一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法技术

本发明专利技术涉及一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法。本发明专利技术所述的方法包括：(1)每批疫苗每个剂量免疫4～8只Balb/c系小鼠，疫苗免疫剂量可分为1头份，1/2头份，1/4头份三个剂量组，第28天采血，分离血清；(2)通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体，抗体阻断ELISA效价-log10X高于2.0以上，变异系数低于12％，即判为合格。本发明专利技术为口蹄疫灭活疫苗效力检验提供了一种新的方法，通过上述方法免疫Balb/c系小鼠，检测血清可较好的反映疫苗中有效抗原含量，替代本动物免疫攻毒试验。

Method for testing efficacy of foot-and-mouth disease inactivated vaccine

The invention relates to a method for testing the efficacy of a foot-and-mouth disease inactivated vaccine. The method of the invention includes: (1) each batch of vaccine dose 4 ~ 8 immune Balb/c mice, immune dose of vaccine can be divided into 1 parts of head, 1/2 head, 1/4 head of a three dose group, twenty-eighth days of blood, serum separation; (2) by blocking ELISA for detection of FMD the serum specific antibody, antibody blocking ELISA titer of -log10X was more than 2, the variation coefficient is less than 12%, which is acceptable. The present invention provides a new method for the potency test of FMD inactivated vaccine, immune Balb/c mice by the above method, the effective antigen content in serum can reflect the vaccine, replace the animal immunity test.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法。属于动物用生物制品领域。
技术介绍
口蹄疫在许多发展中国家仍然肆虐，引起猪牛羊等主要家畜发病，造成巨大的经济损失。发达国家通过扑杀为主的防控措施有效控制了口蹄疫，对于流行地区和国家主要采取免疫结合扑杀的综合防控措施，其中疫苗免疫是关键一环，疫苗质量是重中之重。检验口蹄疫灭活疫苗质量控制的主要指标有内毒素含量，总蛋白含量，有效抗原含量(146S含量)，在我国已有内毒素含量及总蛋白含量的检测标准。有效抗原含量(146S)被认为是一个比较能够客观反映疫苗质量的重要指标，当前146S含量检测可通过蔗糖密度梯度离心法及高效液相色谱法测定，但无法区分多价疫苗(不同血清型口蹄疫毒株)，因此需研究能反映不同血清型146S含量的检测方法，可通过建立抗原ELISA或使用标准动物免疫检测146S含量。效力检验的目的是检测疫苗的免疫效果，其实质主要反映的是146S含量的高低。效力检验需要使用本动物猪或牛，我国有6家口蹄疫灭活疫苗生产企业，每家企业每年生产几十批至百余批疫苗，每批疫苗效力检验使用动物数18～50头不等，每年总共使用猪和牛数以万计。由于在我国口蹄疫是强制免疫动物疫病，口蹄疫阴性动物极少，造成效力检验动物极度缺乏；同时口蹄疫免疫攻毒还存在生物安全风险，可能造成散毒引起疫病暴发；动物之间个体差异大，对结果影响明显，不能客观的反应疫苗中有效抗原含量；此外要处理大量的动物尸体会造成环境污染；动物实验引发动物福利问题，总之，使用本动物免疫攻毒效力检验方法存在诸多缺点，耗费大量人力财力。因此，口蹄疫灭活疫苗效力替代方法的研究迫在眉睫，国际上阿根廷建立了牛免疫血清抗体水平与免疫攻毒保护之间的相互关系，替代了本动物攻毒检验，并获得了OIE的认可。综合目前口蹄疫灭活疫苗146S含量检测及效力检验存在的问题，进行了相应的研究，并专利技术了一种替代本动物免疫攻毒的效力检验方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对口蹄疫灭活疫苗效力检验存在的缺点，本专利技术提供了一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，使用该方法可对口蹄疫灭活疫苗进行效力检验，反映口蹄疫灭活疫苗的免疫效果，本法用于替代口蹄疫灭活疫苗传统效力检验方法。本专利技术的技术方案1.一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于本专利技术所述的方法是通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体替代本动物免疫攻毒进行口蹄疫灭活疫苗效力检验。2.