列，其与SEQ ID NO.1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36中所示的序列的部分或全部具有至少70％同源性，或甚至优选地80％同源性，或甚至更优选地90％同源性，或最优选地95％同源性。在本文中术语“同源性”还包括与参比序列相同或类似，同时提供任何氨基酸的简单替换/修饰。可以用BLAST-P(基本局部排比检索工具)，本领域技术人员公知的程序进行该方面的同源性检索。对于相应的核酸序列，同源性涉及在本领域中已知的BLASTX和BLASTN程序。术语“佐剂”指加入到本专利技术的组合物中以增加组合物的免疫原性的物质。已知的佐剂包括，但不限于：(1)氢氧化铝，皂苷(Saponine)(例如QuilA)，阿夫立定，DDA，(2)丙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中，所述结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、2、3、4或SEQ ID NO.5、6、7、8或SEQ ID NO.9、10、11、12或SEQ ID NO.13、14、15、16或SEQ ID NO.17、18、19、20所示。

【技术特征摘要】
1.一种O型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中，所述结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、2、3、4或SEQ ID NO.5、6、7、8或SEQ ID NO.9、10、11、12或SEQ ID NO.13、14、15、16或SEQ ID NO.17、18、19、20所示。2.一种亚洲1型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由亚洲1型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中，所述结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.21、22、23、24所示。3.一种A型口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由A型口蹄疫病毒的结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1构成，其中，所述结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.25、26、27、28或SEQ ID NO.29、30、31、32或SEQ ID NO.33、34、35、36所示。4.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，袁于人，孙进忠，陈红英，肖燕，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，斯澳生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41