非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物、非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，其蛋白抗原由非洲猪瘟病毒p34、p14、C129R、DP96R、A104R、p54、p17、p22、P72、p30蛋白组成，该亚单位疫苗组合物还包括药学上可接受的载体。该亚单位疫苗组合物各抗原组分之间产生了协同增效作用，能产生更强的免疫反应，抗体滴度更高。本发明专利技术还提供了非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合。抗原的组合。

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物、非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合及其应用


[0001]本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及非洲猪瘟病毒亚单 位疫苗组合物、非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV) 引起的一种急性、烈性、高度接触性的传染病，其发病率高，死亡率 更可高达100％，我国将其列为一类动物疫病。该病最早在1921年于 非洲的肯尼亚确认发生，2007年以来，非洲猪瘟在全球多个国家发生、 扩散、流行，2018年传入我国。该病被发现至今近百年，但目前全球 尚无获批疫苗和特效药。
[0003]非洲猪瘟疫苗研发的难点在于病毒基因组大，蛋白多，结构复杂， 且大部分基因功能未知，病毒与宿主细胞相互作用的机制不明确，难 以大规模培养，传代易变异,病毒免疫逃逸机制不清，因此常规灭活疫 苗及减毒活疫苗迄今尚无实质性进展，且减毒活疫苗使用不当存在毒 力返强及散毒的生物安全风险。
[0004]因此，临床上亟需非洲猪瘟疫苗，要求其具有良好的免疫效果， 能有效保护猪，同时没有生物安全的风险。

