【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽药领域，涉及一种胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物及其应用。
技术介绍
1、猪胸膜肺炎(porcine pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(actinobacillus pleuropneumonia，app)引起的猪的一种高度致死性呼吸道传染病，临床症状包括高烧、咳嗽和流鼻涕。
2、胸膜肺炎放线杆菌属于巴氏杆菌科放线杆菌属，为革兰氏阴性球杆菌。根据app表面荚膜和脂多糖抗原性的差异，可将其分为15个血清型，不同血清型间交叉保护性低。在我国流行的血清型有1、2、3、4、5、7、8、9、10，而1、2、4、5、7型为我国流行的优势血清型。
3、目前，疫苗接种是预防app感染的一个非常重要的措施，然而，本病的病原菌血清型和毒力因子众多，不同血清型间没有或仅有微弱的交叉保护，因此研制高效广谱的基因工程亚单位疫苗是预防控制此病的难点和关键。
4、app能够产生多种毒力因子，包括溶血外毒素(apx)、外膜蛋白、脂多糖、转铁结合蛋白、荚膜、菌毛等，其中apx被认为是 app最重要的毒力因子。与此同时，apx也是app主要的免疫原。但是由于细菌的毒素蛋白，分子量一般比较大，往往在100kda以上，人工重组表达纯化往往比较困难，不是不表达、产量低就是形成包涵体，影响免疫原性，且不利于规模化生产。因此，基于毒素蛋白结构域和功能域分析，进行疫苗构建表达策略设计，使其既保留蛋白的免疫原性，又利于表达纯化就至关重要。
5、有鉴于此，特提出本专利技术。
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1、本专利技术的第一目的在于提供一种胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物。
2、本专利技术的第二目的在于提供编码上述胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物的dna片段。
3、本专利技术的第三目的在于提供上述胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物的应用。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗组合物。
5、为实现上述目的，本专利技术提出技术方案如下：
6、一种胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物，包括apxia截短蛋白、apxiia截短蛋白和apxiiia截短蛋白；
7、apxia截短蛋白氨基酸序列如seq id no.2所示；
8、apxiia截短蛋白氨基酸序列如seq id no.4所示；
9、apxiiia截短蛋白氨基酸序列如seq id no.6所示。
10、编码上述胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物的dna片段。
11、进一步地，编码apxia截短蛋白的核苷酸序列如seq id no.1所示；
12、编码apxiia截短蛋白的核苷酸序列如seq id no.3所示；
13、编码apxiiia截短蛋白的核苷酸序列如seq id no.5所示。
14、上述胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物在制备预防胸膜肺炎放线杆菌感染的药物中的应用。
15、一种胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗组合物，包括药学上可接受的载体和本专利技术的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物。
16、进一步地，apxia截短蛋白、apxiia截短蛋白和apxiiia 截短蛋白的质量比为1:1:1。
17、进一步地，apxia截短蛋白的含量为≥50μg/ml，优选为50～200μg/ml；
18、优选地，apxiia截短蛋白的含量为≥50μg/ml，优选为 50～200μg/ml；
19、优选地，apxiiia截短蛋白的含量为≥50μg/ml，优选为 50～200μg/ml。
20、进一步地，药学上可接受的载体包括佐剂、冻干保护剂、免疫刺激剂、抗氧化剂、表面活性剂、着色剂、挥发性油、缓冲剂、分散剂、推进剂和防腐剂中的至少一种；
21、优选地，所述佐剂包括：(1)矿物油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、dda；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及ribi佐剂系统、block co-polymer、saf-m、单磷酰脂质a、avridine脂质-胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、 ims 1314、胞壁酰二肽、montanide isa 206、gel佐剂中的至少一种；
22、皂苷优选为quil a、qs-21、gpi-0100；
23、佐剂含量为5％-60％v/v，优选为30％-60％v/v，更优选为 50％v/v；
24、佐剂优选地为双相佐剂；
25、优选地，冻干保护剂选自糖、多元醇、聚合物、表面活性剂、盐、胺或氨基酸。
26、优选地，免疫刺激剂包括α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子或白介素2。
27、进一步地，所述亚单位疫苗组合物的剂型选自溶液型注射剂、混悬型注射剂、注射用粉末、缓释微球制剂、控释微球制剂或缓控释植入剂，优选为溶液型注射剂、混悬型注射剂或注射用粉末，进一步优选为溶液型注射剂或混悬型注射剂。
28、进一步地，所述亚单位疫苗组合物的给药方式选自皮下注射给药、口服给药、口腔给药、舌下给药、鼻腔给药、肺部给药、结肠给药、直肠给药或透皮给药，优选为皮下注射给药。
29、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
30、通过利用生物信息学软件对胸膜肺炎放线杆菌的apxia、 apxiia和apxiiia蛋白的结构域、功能域以及疏水性进行分析和预测，分别构建不同长度的截短表达蛋白，通过构建策略和表达条件优化获得可溶性蛋白，通过与特异性抗血清的反应性以及动物评价判断其免疫原性，最终获得兼具可溶性表达和广谱保护效果的抗原蛋白组合物。
31、本专利技术提供的抗原蛋白组合物在app所有血清型高度同源，且包含3种毒素成分，可同时涵盖不同血清型app菌株的毒素组合范围，因此能够对不同血清型的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌提供交叉保护。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物，其特征在于，包括ApxIA截短蛋白、ApxIIA截短蛋白和ApxIIIA截短蛋白；
2.编码权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物的DNA片段。
3.根据权利要求2所述的DNA片段，其特征在于，编码ApxIA截短蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
4.权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物在制备预防胸膜肺炎放线杆菌感染的药物中的应用。
5.一种胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物。
6.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，ApxIA截短蛋白、ApxIIA截短蛋白和ApxIIIA截短蛋白的质量比为1:1:1。
7.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，ApxIA截短蛋白的含量为≥50μg/ml，优选为50～200μg/ml；
8.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，药学上可接受的载体包括佐剂、冻干保护剂、免疫刺激剂
9.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，所述亚单位疫苗组合物的剂型选自溶液型注射剂、混悬型注射剂、注射用粉末、缓释微球制剂、控释微球制剂或缓控释植入剂，优选为溶液型注射剂、混悬型注射剂或注射用粉末，进一步优选为溶液型注射剂或混悬型注射剂。
10.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，所述亚单位疫苗组合物的给药方式选自皮下注射给药、口服给药、口腔给药、舌下给药、鼻腔给药、肺部给药、结肠给药、直肠给药或透皮给药，优选为皮下注射给药。
...【技术特征摘要】
1.一种胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物，其特征在于，包括apxia截短蛋白、apxiia截短蛋白和apxiiia截短蛋白；
2.编码权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物的dna片段。
3.根据权利要求2所述的dna片段，其特征在于，编码apxia截短蛋白的核苷酸序列如seq id no.1所示；
4.权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物在制备预防胸膜肺炎放线杆菌感染的药物中的应用。
5.一种胸膜肺炎放线杆菌亚单位疫苗组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体和权利要求1所述的胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白组合物。
6.根据权利要求5所述的亚单位疫苗组合物，其特征在于，apxia截短蛋白、apxiia截短蛋白和apxiiia截短蛋白的质量比为1:1:1。
7.根据权利要求5所述的亚单位疫苗...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王孟月，谷世江，逄文强，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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