如权利要求1所述口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于该方法包括：(1)每批疫苗每个剂量免疫4～8只Balb/c系小鼠，疫苗免疫剂量可分为1头份，1/2头份，1/4头份三个剂量组，第28天采血，分离血清；(2)通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体，抗体阻断ELISA效价-log10X高于2.0以上，变异系数低于12％，即判为合格。3.根据权利要求2所述的一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(1)中Balb/c系小鼠为8-9周龄。4.根据权利要求1所述的口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(1)中疫苗可为O型、亚洲I型、A型单价疫苗或二价疫苗或三价疫苗。5.根据权利要求1所述的一种一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，步骤(2)中血清特异性抗体分为O型，Asia1型，A型。具体实施方式1.不同146S含量口蹄疫O型灭活抗原与小鼠免疫血清抗体关系将已知146S含量(64μg/ml)的O型口蹄疫灭活抗原(金宇保灵生物药品有限公司提供)作2倍系列稀释至0.25μg/ml，加入等体积206佐剂(中牧实业股份有限公司兰州生物药厂提供)配制疫苗(疫苗抗原含量--32μg/ml)，每只Balb/c皮下注射免疫0.5ml，每个抗原含量疫苗注射5只小鼠，28天采血分离血清，用液相ELISA试剂盒测定血清效价。血清效价用-log10X表示，计算平均值和标准差，结果如图1所示。每毫升疫苗中抗原含量和抗体产生有相关性，随着抗原含量降低，抗体水平也降低。每毫升疫苗抗原含量大于1μg时，不同免疫小鼠抗体差异小，标准差小于统计学可以接受的12％，但当每毫升疫苗中抗原含量小于0.5μg时，标准差大于12％，不同动物之间离散度加大，测定准确性降低。该方法不仅可以评价抗原，也可以评价佐剂，综合反应疫苗的免疫应答效果。也可以解决不同血清型的问题。2.不同146S含量口蹄疫二价灭活抗原(O型+亚洲I型)与小鼠免疫血清抗体关系疫苗配制：将O型和亚洲I型抗原(均由金宇保灵生物药品有限公司提供)等量混合，分别配制成总抗原含量分别为32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml和2μg/ml的疫苗。每个含量的疫苗免疫5只小鼠，每只0.5ml，免疫后28天采血分离血清，采用液相阻断ELISA测定血清抗体效价。不同抗原浓度的二价疫苗免疫小鼠，分别测定亚洲I型抗体和O型抗体，亚洲I型随着抗原浓度降低，抗体效价逐渐下降，小鼠间变异系数增加。但总抗原含量为4μg或亚洲I型抗原达到2μg，抗体效价位于2.0上下(结果见图2)。3.不同146S含量口蹄疫三价灭活抗原(O型+亚洲I型+A型)与小鼠免疫血清抗体关系口蹄疫三价灭活抗原(O型、亚洲I型和A型)均为金宇保灵生物药品有限公司提供)。按照O型抗原40％，A型抗原30％，Asia1型抗原30％的比例，配制总抗原含量分别为32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml和2μg/ml的疫苗。例如疫苗中总抗原含量为32μg/ml的疫苗，其O型抗原12.8μg/ml疫苗，A型抗原9.6μg/ml疫苗，Asia1抗原9.6μg/ml疫苗。分别免疫5只小鼠，每只0.5ml，免疫后28天采血分离血清，采用液相阻断ELISA测定血清抗体效价。总抗原含量大于4μg/ml疫苗时，抗体可以达到约2.0以上，不同小鼠之间变异系数小于12％，总抗原含量小时，不同小鼠之间抗体变异加大，没有规律性，变异系数超过12％(结果见图3)。本专利技术为口蹄疫灭活疫苗效力检验提供了一种新的方法，通过上述方法免疫Balb/c系小鼠，检测血清可较好的反映疫苗中有效抗原含量，可替代本动物免疫攻毒试验。本专利技术提供了一种口蹄疫灭活疫苗效力检验的替代方法，其方法包括如下：1)每批疫苗每个剂量免疫4～8只Balb/c系小鼠，疫苗免疫剂量可分为1头份，1/2头份，1/4头份三个剂量组，第28天采血，分离血清；2)通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体，抗体阻断ELISA效价-log10X高于2.0<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于本专利技术所述的方法是通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗体替代本动物免疫攻毒进行口蹄疫灭活疫苗效力检验。

【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于本发明所述的方法是通过口蹄疫阻断
ELISA方法检测血清特异性抗体替代本动物免疫攻毒进行口蹄疫灭活疫苗效力检验。
2.如权利要求1所述口蹄疫灭活疫苗效力检验方法，其特征在于该方法包括：(1)每批
疫苗每个剂量免疫4～8只Balb/c系小鼠，疫苗免疫剂量可分为1头份，1/2头份，1/4头份
三个剂量组，第28天采血，分离血清；(2)通过口蹄疫阻断ELISA方法检测血清特异性抗
体，抗体阻...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵启祖，邹兴启，朱元源，王琴，徐璐，范学政，张乾义，丁家波，冯忠武，冯忠泽，印春生，郎洪武，杨劲松，才学鹏，宁宜宝，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京;11