EG95抗原蛋白、EG95抗原蛋白基因工程亚单位疫苗、制备方法与应用技术

本发明专利技术通过两次转化，利用抗性基因浓度梯度筛选重组了最优拷贝数的EG95蛋白片段基因的GS115酵母转化子，并通过westernblotting筛选出高表达量的GS115酵母转化子，能高表达量表达EG95蛋白片段。其制备的EG95抗原蛋白基因工程亚单位疫苗免疫效果良好，低蛋白抗原含量时即可保护牛、羊免受棘球蚴虫的感染。羊免受棘球蚴虫的感染。

【技术实现步骤摘要】
EG95抗原蛋白、EG95抗原蛋白基因工程亚单位疫苗、制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种用于预防棘球蚴病的EG95抗原蛋白、基因工程亚单位疫苗、制备方法与应用，属于生物制药领域。

技术介绍

[0002]棘球蚴病(echinococcosis)又称包虫病(hydatid disease)，是由棘球属绦虫的幼虫寄生于人、畜体内引起的一种人畜共患寄生虫病。目前，该病在我国新疆、青海、甘肃、四川、宁夏、内蒙和西藏等地呈严重的地方性流行，有蹄家畜中以牛、羊和猪的患病率最高。棘球蚴虫体较大，生长力强，体内寄生后易压迫周围组织致其萎缩或发生功能障碍，还易造成继发感染；当蚴囊破裂，还可引起过敏反应，甚至死亡，对人民健康和畜牧业的发展危害巨大。
[0003]关于棘球蚴病的防控，通过疫苗免疫来保护牛、羊等中间宿主免受棘球绦虫的感染、阻断其传播途径，是目前最为有效且易推广实施的方法。研究表明，EG95蛋白是一种能够用于预防棘球绦虫感染的保护性抗原。Lightowlers等将EG95蛋白与GST融合表达制备的基因工程亚单位疫苗，能对包虫病能起到很好本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种EG95抗原蛋白的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤(1)重组EG95蛋白片段的基因到酵母表达载体，获得重组EG95蛋白片段基因的酵母表达载体；将所述EG95蛋白片段的基因重组到另一酵母表达载体，获得重组EG95蛋白片段基因的酵母表达载体2，所述酵母表达载体与所述另一酵母表达载体具有不同的抗性基因；步骤(2)制备GS115酵母感受态细胞，获得所述GS115酵母感受态细胞；步骤(3)将所述步骤(1)的所述重组EG95蛋白片段的基因的酵母表达载体线性化，然后电转化到所述步骤(2)的所述GS115酵母感受态细胞，筛选重组了多拷贝数的EG95蛋白片段的基因GS115酵母转化子，进一步筛选能高表达量地表达所述重组EG95蛋白片段的所述重组GS115酵母转化子；步骤(4)将所述步骤(1)的所述重组EG95蛋白片段基因的酵母表达载体2线性化，然后电转化到所述步骤(3)所述筛选的GS115酵母转化子；步骤(5)进一步筛选所述步骤(4)的重组EG95蛋白片段的基因的GS115酵母转化子，以获得高表达量、最优拷贝数的EG95蛋白片段基因的GS115酵母转化子；以及步骤(6)诱导表达所述步骤(5)的所述高表达量的、最优拷贝数的EG95蛋白片段基因的GS115酵母转化子，获得所述EG95抗原蛋白；其中，所述EG95蛋白片段的基因序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述制备方法，其中，所述步骤(1)中所述酵母表达载体为pGAPZαA质粒；所述另一酵母表达载体为pPIC9K载体替换了甘油诱导型GAP启动子的pGAP9K质粒；所述pGAPZαA质粒抗性基因为博来霉素抗性基因；所述pGAP9K质粒抗性基因为G418抗性基因；所述步骤(6)的所述诱导表达的诱导剂为甘油。3.根据权利要求1～2任一项所述制备方法制备的EG95抗原蛋白；所述EG95抗原蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，李鹏昊，黄玉欣，肖燕，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：