一种利用酿酒酵母工程菌制备10-羟基-2-癸烯酸的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用酿酒酵母工程菌制备10

【技术实现步骤摘要】
一种利用酿酒酵母工程菌制备10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸的方法


[0001]本专利技术涉及一种利用酿酒酵母工程菌制备10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸的方法，属于生物发酵


技术介绍

[0002]10
‑
羟基
‑2‑
癸烯酸(10
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HDA)是一种既含有羟基，又含有羧基，还在α和β碳上有一个不饱和双键的特殊中链脂肪酸。10
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HDA具有抗菌、抗氧化、抗炎、免疫调节和抗肿瘤等独特的性能，具有较高经济价值。在自然界中，这种化学物质只存在于蜂王浆中，是一种独特的、高效的生物活性物质。
[0003]目前市面上10
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HDA的生产方法多采用化学合成法，包括Wittig试剂合成、臭氧化、溴化消除、Knoevenagel缩合、生长碳链合成等。然而化学合成方法容易产生环境污染和反应，且难以控制。因此市面上且尚无法大规模生产10
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HDA，价格昂贵。研究者们致力于研究一种可大规模生产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CYP539A7*
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F0CPR*融合基因在生产10
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羟基
‑2‑
癸烯酸中的应用，所述CYP539A7*
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F0CPR*融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，CYP539A7*
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F0CPR*融合基因在酵母菌发酵生产10
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羟基
‑2‑
癸烯酸中的应用。3.一种生产10
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羟基
‑2‑
癸烯酸的酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：构建含有重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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sil1p、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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crp5p或pJEF3
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CYP539A7*
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F0CPR*的酵母工程菌；所述CYP539A7*
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F0CPR*融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述构建方法中，酵母工程菌使用的宿主酵母菌为酿酒酵母菌株BY4741。5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述构建含有重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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sil1p、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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crp5p或pJEF3
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CYP539A7*
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F0CPR*的酵母工程菌，步骤如下：(i)将基因CYP539A7密码子优化，得到优化后质粒pET28a
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CYP539A7*，以质粒pET28a
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CYP539A7*为模板PCR扩增基因CYP539A7*，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；将基因F0CPR密码子优化，得到优化后质粒pET28a
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F0CPR*，以质粒pET28a
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F0CPR*为模板PCR扩增基因F0CPR*，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；以酿酒酵母基因组为模板PCR扩增辅助基因sil1p，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；以酿酒酵母基因组为模板PCR扩增辅助基因crp5p，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；以重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*为模板PCR扩增融合基因CYP539A7*
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F0CPR*，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；然后将质粒pESC
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URA用BamH I和Xho I进行双酶切；重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*用EcoR I和Cla I进行双酶切；质粒pJEF3
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URA用BamH I和Pst I进行双酶切；所述步骤(i)中CYP539A7*基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，F0CPR*的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，辅助基因sil1p的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，辅助基因crp5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，CYP539A7*
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F0CPR*融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；(ii)将步骤(i)扩增的CYP539A7*、F0CPR*基因片段和酶切后的载体pESC
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URA进行无缝克隆，得到重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*；将步骤(i)扩增的sil1p、crp5p基因片段和酶切后的载体pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*分别进行无缝克隆，得到重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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sil1p、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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crp5p；将步骤(i)扩增的CYP539A7*
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F0CPR*融合基因片段和酶切后的载体pJEF3
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URA进行无缝克隆，得到重组质粒pJEF3
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CYP539A7*
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F0CPR*；(iii)将步骤(ii)的重组质粒pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*、pESC
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URA
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CYP539A7*
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F0CPR*
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sil1p、pESC
...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏静，王蕾蕾，王瑞明，徐子淇，王兆云，刘犇，李丕武，汪俊卿，王婷，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
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