技术实现思路

[0005]为此，本专利技术通过现代生物学方法，将病原的基因和蛋白进行分 析，并对其免疫保护能力进行检验，进行亚单位疫苗的开发，有效解 决目前各类疫苗免疫效果不理想的问题。
[0006]本专利技术提供一种非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，所述非洲猪瘟 病毒亚单位疫苗组合物的蛋白抗原由多组分蛋白抗原组成，能为猪提 供良好的免疫效力。
[0007]本专利技术还提供所述非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物的应用，所述 应用是指在制备预防非洲猪瘟病毒感染的药物中的应用。
[0008]本专利技术提供非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合，其中，所述非洲猪瘟 病毒蛋白抗原由多组分蛋白抗原组成。所述非洲猪瘟病毒蛋白抗原的 组合共同施用，协同增效，免疫效果良好，有效解决了现有技术中各 类疫苗免疫效果不理想的问题。
[0009]本专利技术还提供所述的非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合的应用，其 中，所述应用是指在制备预防非洲猪瘟病毒感染的药物中的应用。
[0010]本专利技术的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗和蛋白抗原的组合采用多组 分非洲猪瘟病毒蛋白抗原，免疫效果好，有效解决了目前非洲猪瘟病 毒疫苗面临的免疫原性差的问题；所述疫苗组合物可通过基因工程手 段进行大量的表达，不仅耗时短，还可便于大规模生产，无生物安全 风险。
具体实施方式
[0011]以下，对本专利技术的实施方式进行说明。
[0012]定义
[0013]术语“非洲猪瘟病毒”是指非洲猪瘟病毒(ASFV,African swinefever virus)是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)下仅有的种，具有传 染性和极高的致病性，ASFV形态为正二十面体，直径约200纳米， 由多层物质构成：中央为内含拟核的蛋白质核壳，由内向外分别还有 一层脂质包膜和蛋白质衣壳。衣壳由8280个主要的衣壳蛋白p72和 60个戊蛋白构成，此外至少有三种蛋白质通过对临近蛋白的粘连来保 持衣壳结构的稳定，急性病例临床症状以高热、病程短、死亡率高、 内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能紊乱为主要特征。 直至2020年仍未有针对ASFV的特效疫苗或是抗病毒药物可以有效 的在疫情爆发时及时控制病毒的传播。
[0014]术语“非洲猪瘟病毒p34蛋白”、“非洲猪瘟病毒p14蛋白”是指 非洲猪瘟病毒编码一种名为p220的多聚蛋白，该p220多聚蛋白存在 于成熟病毒粒子的核衣壳中，占病毒蛋白总量的30％左右，在病毒组 装和病毒感染中发挥着重要的作用。P220多聚蛋白在蛋白酶的作用 下可有序的裂解为p150、p34、p37和p14。p150、p34、p37和p14 在病毒衣壳的组装过程中起着至关重要的作用，其中，p34、p14属于 p220中重要的结构蛋白，对病毒内核蛋白的包装起着重要的作用。
[0015]术语“非洲猪瘟病毒C129R蛋白”是指锰依赖的超氧化物歧化酶。
[0016]术语“非洲猪瘟病毒DP96R蛋白”是指抑制Ⅰ型IFN表达和NF
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κB活化，又称“pDP96R蛋白”。
[0017]术语“非洲猪瘟病毒A104R蛋白”是指DNA结合蛋白，参与病 毒转录、DNA复制及基因组包装，又称“pA104R蛋白”。
[0018]术语“非洲猪瘟病毒p54蛋白”是指非洲猪瘟病毒表达的早期膜 蛋白，由OR FE183L基因编码，含跨膜结构域，定位于内质网衍生 的内膜前体，在病毒吸附易感细胞和入侵过程中发挥重要作用，是重 要的结构蛋白。
[0019]术语“非洲猪瘟病毒p17蛋白”是指非洲猪瘟病毒表达的晚期膜 蛋白，由ORF D117L基因编码，位于病毒内膜的跨膜蛋白。
[0020]术语“非洲猪瘟病毒p22蛋白”是指非洲猪瘟病毒跨膜结构域， 位于病毒颗粒外部。
[0021]术语“非洲猪瘟病毒P72蛋白”是指产生于病毒感染晚期，由ORFB646L基因编码，为非洲猪瘟病毒重要的抗原蛋白，是病毒二十面体 的主要成分，对于病毒衣壳的形成至关重要。
[0022]术语“非洲猪瘟病毒p30蛋白”是指非洲猪瘟病毒表达的早期膜 蛋白，由ORF CP204L基因编码，通常在感染后2
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4小时产生，在整 个感染期间持续表达，与病毒入侵宿主细胞有关，是重要的结构蛋白。 术语“简并序列”是指同一种氨基酸具有两个或更多个密码子的现象， 这样的序列就叫简并序列。
[0023]术语“抗原(Antigen)”是指能诱导机体发生免疫应答的物质，即 能被T/B淋巴细胞表面的抗原受体(TCR/BCR)特异性识别与结合， 活化T/B细胞，使之增殖分化，产生免疫应答产物(致敏淋巴细胞或 抗体)，并能与相应产物在体内外发生特异性结合的物质。
[0024]本专利技术所用术语“疫苗”、“疫苗组合物”指含有非洲猪瘟病毒蛋白 抗原的药物组合物，该药物组合物可诱发、刺激或增强猪只针对非洲 猪瘟的免疫反应。
[0025]术语“免疫量”应当理解为“免疫有效量”，又称免疫保护量或产生 免疫应答的有效量，为可在接受者体内有效诱导免疫应答的抗原量， 该量足以预防或改善疾病的体征或症状，包括不利的健康影响或其并 发症。所述免疫应答可能足以用于诊断目的或其它试验，或可能适合 用于预防疾病的征兆或症状，包括由病原体引起的感染所造成的不利 的健康结果或其并发症。体液免疫力或由细胞介导的免疫力或此二者 均可被诱导。动物对免疫原性组合物的免疫应答可通过例如测量抗体 效价、淋巴细胞增殖分析而间接评估，或在以野生型毒株攻击后通过 监测征兆或症状来直接评估，而该由疫苗提供的保护性免疫力可通过 测量例如受试者的临床征兆如死亡率、发病率的减少、温度数值、受 试者总体生理状况及总体健康和表现来评估。所述免疫应答可包括但 不限于诱导细胞性和/或体液免疫力。
[0026]术语本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物的蛋白抗原由非洲猪瘟病毒p34、p14、C129R、DP96R、A104R、p54、p17、p22、P72、p30蛋白组成，所述非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物还包括药学上可接受的载体；其中，所述非洲猪瘟病毒p34蛋白为SEQ ID NO.1或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白为SEQ ID NO.2或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白为SEQ ID NO.3或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白为SEQ ID NO.4或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白为SEQ ID NO.5或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白为SEQ ID NO.6或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白为SEQ ID NO.7或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白为SEQ ID NO.8或其简并序列编码；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白为SEQ ID NO.9或其简并序列编码；以及所述非洲猪瘟病毒p30蛋白为SEQ ID NO.10或其简并序列编码。2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物的剂型为溶液型注射剂、混悬型注射剂、或注射用粉末。3.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物的剂型为溶液型注射剂、混悬型注射剂；所述非洲猪瘟病毒p34蛋白含量为≥8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白含量为≥8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白含量为≥8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白含量为≥8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白含量为≥8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白含量为≥12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白含量为≥12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白含量为≥12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白含量为≥12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p30蛋白含量为≥12μg/ml；优选地，所述非洲猪瘟病毒p34蛋白含量为8～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白含量为8～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白含量为8～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白含量为8～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白含量为8～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白含量为12～36μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白含量为12～36μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白含量为12～36μg/ml；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白含量为12～36μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p30蛋白含量为12～36μg/ml；更优选地，所述非洲猪瘟病毒p34蛋白含量为8～16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白含量为8～16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白含量为8～16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白含量为8～16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白含量为8～16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白含量为12～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白含量为12～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白含量为12～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白含量为12～24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p30蛋白含量为12～24μg/ml；进一步优选地，所述非洲猪瘟病毒p34蛋白含量为8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白含量为8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白含量为8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白含量为8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白含量为8μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白含量为12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白含量为12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白含量为12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白含量为12μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p30蛋白含量为12μg/ml；进一步优选地，所述非洲猪瘟病毒p34蛋白含量为16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p14蛋白
含量为16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒C129R蛋白含量为16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒DP96R蛋白含量为16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒A104R蛋白含量为16μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p54蛋白含量为24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p17蛋白含量为24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p22蛋白含量为24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒P72蛋白含量为24μg/ml；所述非洲猪瘟病毒p30蛋白含量为24μg/ml。4.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述药学上可接受的载体包括佐剂，所述佐剂包括：(1)矿物油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Block co
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polymer、SAF
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M、单磷酰脂质A、Avridine脂质
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胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽、MontanideISA206、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为Quil A、QS
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21、GPI
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0100；所述佐剂含量为5％
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60％V/V，优选从30％
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60％V/V，更优选50％V/V；或所述药学上可接受的载体包括冻干保护剂，所述冻干保护剂选自糖、多元醇、聚合物、表面活性剂、盐、胺、或氨基酸。5.根据权利要求1～4任一项所述的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗组合物的应用，其中，所述应用是指在制备预防非洲猪瘟病毒感染的药物中的应用。6.非洲猪瘟病毒蛋白抗原的组合，其中，所述非洲猪瘟病毒蛋白抗原由非...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，逄文强，谭菲菲，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：