一种生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种生产7

【技术实现步骤摘要】
一种生产7
‑
氨基去乙酰氧基头孢烷酸的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种生产7
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氨基去乙酰氧基头孢烷酸的方法。

技术介绍

[0002]7‑
氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7
‑
Aminodesacetoxycephalosporanicacid，7
‑
ADCA)是一种白色或淡黄色的粉末，能够在强酸或者强碱溶液中溶解，但是不溶于有机溶剂。7
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ADCA的分子式为C8H
10
N2O3S，结构式如图1所示。7
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ADCA是重要的β
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内酰胺类抗生素母核，其全球市场需求在4000
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5000万吨。目前采用7
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ADCA合成的药物(如头孢羟氨、头孢拉定、头孢克罗)都是国内外抗生素市场用量较大的抗生素药物。但是合成7
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ADCA的技术有待提高，产量较低，同时在质量上也无法满足市场需求。目前，合成7
‑/>ADCA的方法有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.制备用于生产7
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ADCA的工程菌的方法，包括如下步骤：提高酵母中异青霉素N合酶、酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶和脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的表达量和/或活性，同时导入Symbiodinium microadriaticum来源的pcbAB基因和Aspergillus nidulans来源的npgA基因，从而获得用于生产7
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ADCA的工程菌；所述异青霉素N合酶为如下a1)或a2)或a3)或a4)：a1)氨基酸序列是SEQ ID NO：13所示的蛋白质；a2)在SEQ ID NO：13所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；a3)将a1)或a2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有异青霉素N合酶活性的蛋白质；a4)与a1)或a2)所示的蛋白质具有80％或80％以上同一性，且具有异青霉素N合酶活性的蛋白质；所述酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶为如下b1)或b2)或b3)或b4)：b1)氨基酸序列是SEQ ID NO：14所示的蛋白质；b2)在SEQ ID NO：14所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；b3)将b1)或b2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶活性的蛋白质；b4)与b1)或b2)所示的蛋白质具有80％或80％以上同一性，且具有酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶活性的蛋白质；所述脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶为如下c1)或c2)或c3)或c4)或c5)：c1)氨基酸序列是SEQ ID NO：15所示的蛋白质；c2)氨基酸序列是SEQ ID NO：2所示的蛋白质；c3)在SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；c4)将c1)或c2)或c3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶活性的蛋白质；c5)与c1)或c2)或c3)所示的蛋白质具有80％或80％以上同一性，且具有脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶活性的蛋白质；进一步，所述酵母为啤酒酵母、葡萄汁酵母、汉逊酵母、球拟酵母、假丝酵母、毕赤酵母、红酵母或棉病针酵母；进一步，所述酵母为酿酒酵母BY4741。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提高酵母中异青霉素N合酶、酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶和脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的表达量和/或活性通过向酵母中导入异青霉素N合酶的编码基因、酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶的编码基因和脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的编码基因来实现。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述异青霉素N合酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No：3所示；所述酰基辅酶A:6
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氨基青霉烷酸酰基转移酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No：6
所示；所述脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.12或SEQ ID No：1所示。4.权利要求1至3任一所述方法制备得到的用于生产7
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ADCA的工程菌。5.权利要求4所述工程菌在生产7
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ADCA中的应用。6.一种生产7
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ADCA的方法，包括如下步骤：(1)发酵培养权利要求4所述工程菌，收集发酵菌体；(2)完成步骤(1)后，将所述发酵菌体进行破碎，得到菌体破碎液；之后离心，收集菌体...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙周通，杨大猛，李湘莹，苏文成，蒋迎迎，曲戈，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：